本研究將吉林農(nóng)業(yè)大學菌菜基地工廠化栽培中受到病害侵染的栽培袋期灰樹花(編號為H9、H34)作為研究對象,分離純化出灰樹花菌絲體的病原真菌。根據(jù)病原真菌與抑制細菌之間的相互抑制關(guān)系,篩選出對病原真菌有抑制作用的最佳抑制菌株。并研究了抑制菌株的最佳抑菌條件,最終獲得灰樹花病原真菌的生防菌株。為其在灰樹花規(guī)模化、工廠化生產(chǎn)中的病害防治中的應用提供基礎(chǔ)。其結(jié)果如下:1、感病的灰樹花栽培料中分離出17株病原真菌,其中侵染性病害病原7株,競爭性病害病原10株。根據(jù)其外部形態(tài)特征、病害類型以及分子鑒定,侵染性病害分為木霉屬、鐮孢霉屬2類病原真菌,代表菌株鑒定為:T5 Trichodema atroviride、F1 Fusarium oxysporum;競爭性病害分為青霉屬、枝孢屬2類病原真菌,代表菌株鑒定為P6 Penicillium brevicompactum、G8 Cladosporium uredinicola。2、從灰樹花生境相似的野外采集并分離出細菌399株,放線菌30株。結(jié)合實驗室現(xiàn)有的有益菌株總計細菌564株、放線菌42株。利用平板對峙法篩選出對灰樹花病原真菌生長有抑制效果的菌株,共篩選出3株具有較強抑制效果的細菌,鑒定3株菌株分別為2-1 Burkholderia ambifaria、8-6 Pseudomonas mandelii、5-10 Serratia plymuthica。3、抑制菌作用方式研究結(jié)果表明,抑制菌B.ambifaria、S.plymuthica、P.mandelii在有活性的菌體存在情況下具有穩(wěn)定的抑菌效果,且抑菌效果最佳。抑制菌株最佳抑菌條件的篩選結(jié)果表明:T.atroviride抑制效果最佳抑制菌及抑菌條件是S.plymuthica在PDB培養(yǎng)基培養(yǎng)60 h,P.brevicompactum抑制效果最佳抑制菌及抑菌條件是S.plymuthica在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基培養(yǎng)72 h時;C.uredinicola抑制效果最佳抑制菌及抑菌條件分別為P.mandelii在PDB培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h與S.plymuthica在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基培養(yǎng)72 h。S.plymuthica對灰樹花的三種病原真菌均有較好的抑制效果,說明抑制菌株S.plymuthica具有廣譜的抑制作用,有作為灰樹花病原真菌生防菌株的潛力。
【學位單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2017
【中圖分類】：S436.46;S476
【部分圖文】：

去除病原菌菌株 ITS 序列兩端出現(xiàn)的雜亂的堿基。利用 NCBI 網(wǎng)站（www.nibi.nlm.nih.gov中的 BLAST 程序?qū)⑺械臏y序結(jié)果與 GenBank 中的核酸序列進行同源性比較，查找同源性最高的序列，利用 MEGA6.0 軟件進行鄰接法 Bootstrap method 1000 次構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹1.3 結(jié)果1.3.1 灰樹花病原菌的采集從吉林農(nóng)業(yè)大學菌菜基地栽培的 H9、H34 灰樹花受污染的菌包中發(fā)現(xiàn)灰樹花的菌絲在菌袋中受到病原菌的侵害，導致灰樹花的菌絲不能正常生長（圖 1.1）。其中圖 A 污染的主要特征為發(fā)生在菌袋上端有絨毛狀菌絲產(chǎn)生，在菌絲上端產(chǎn)生黃綠色孢子；圖 B 污染的主要特征為發(fā)生在菌袋上端有致密的絨毛狀菌絲，在套環(huán)下方有綠色孢子產(chǎn)生；圖 C污染的主要特征為發(fā)生在菌袋底部，菌絲稀疏有綠色孢子產(chǎn)生；圖 D 污染的主要特征為發(fā)生在菌袋底部，菌絲較密并產(chǎn)生綠色及墨綠色孢子。

