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基于漆酶活性測(cè)量的香菇育種早期篩選技術(shù)研究

發(fā)布時(shí)間:2021-05-15 04:29
  香菇(Lentinula edodes(Berk.)Pegle)口感鮮美,肉質(zhì)細(xì)嫩,含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì),是一種食藥同源的食物。最近十年間,我國香菇的產(chǎn)量增加了70%,在食用菌總產(chǎn)量中的占比也從17%上升到26%。在我國使用過的香菇栽培品種中,一半來源于國外引進(jìn)。單孢雜交是香菇品種產(chǎn)生的主要方法,約有60%的栽培品種通過該方法選育獲得,然而香菇雜交育種中存在的最大障礙是雜交群體中可正常結(jié)實(shí)的菌株比例較低。在菌種培養(yǎng)以及出菇階段都有許多菌株被剔除掉,具有出菇能力的僅占40%。綜合考慮其他農(nóng)藝性狀后,優(yōu)異菌株的比例不足1%。目前香菇育種中后代篩選方法主要還是通過2-3輪的栽培出菇試驗(yàn)進(jìn)行農(nóng)藝性狀觀察并篩選出優(yōu)良個(gè)體。本研究的目的就是通過檢測(cè)菌株在實(shí)驗(yàn)室階段的早期生理生化或分子生物學(xué)特性,獲得一種對(duì)育種群體中可結(jié)實(shí)菌株或優(yōu)良菌株的的早期篩選技術(shù)。漆酶是木質(zhì)素降解酶系中的主體酶,廣泛分布于植物、微生物及食用菌中。在香菇的菌絲、菌皮、轉(zhuǎn)色、原基、幼小子實(shí)體和成熟子實(shí)體階段都檢測(cè)到了漆酶活性,并且同一菌株在不同生長(zhǎng)、發(fā)育階段的酶活高低不同,不同類型的菌株(如廣溫種、低溫種)之間也存在很大的差異。因此... 

