采用簡(jiǎn)單重復(fù)序列間區(qū)(ISSR)標(biāo)記技術(shù)和簡(jiǎn)單序列重復(fù)(SSR)標(biāo)記技術(shù),對(duì)采自青海、西藏、四川和云南4個(gè)省的野生全緣葉綠絨蒿16個(gè)居群共185個(gè)個(gè)體的遺傳多樣性、遺傳結(jié)構(gòu)和遺傳距離進(jìn)行了檢測(cè)分析,以期為全緣葉綠絨蒿種質(zhì)資源的保護(hù)和有序開發(fā)利用提供參考。本研究利用Popgen1.32計(jì)算遺傳相似系數(shù)(GS)、Shannon指數(shù)、Nei’s指數(shù);AMOVA進(jìn)行遺傳變異分析;利用MEGA4.0軟件和MVSP軟件,采用UPGMA法分別對(duì)16個(gè)居群和185個(gè)體進(jìn)行聚類分析并構(gòu)建樹狀圖,并用MVSP中的主成分分析(PCA)對(duì)群體的遺傳關(guān)系進(jìn)行聚類分析,最后用TFPGA軟件對(duì)居群間的遺傳距離和地理距離進(jìn)行Mental相關(guān)性檢測(cè)。得出的主要結(jié)論如下:(1)ISSR的21條引物共擴(kuò)增出279個(gè)條帶,平均每條引物擴(kuò)增出13.3個(gè)條帶,其中多態(tài)性條帶278個(gè),條帶在150~2000bp之間均有分布,物種水平上的遺傳多樣性百分比PPB=99.64%,種群水平上的遺傳多樣性百分比PPB比較結(jié)果為:JZWSDDSCDSJLS(=BMXS)YS(=CS=BLS)NMCBYQYLXSHYDRMDKQJYSBM。(2)ISSR的遺傳多樣性結(jié)果顯示:全緣葉綠絨蒿不同居群的Nei’s基因多樣性指數(shù)(He)范圍在0.0520~0.2083之間,Shannon’s多樣性信息指數(shù)(I)在0.0795~0.3134范圍內(nèi);有效等位基因數(shù)(Ne)的平均值為1.6769,觀測(cè)等位基因數(shù)(Na)平均值為1.9964,二者的比值為84.00%,說明全緣葉綠絨蒿ISSR標(biāo)記有很高的遺傳多樣性。比較遺傳參數(shù)后發(fā)現(xiàn),居群BLS的遺傳多樣性最高,居群BM的遺傳多樣性最低。遺傳分化系數(shù)(Gst)為0.6197,表明遺傳變異主要存在于種群間,為61.97%。分子變異(AMOVA)分析結(jié)果也同樣顯示,全緣葉綠絨蒿的主要遺傳變異存在于種群間(占59.949%)。(3)在用ISSR計(jì)算得到的遺傳距離對(duì)全緣葉綠絨蒿不同居群進(jìn)行UPGMA聚類時(shí),居群(BM)首先分離為一枝,與其他居群聚為第Ⅳ類;居群(DDS)與居群(CD)聚為一枝,與四川理塘剪子彎山居群(JZWS)聚為第Ⅱ類;居群(YS)與居群(CS)聚為一枝,與居群(SJLS)聚為第Ⅲ類;居群(NMC)與居群(MDK)為一枝,居群(BLS)與居群(DR)聚為一枝,與居群(BYQ)、居群(HY)、居群(BMXS)、居群(QJYS)、居群(YLXS)聚為第I類。(4)SSR的23對(duì)引物共檢測(cè)到84個(gè)條帶,平均每對(duì)引物擴(kuò)增出3.7個(gè)條帶,其中多態(tài)性條帶77個(gè),條帶主要分布在100~220bp之間,物種水平上遺傳多樣性百分比PPB=91.67%,種群水平上的遺傳多樣性百分比PPB比較結(jié)果為:BLSBMXSMDKDRJZWSBYQSJLSHYDDS(=CD)QJYSYSNMCYLXSCSBM。(5)SSR的遺傳多樣性結(jié)果顯示:16個(gè)居群的Nei’s基因多樣性指數(shù)(He)范圍為0.0226~0.1603,Shannon’s多樣性信息指數(shù)(I)的范圍為0.0334~0.2436;有效等位基因數(shù)(Ne)的平均值為1.5037,觀測(cè)等位基因數(shù)(Na)平均值為1.9167,二者之比為78.45%,說明SSR作為分析全緣葉綠絨蒿遺傳多樣性的分子標(biāo)記是可行的。比較遺傳參數(shù)后發(fā)現(xiàn),居群JZWS的遺傳多樣性最高,居群BM的遺傳多樣性最低。遺傳分化系數(shù)(Gst)為0.6902,表明遺傳變異主要存在于種群間,為69.02%。分子變異(AMOVA)分析結(jié)果也同樣顯示,全緣葉綠絨蒿的主要遺傳變異存在于種群間(占63.38669%)。(6)在用SSR計(jì)算得到的遺傳距離對(duì)全緣葉綠絨蒿不同居群進(jìn)行UPGMA聚類時(shí),居群(BM)首先分離為一枝,與其他居群聚為第Ⅳ類;居群(BYQ)與居群(YLXS)聚為一枝、居群(MDK)與居群(QJYS)聚為一枝,與居群(NMC)聚為第Ⅰ類;居群(HY)與居群(BLS)為一枝,與居群(DR)聚為第Ⅱ類;居群(DDS)與居群(CD)聚為一枝,與居群(BMXS)、居群(SJLS)、居群(JZWS)、居群(YS)、居群(CS)聚為第Ⅲ類。(7)ISSR和SSR標(biāo)記計(jì)算出的種群間基因流(Nm)值分別為0.3069和0.2244,均小于1,說明遺傳漂變?cè)谌壢~綠絨蒿16個(gè)居群間的遺傳分化中所起作用較大。利用TFPGA對(duì)基于ISSR和SSR標(biāo)記的遺傳距離,與地理距離之間進(jìn)行Mental相關(guān)性檢驗(yàn),兩種標(biāo)記計(jì)算結(jié)果顯示P值均大于0.05,說明遺傳距離與地理距離間相關(guān)性不顯著,地理距離對(duì)居群間的遺傳分化沒有明顯影響。
【學(xué)位單位】：西南林業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S68
【部分圖文】：

