葡萄作為重要的經(jīng)濟(jì)作物其產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展受到土壤鹽堿化嚴(yán)重束縛,有關(guān)其抗鹽堿性研究開始受到關(guān)注。在鹽堿土中,植物面對的是鹽與堿交混的混合脅迫。植物在鹽堿環(huán)境中最大限度調(diào)節(jié)pH恒穩(wěn)態(tài)（Homeostasis）尤為關(guān)鍵。而位于根細(xì)胞質(zhì)膜上的質(zhì)子泵對此有重要作用。本研究中,我們用抗鹽堿能力較強(qiáng)的克瑞森無核葡萄為材料,以根質(zhì)膜質(zhì)子泵家族成員為目標(biāo),探討葡萄根質(zhì)膜質(zhì)子泵活性及調(diào)控方式隨鹽堿脅迫時(shí)間的變化,并從葡萄根中克隆了1個(gè)響應(yīng)鹽脅迫的基因VvPMA1,測序發(fā)現(xiàn)VvPMA1存在兩種選擇性剪接變體VvPMA1α和VvPMA1β,并對其兩個(gè)剪接變體在植物生長發(fā)育和鹽脅迫下的功能進(jìn)行了探究,主要結(jié)果如下:1.50 mmol/L NaHCO₃（pH 8.0）處理克瑞森無核葡萄3 d,利用定量PCR技術(shù)比較了葡萄質(zhì)膜H⁺-ATPase基因家族各成員在葡萄根、莖、葉、果肉、果皮中的轉(zhuǎn)錄量,并篩選出在根中表達(dá)量高的VvPMA1基因。2.利用RT-PCR技術(shù)從葡萄根中克隆到VvPMA1基因全長。并通過測序發(fā)現(xiàn)VvPMA1存在兩種變體VvPMA1α和VvPMA1β。對V... 