【文章來源】:上海海洋大學(xué)上海市

【文章頁數(shù)】:71 頁

【學(xué)位級(jí)別】:碩士

【文章目錄】:
摘要
ABSTRACT
第一章 引言
    1 香菇
        1.1 香菇概述
        1.2 與香菇生長(zhǎng)發(fā)育相關(guān)基因的研究進(jìn)展
        1.3 RNA-Seq技術(shù)在香菇中的應(yīng)用
    2 漆酶
        2.1 真菌漆酶的催化反應(yīng)機(jī)制
        2.2 真菌漆酶誘導(dǎo)機(jī)制的研究
        2.3 漆酶在食用菌中的作用
        2.4 香菇漆酶的研究進(jìn)展
    3 漆酶酶活的分析方法
        3.1 定性分析方法
        3.2 定量分析方法
    4 育種技術(shù)
        4.1 人工選擇育種
        4.2 雜交育種
        4.3 誘變育種
        4.4 原生質(zhì)體融合育種
    5 課題目的意義及研究?jī)?nèi)容
        5.1 課題的目的意義
        5.2 研究?jī)?nèi)容
第二章 材料與方法
    1 供試菌株
    2 主要試劑
        2.1 酶活檢測(cè)中常用試劑
    3 實(shí)驗(yàn)所需培養(yǎng)基
        3.1 菌絲預(yù)培養(yǎng)培養(yǎng)基
        3.2 酶活檢測(cè)培養(yǎng)基的配置
    4 主要儀器
    5 實(shí)驗(yàn)方法
        5.1 不同培養(yǎng)基上的菌株預(yù)培養(yǎng)
        5.2 木屑培養(yǎng)基中粗酶液提取
        5.3 酶活檢測(cè)方法的建立
        5.4 最佳擴(kuò)散反應(yīng)時(shí)間的確定
        5.5 不同培養(yǎng)基上的菌株漆酶活性動(dòng)態(tài)檢測(cè)
        5.6 菌株生長(zhǎng)速度、漆酶酶活、結(jié)實(shí)能力的相關(guān)性分析
        5.7 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)
        5.8 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序及基因表達(dá)分析
        5.9 原生質(zhì)體單核體制備新方法的建立
        5.10 平板接種點(diǎn)數(shù)對(duì)原生質(zhì)體制備的影響
第三章 結(jié)果分析
    1 最佳擴(kuò)散反應(yīng)時(shí)間的確定
    2 無誘導(dǎo)PDA培養(yǎng)基上的漆酶酶活分析
    3 誘導(dǎo)PDA(PDA-VC)上的漆酶酶活分析
    4 木屑培養(yǎng)基上的漆酶酶活分析
    5 供試菌株的漆酶酶活和結(jié)實(shí)能力及出菇性狀的相關(guān)性分析
    6 驗(yàn)證群體的漆酶酶活和結(jié)實(shí)能力及生長(zhǎng)速率的相關(guān)性分析
    7 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序組裝結(jié)果及分析
    8 差異表達(dá)基因統(tǒng)計(jì)分析及GO分析
        8.1 差異表達(dá)基因統(tǒng)計(jì)
        8.2 差異表達(dá)基因的GO富集分析
    9 14個(gè)漆酶同工酶基因在木屑培養(yǎng)料和PDA培養(yǎng)基中表達(dá)水平的分析
    10 不同酶活及結(jié)實(shí)能力中的相關(guān)候選基因表達(dá)水平分析
    11 相同結(jié)實(shí)能力不同酶活的漆酶基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)分析
    12 相同酶活不同結(jié)實(shí)能力的漆酶基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)分析
    13 接種點(diǎn)數(shù)對(duì)原生質(zhì)體得率的影響
第四章 結(jié)論與討論
    1 新建酶活檢測(cè)方法的分析討論
    2 香菇漆酶酶活在不同培養(yǎng)基上的分析討論
    3 香菇漆酶酶活和菌株結(jié)實(shí)能力及出菇性狀相關(guān)性的分析討論
    4 香菇菌絲生長(zhǎng)速率和漆酶酶活和結(jié)實(shí)能力的分析討論
    5 香菇的轉(zhuǎn)錄組學(xué)測(cè)序分析討論
    6 原生質(zhì)體制備方法分析討論
第五章 總結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝


【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]影響真菌漆酶表達(dá)調(diào)控因素的研究進(jìn)展[J]. 王晶晶,李為,胡美.  合肥師范學(xué)院學(xué)報(bào). 2018(03)
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[6]香菇雜交新品種“申香16號(hào)”的選育及示范推廣[J]. 宋春艷,劉德云,尚曉冬,譚琦,項(xiàng)壽南.  食用菌學(xué)報(bào). 2010(04)
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[10]幾種食用菌產(chǎn)木質(zhì)素降解酶類研究[J]. 宋安東,呂洋,尤曉顏,陳剛,裴紅波,湯建華.  中國食用菌. 2005(02)

博士論文
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[2]香菇分子遺傳圖譜構(gòu)建和數(shù)量性狀座位(QTL)分析[D]. 林范學(xué).華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008

碩士論文
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[2]香菇雜交子生物學(xué)特性和基因差異表達(dá)類型的初步研究[D]. 王翔.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[3]幾株食用菌對(duì)秸稈木質(zhì)纖維素降解能力的研究[D]. 孫江慧.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[4]香菇子實(shí)體發(fā)育相關(guān)基因的克隆及分析[D]. 李海峰.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[5]漆酶高產(chǎn)菌株選育及其降解秸稈木質(zhì)素機(jī)理研究[D]. 李春鳳.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
[6]香菇漆酶優(yōu)化培養(yǎng)[D]. 王鼎.武漢工程大學(xué) 2009
[7]野生香菇種質(zhì)資源的評(píng)價(jià)及特異種質(zhì)發(fā)掘[D]. 王春瑩.福建農(nóng)林大學(xué) 2009
[8]真菌漆酶高產(chǎn)菌株的篩選、發(fā)酵及其酶學(xué)性質(zhì)研究[D]. 王劍鋒.西北大學(xué) 2006



本文編號(hào):3186952

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