馬纓杜鵑(Rhododendrondelavayi Franch.)是杜胃鵑屬(Rhododendron)常綠杜鵑亞屬(Subgen.Hymenanthes)的多年生高山木本花卉,具有較高的觀賞和藥用價值,同時作為重要的原始育種親本,具有重要科學(xué)研究與開發(fā)利用價值。迄今,馬纓杜鵑的全基因組序列已經(jīng)發(fā)布,勢必助推杜鵑屬植物在分子生物學(xué)研究領(lǐng)域的快速發(fā)展。然而,有關(guān)基因表達內(nèi)參基因的篩選研究較少,有待進一步充實完善。本研究以馬纓杜鵑為研究對象,選取了 11個在木本植物中的常用候選內(nèi)參基因(GAPDH、Actin、、EF1a、、Tubulina-5、、Ubiquitin、、UEP、、UEC11、UEC2、、TIP41-LIKE FAMILYPROTEIN、Tubulin beta、TATAbindingprotein),采用實時熒光定 PCR技術(shù)分析了這11個候選內(nèi)參基因在馬纓杜鵑成年及幼年植株的不同發(fā)育時期及受干旱脅迫條件下葉片樣品中的表達穩(wěn)定性。綜合內(nèi)參基因穩(wěn)定性評價軟件qBASE和NormFinde的分析結(jié)果,為不同試驗樣品集篩選最佳內(nèi)參基因或組合,研究結(jié)果如下:1.本研究選取設(shè)計的11個常用候選內(nèi)參基因的引物,經(jīng)實時熒光定量PCR檢測,均能在馬纓杜鵑基因組中擴增出相應(yīng)的目的片段,且擴增特異性和擴增效率(94%-106%)均滿足本研究中內(nèi)參基因篩選的要求。2.本研究通過qBASE與NormFinder兩種內(nèi)參基因穩(wěn)定性評價軟件綜合分析11個常用候選內(nèi)參基因在馬纓杜鵑成年植株(成熟葉、花芽、雌蕊、雄蕊及花瓣)與幼年植株樣品集中的表達穩(wěn)定性。研究發(fā)現(xiàn)在成熟葉樣品集中,最適內(nèi)參基因組合為GAPDH+Actin;在花芽樣品集中,最適內(nèi)參基因組合為Tubulin-β+UEC1;在不同花組織器官樣品集中,最適內(nèi)參基因組合為EF1a+Tubulin-β;在馬纓杜鵑成年植株不同組織部位樣品集中,最適內(nèi)參基因組合為UEC1+ GAPDH+ TIP41+UEP 在馬纓杜鵑幼年植株不同組織部位樣品集中,最適內(nèi)參基因組合為GAPDH+ UEC1;在成年與幼年植株所有樣品集中,最適內(nèi)參基因組合為GAPDH+Actin。3.選擇表達穩(wěn)定性較好的內(nèi)參基因GAPDH檢測干旱響應(yīng)基因NCED1在不同干旱脅迫處理時間下的表達情況,發(fā)現(xiàn)NCED1在第9-13天中的表達符合預(yù)期趨勢。在此基礎(chǔ)上,篩選出表達穩(wěn)定性較好的內(nèi)參基因組合為Actin+UEC1表達穩(wěn)定性較差的內(nèi)參基因組合TIP41+UEC2 通過比較兩個內(nèi)參組合在干旱響應(yīng)基因NCED1的表達模式,研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)Actin、UEC1是無論是作為組合還是單個內(nèi)參,NCED1的表達豐度都較高,且符合預(yù)期表達趨勢。以上研究結(jié)果促進馬纓杜鵑關(guān)于內(nèi)參基因研究方面的研究進展,也為其他杜昌鵑屬植物基因表達內(nèi)參基因篩選方面研究提供一定的技術(shù)參考。
【學(xué)位單位】：云南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S685.21
【部分圖文】：

試驗所用馬纓杜鵑成年植株材料采集于金殿風(fēng)景名勝區(qū)生長狀態(tài)良好、花芽??發(fā)育正常的，樹齡達５０年的馬纓杜鵑植株（圖１）；馬纓杜鵑幼株材料取材于云南??省農(nóng)業(yè)科學(xué)研宄院晉寧大春禾試驗基地栽培的３年生盆栽馬纓杜鵑植株（圖２）。??麵??圖１．馬纓杜鵑成年植株??Ｆｉｇｕｒｅ?１．?Ａｄｕｌｔ?ｐｌａｎｔｓ?ｏｆ?Ｒ．ｄｅｌａｖａｙｉ??嘗??圖２．馬纓杜鵑盆栽幼株??Ｆｉｇｕｒｅ?２．?Ｙｏｕｎｇ?ｐｏｔｔｅｄ?ｐｌａｎｔｓ?ｏｆ?Ｒ．ｄｅｌａｖａｙｉ??１０??