圖 2-1 全緣葉綠絨蒿的取樣點(diǎn)位置Fig.2-1 Sampling point geographical location of M.integrifolia器設(shè)備勻漿機(jī)、自動(dòng)高壓滅菌鍋、電子天平、渦旋混合器、恒溫水浴鍋制冰機(jī)、移液槍、量筒、燒杯、微波爐、臺(tái)式高速冷凍多功能離純水機(jī)、Nano Drop 2000 紫外分光光度計(jì)、Eppendorf 梯度 PC成像系統(tǒng)、DYY~6C 型電泳儀（北京六一）、DYCP-33A 型電泳JY-SCZ2+型垂直電泳儀（北京君意）、JY-JX5 型垂直電泳儀（00C 型電泳儀（北京君意）等。劑要試劑 提取試劑：液氮、2% CTAB 溶液、10% CTAB 溶液、0.5M EDTA

圖 3-1 4 種方法提取DNA的凝膠電泳圖Fig.3-1 Electrophoresis of DNA extracted by four methods盒法、改良的 CTAB 法和擎科試劑盒法提取的 DNA下游 PCR 試驗(yàn)的要求，但根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果和試驗(yàn)的簡(jiǎn)n 試劑盒法的 DNA 提取成本最高，改良的 CTAB 法的本研究選擇采用擎科試劑盒法進(jìn)行全緣葉綠絨蒿的 泳檢測(cè)結(jié)果如下圖 3-2 所示。

圖 3-1 4 種方法提取DNA的凝膠電泳圖Fig.3-1 Electrophoresis of DNA extracted by four methodsQiagen 試劑盒法、改良的 CTAB 法和擎科試劑盒法提取的 DNA，在濃度和純度上均能滿足下游 PCR 試驗(yàn)的要求，但根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果和試驗(yàn)的簡(jiǎn)易性、經(jīng)濟(jì)性原則，Qiagen 試劑盒法的 DNA 提取成本最高，改良的 CTAB 法的 DNA 提取時(shí)間最長(zhǎng)，因此本研究選擇采用擎科試劑盒法進(jìn)行全緣葉綠絨蒿的 DNA 提取，提取的 DNA 電泳檢測(cè)結(jié)果如下圖 3-2 所示。

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2 楊e

本文編號(hào)：2824271