16圖 1.2 菌株 T5、P6、G8 及 F1 對灰樹花 H9、H34 的侵染能力Fig. 1.2 Aggressiveness of strain T5, P6, G8 and F1 on Grifola frondosa H9 and H34注：A1、B1為 T5、F1 對 H9 的侵染能力；C1、D1為 P6、G8 對 H9 的競爭能力；a1、b1為 T5、F1 對 H9 的侵染能力背面；c1、d1為 P6、G8 對 H9 的競爭能力背面；A2、B2為 T5、F1 對 H34 的侵染能力；C2、D2為 P6、G8 對 H34 的競爭能力；a2、b2為 T5、F1 對 H34 的侵染能力背面；c2、d2為 P6、G8 對 H34 的競爭能力背面；1.3.4 灰樹花病原菌的形態(tài)學鑒定通過對病原菌菌落形態(tài)和顯微結(jié)構(gòu)觀察，發(fā)現(xiàn)這些菌株分主要分為 4 大類真菌，多為競爭性雜菌所占比例為 58.8%，現(xiàn)將這 4 類病原菌進行形態(tài)學鑒定。1、侵染性病害（1）研究菌株：T5、T14、T18、T20，代表菌株 T5

菌株 T5 在 PDA 培養(yǎng)基上迅速生長，3 天后直徑為 70-75 mm，5 天后產(chǎn)生孢子。菌絲初期白色，致密較厚，后因其產(chǎn)生分生孢子而先成黃綠色，后為綠色，成同心環(huán)狀產(chǎn)孢，分生孢子梗發(fā)生于基質(zhì)，基部不分枝，初級分枝長度近似相等，分生孢子梗單生，頂端分枝，表面平滑；頂端著生對生的瓶梗，瓶梗大小，近似瓶狀，頂端縊縮，分生孢子聚集成團位于分生孢子梗頂點處；分生孢子壁光滑，橢圓形。（如圖 1.3）根據(jù)其形態(tài)學特征初步鑒定為木霉屬。
【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 祁國彬,孫亞紅,田拴歧;技術(shù)灰樹花栽培新[J];現(xiàn)代農(nóng)業(yè);2002年10期

2 夏志蘭;灰樹花(上)[J];湖南農(nóng)業(yè);2002年05期

3 蔡孝華,范令剛;泰山灰樹花[J];特種經(jīng)濟動植物;2004年12期

4 于榮利,張桂玲,秦旭升;灰樹花研究進展[J];上海農(nóng)業(yè)學報;2005年03期

5 胡光一;姚梅芬;;灰樹花價格下跌交易平淡[J];中國食用菌;2006年05期

6 隆毅;李萬芳;石俊英;;不同產(chǎn)地灰樹花多糖含量測定[J];食品與藥品;2012年09期

7 紀天保;灰樹花生態(tài)環(huán)境考察[J];中國食用菌;1995年01期

8 于田;灰樹花采摘標準[J];中國食用菌;1995年04期

9 紀天保;灰樹花的采摘標準淺見[J];食用菌;1995年04期

10 李韶華;;灰樹花的栽培[J];農(nóng)家之友;1996年11期

相關(guān)博士學位論文 前4條

1 劉偉民;灰樹花(Grifola frondosa)的誘變及新菌株液態(tài)發(fā)酵不加或加硒米糠麩皮全料的研究[D];江蘇大學;2015年

2 張醫(yī)芝;灰樹花菌絲體液體深層發(fā)酵工藝優(yōu)化及降血糖和抗腫瘤活性研究[D];吉林大學;2017年

3 崔鳳杰;灰樹花深層發(fā)酵條件優(yōu)化及其菌絲體抗腫瘤糖肽的研究[D];江南大學;2006年

4 茆廣華;灰樹花子實體富硒及其硒多糖的研究[D];江蘇大學;2014年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 于秋里;灰樹花病原菌的生物防治[D];吉林農(nóng)業(yè)大學;2017年

2 曹秀明;菌草栽培灰樹花基本營養(yǎng)成分分析及其多糖的分離純化[D];福建農(nóng)林大學;2012年

3 韓偉偉;灰樹花菌質(zhì)多糖分離純化及其降血糖功能活性研究[D];福建農(nóng)林大學;2013年

4 陳瀟筱;發(fā)酵環(huán)境影響灰樹花菌絲體生長和多糖合成的研究[D];江蘇大學;2016年

5 宋一鳴;灰樹花工廠化栽培技術(shù)研究[D];福建農(nóng)林大學;2016年

6 楊楊;灰樹花EST-SSR引物開發(fā)及遺傳多樣性研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學;2016年

7 郭健;灰樹花標準菌株庫的建立及優(yōu)良菌株篩選[D];吉林農(nóng)業(yè)大學;2016年

8 朱俊杰;天麻醇提物對灰樹花深層發(fā)酵代謝影響及其機制研究[D];貴州大學;2016年

9 陳鳳美;異抗壞血酸/打孔膜包裝對灰樹花子實體采后保鮮作用及其機理的研究[D];江蘇大學;2017年

10 李心怡;低強交變磁場對灰樹花液態(tài)發(fā)酵促進作用研究[D];江蘇大學;2017年

本文編號：2859758