【文章來源】：齊魯工業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 緒論
    1.1 植物與鹽脅迫
        1.1.1 土壤鹽漬化的現(xiàn)狀
        1.1.2 鹽堿脅迫對植物的傷害
        1.1.3 植物的耐鹽機(jī)制
    1.2 植物質(zhì)膜質(zhì)子泵的研究進(jìn)展
        1.2.1 質(zhì)膜質(zhì)子泵的生理功能
        1.2.2 植物細(xì)胞質(zhì)膜H+-ATPase的分子特性
        1.2.3 環(huán)境因子對植物質(zhì)膜H+-ATPase活性的調(diào)控
    1.3 選擇性剪接的研究進(jìn)展
    1.4 本研究的目的意義
第2章 葡萄VvPMA1 選擇性剪接事件發(fā)現(xiàn)及剪接體基因特性分析
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株
        2.1.3 載體
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 植物總RNA的提取
        2.2.2 cDNA第一鏈合成
        2.2.3 熒光定量PCR檢測
        2.2.4 PCR擴(kuò)增
        2.2.5 回收PCR產(chǎn)物
        2.2.6 連接反應(yīng)
        2.2.7 大腸桿菌感受態(tài)的轉(zhuǎn)化
        2.2.8 測序
        2.2.9 質(zhì)粒DNA的提取(采用質(zhì)粒小題試劑盒)
        2.2.10 質(zhì)粒DNA的酶切反應(yīng)
        2.2.11 酵母表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.12 釀酒酵母醋酸鋰轉(zhuǎn)化方法
        2.2.13 VvPMA1α和VvPMA1β的生物信息學(xué)分析
        2.2.14 VvPMA1-PRI-GFP表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.15 VvPMA1-PRI-GFP表達(dá)載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌及瞬時(shí)表達(dá)煙草
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 堿性鹽脅迫下葡萄根VvPMA1表達(dá)量分析
        2.3.2 葡萄VvPMA1基因克隆和序列分析
        2.3.3 VvPMA1基因在鹽脅迫下選擇性剪接事件的驗(yàn)證
        2.3.4 VvPMA1基因啟動(dòng)子序列分析
        2.3.5 葡萄根質(zhì)膜VvPMA1選擇性剪接體的轉(zhuǎn)錄量隨鹽堿脅迫時(shí)間的變化情況
        2.3.6 葡萄根質(zhì)膜VvPMA1蛋白定位分析
        2.3.7 葡萄根質(zhì)膜VvPMA1剪接變體VvPMA1α及VvPMA1β基因功能的初步分析
    2.4 討論
第3章 葡萄VvPMA1選擇性剪接變體VvPMA1α和VvPMA1β轉(zhuǎn)基因株系抗鹽堿性分析
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        3.1.1 植物材料與培養(yǎng)
        3.1.2 野生型擬南芥的侵染
        3.1.3 野生型番茄的侵染
        3.1.4 擬南芥過量表達(dá)陽性株系的篩選及鑒定
        3.1.5 轉(zhuǎn)基因番茄T0 代植株篩選與鑒定
        3.1.6 番茄總DNA的提取
        3.1.7 轉(zhuǎn)基因番茄過量表達(dá)株系Real-time PCR檢測
        3.1.8 轉(zhuǎn)基因植株表型觀察
        3.1.9 VvPMA1α轉(zhuǎn)基因番茄T1 代植株鹽脅迫處理
        3.1.10 VvPMA1α轉(zhuǎn)基因番茄耐鹽性生理指標(biāo)測定
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 過量表達(dá)擬南芥卡那霉素篩選及轉(zhuǎn)錄水平驗(yàn)證
        3.2.2 轉(zhuǎn)基因番茄陽性苗的篩選鑒定
        3.2.3 VvPMA1β轉(zhuǎn)基因擬南芥T0 代植株表型分析
        3.2.4 VvPMA1α和VvPMA1β轉(zhuǎn)基因番茄T0 代植株表型分析
        3.2.5 VvPMA1α轉(zhuǎn)基因番茄T1 代植株表型分析
        3.2.6 VvPMA1α轉(zhuǎn)基因番茄PMA表達(dá)量分析及根質(zhì)子分泌實(shí)驗(yàn)的鑒定
        3.2.7 VvPMA1α轉(zhuǎn)基因番茄植株抗鹽性分析
    3.3 討論
第4章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
在學(xué)期間主要科研成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]鹽堿脅迫對釀酒葡萄“赤霞珠”果實(shí)品質(zhì)形成的影響[J]. 趙攀,李芬,韓偉偉,何熹,趙新節(jié),韓寧.  北方園藝. 2019(02)
[2]NaCl脅迫對耐鹽性不同葡萄株系葉片活性氧代謝及清除系統(tǒng)的影響[J]. 付晴晴,譚雅中,翟衡,杜遠(yuǎn)鵬.  園藝學(xué)報(bào). 2018(01)
[3]Effects of Salt Stress on the Contents of Proline in Different Varieties of Lonicera japonica Thunb.[J]. BAO Ya-jing*, JI Jing, WANG Di, SUN Li College of Life Science, Dalian Nationalities University, Dalian, Liaoning 116600, China.  Medicinal Plant. 2011(02)
[4]根際pH對水稻細(xì)胞膜質(zhì)子泵基因表達(dá)的影響[J]. 沈靜,朱毅勇,徐國華.  中國水稻科學(xué). 2009(04)
[5]植物細(xì)胞質(zhì)膜H+-ATPase的調(diào)控[J]. 賈毅,王伯初,王秀娟,段傳人,陽小成.  植物生理學(xué)通訊. 2002(01)
[6]植物細(xì)胞質(zhì)膜H+-ATPase的結(jié)構(gòu)與功能[J]. 邱全勝.  植物學(xué)通報(bào). 1999(02)

博士論文
[1]鹽地堿蓬膜相關(guān)蛋白及其在耐鹽中的作用[D]. 陳敏.山東師范大學(xué) 2009



本文編號(hào)：3187456