２．１．１植物材料??試驗所用馬纓杜鵑成年植株材料采集于金殿風(fēng)景名勝區(qū)生長狀態(tài)良好、花芽??發(fā)育正常的，樹齡達５０年的馬纓杜鵑植株（圖１）；馬纓杜鵑幼株材料取材于云南??省農(nóng)業(yè)科學(xué)研宄院晉寧大春禾試驗基地栽培的３年生盆栽馬纓杜鵑植株（圖２）。??麵??圖１．馬纓杜鵑成年植株??Ｆｉｇｕｒｅ?１．?Ａｄｕｌｔ?ｐｌａｎｔｓ?ｏｆ?Ｒ．ｄｅｌａｖａｙｉ??嘗??圖２．馬纓杜鵑盆栽幼株??Ｆｉｇｕｒｅ?２．?Ｙｏｕｎｇ?ｐｏｔｔｅｄ?ｐｌａｎｔｓ?ｏｆ?Ｒ．ｄｅｌａｖａｙｉ??１０??

第三章結(jié)果分析??３．１馬纓杜鵑總ＲＮＡ的提取??從ＲＮＡ條帶的完整性來看，１％瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示（圖３）：所提取馬??纓杜鵑總ＲＮＡ的１８Ｓ與２８Ｓ兩條帶明亮清晰，無彌散、拖尾現(xiàn)象，且２８Ｓ條帶的??亮度是１８Ｓ條帶亮度的兩倍，說明所提�。遥危镣暾暂^好，無降解；從ＲＮＡ的??純度與濃度來看，經(jīng)超微量紫外分光光度計ＮＤ２０００檢測結(jié)果顯示，馬纓杜鵑總??ＲＮＡ的濃度均在４００？９００ｎｇ／ｎＬ之間，ＯＤ２６?０／２８０的比值在１．８？２．０之間，說明??ＲＮＡ沒有蛋白質(zhì)、ＤＮＡ等污染。綜合ＲＮＡ的完整性與純、濃度結(jié)果來看，所提??�。遥危量捎糜诤罄m(xù)的檢測。??Ｍ?１?２??１０００?ｂｐ?—＾??７５０?ｂｐ???５００?ｂｐ????圖３．?ＫＮＡ瓊脂糖凝膠電泳圖??（注：Ｍ：ＯＤ２０（＞０?ＤＩＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ；丨￣２?為部分馬纓杜鵑?ＲＮＡ）??Ｆｉｇｕｒｅ?３．?Ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｆｏｒ?ＲＮＡ??Ｎｏｔｅ：?Ｍ：?ＯＤ２０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ；?１?？２?ｉｓ?ＲＮＡ?ｏｆ?Ｖ？．辦／ａｖ，“ｊ，／??３．２引物擴增效率及擴增特異性檢測??３．２．１候選內(nèi)參基因與干旱響應(yīng)基因引物的擴增效率檢測??經(jīng)實時熒光定量ＰＣＲ檢測后，如表３所示：各候選內(nèi)參基因的擴增效率均在??９４?％?￣?１０６?％之間
【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 汪蓉;葉向斌;岳保超;劉黽;管璞怡;;外源抗熱劑對馬纓杜鵑抗熱性的影響初探[J];廣東園林;2015年06期

2 縱丹;員濤;李佳蔓;周安佩;胡世俊;何承忠;;馬纓杜鵑不同完整性居群遺傳多樣性的AFLP分析[J];中南林業(yè)科技大學(xué)學(xué)報;2014年09期

3 張玉芳;趙麗娟;曾幼玲;;基因表達研究中內(nèi)參基因的選擇與應(yīng)用[J];植物生理學(xué)報;2014年08期

4 肖政;李紀元;范正琪;殷恒福;;荔波連蕊茶肌動蛋白基因全長cDNA的克隆及其表達分析[J];林業(yè)科學(xué)研究;2014年03期

5 何永明;曾曉春;;開花期水稻穎花實時定量RT-PCR分析中內(nèi)參基因的選擇[J];江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;2012年06期

6 李曉艷;裴嘉博;張志東;吳林;劉海廣;李海燕;李亞東;;越橘VcANS基因的克隆及表達分析[J];西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2012年06期

7 孟玉平;曹秋芬;孫海峰;;棗樹內(nèi)參基因ZjH3的克隆與篩選[J];生物技術(shù)通報;2010年11期

8 洪鯤;張習(xí)敏;乙引;張冬林;陳訓(xùn);高貴龍;;營養(yǎng)元素對馬纓杜鵑花芽發(fā)育和花期的影響[J];北方園藝;2010年21期

9 孫美蓮;王云生;楊冬青;韋朝領(lǐng);高麗萍;夏濤;單育;駱洋;;茶樹實時熒光定量PCR分析中內(nèi)參基因的選擇[J];植物學(xué)報;2010年05期

10 胡瑞波;范成明;傅永福;;植物實時熒光定量PCR內(nèi)參基因的選擇[J];中國農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報;2009年06期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前6條

1 吳林軍;非生物脅迫下毛竹qRT-PCR分析中內(nèi)參基因的選擇[D];浙江農(nóng)林大學(xué);2018年

2 杜改改;柿花性別分化調(diào)控的關(guān)鍵基因篩選及表達模式分析[D];中國林業(yè)科學(xué)研究院;2017年

3 史興青;甜瓜生長發(fā)育和脅迫條件下實時熒光定量PCR內(nèi)參基因的篩選[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

4 胡彥婷;越南篦齒蘇鐵(Cycas elongata)MADS-box基因克隆表達模式分析與內(nèi)參基因篩選[D];華南農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

5 張芳明;甜櫻桃內(nèi)參基因的篩選[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

6 羅曉燕;桃microRNAs鑒定及內(nèi)參基因的篩選[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

本文編號：2842914