【摘要】：露地菊(Chrysanthemum×grandiflora)因花期長,花多而密,花色鮮艷,具有較強的抗逆性等特點成為近幾年逐漸興起的城市綠化地被植物。目前的研究主要集中在提高露地菊的園藝觀賞性,隨著城市環(huán)境的日益惡化,提高露地菊的抗逆性以適應惡劣的空氣和土壤環(huán)境,擴大露地菊在城市園林綠化中的應用范圍尤為重要。本文對轉基因露地菊‘紐9717’進行Northern blot分析后,對其進行干旱脅迫,從形態(tài)觀察、生理指標和光合及熒光特性三個方面對轉基因露地菊‘紐9717’進行干旱耐性分析。主要研究結果如下:1.對轉ClNAC9基因露地菊‘紐9717’進行了Northern雜交檢測和分析。利用地高辛標記物合成雜交差異探針,運用CTAB法對野生型植株和轉基因植株提取RNA,檢測總RNA純度和質量,經(jīng)過甲醛變性凝膠電泳,轉膜過夜,雜交、洗膜和CDP-star顯色等過程驗證ClNAC9基因成功轉入‘ClNAC9-5’、‘ClNAC9-6’和‘ClNAC9-13’三個株系并表達。2.對野生型和轉基因三個株系露地菊進行15d干旱脅迫,對期間露地菊的生長形態(tài)和生理指標變化進行觀察測定。隨著干旱脅迫時間的延長,野生型較轉基因株系在水分缺失的情況下萎蔫進程更快,轉基因株系對干旱脅迫抗性較野生型明顯得到提高。隨著干旱時間的延長,露地菊的生理指標出現(xiàn)如下變化:葉片相對含水量和葉綠素含量大幅下降,可溶性蛋白含量先升高后降低,MDA含量大幅度升高,SOD、POD、CAT活性隨著脅迫時間的增加均呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢。脅迫過程中轉基因株系葉綠素含量和相對含水量下降幅度小于野生型,野生型植株MDA含量上升幅度和最大值顯著高于轉基因株系,轉基因植株的SOD、POD、CAT活性均顯著高于野生型植株。通過對形態(tài)的觀察和生理指標的測定、統(tǒng)計分析,可知轉入ClNAC9基因增強了露地菊對干旱脅迫的耐受性。3.對野生型和轉基因三個株系露地菊‘紐9717’進行持續(xù)15d自然失水的干旱脅迫,在未脅迫、干旱脅迫第5d、10d、15d分別測定各株系植株的光合生理指標。在干旱過程中,野生型的氣孔導度、蒸騰速率、凈光合速率、水分利用率下降幅度均明顯高于轉基因株系,最小值均低于轉基因株系。通過對各光合生理指標的測定及數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析,轉入的ClNAC9基因明顯增強了露地菊對干旱脅迫的抗性。4.自然干旱脅迫15d對野生型露地菊‘紐9717’和三個轉基因株系葉綠素熒光參數(shù)的影響如下:未進行干旱時野生型和轉基因三個株系植株的各葉綠素熒光參數(shù)相差不多,轉基因株系ClNAC9-6和ClNAC9-13的非光化學猝滅系數(shù)qN較高。野生型和轉基因株系ClNAC9-13的初始熒光Fo在整個干旱過程中呈現(xiàn)先下降后升高的趨勢,Fm和Fv持續(xù)降低,ClNAC9-13的Fm和Fv高于野生型,ClNAC9-5和ClNAC9-6的Fo、Fm和Fv在干旱過程中先下降后上升,說明這兩個株系的耐旱能力較強;野生型和轉基因三個株系的Fv/Fm和Fv/Fo均表現(xiàn)出先上升再下降的趨勢,野生型Fv/Fm和Fv/Fo比值較低,下降幅度較大;野生型的qP持續(xù)下降,qN呈現(xiàn)先下降再升高的趨勢,轉基因三個株系植株的qP先下降再升高,轉基因株系ClNAC9-5和ClNAC9-13的qN一直上升,ClNAC9-6先升高再降低。通過數(shù)據(jù)的測定及統(tǒng)計分析,可知轉基因株系ClNAC9-13對干旱的抗性強于野生型,弱于ClNAC9-5和ClNAC9-6。轉入的ClNAC9基因明顯增強了露地菊對干旱脅迫的抗性。
【學位授予單位】：東北林業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S682.11
【圖文】：

放入雜交箱雜交 16-24h。膜：0.1%SDS、2×SSC 混勻，室溫搖洗 68℃搖洗 15min，洗兩次；Maleic acid，室顯色膜正面朝上放入 1.5%blocking 中，室溫輕搖膜取出，放入以 1:10000 比例加入抗體的膜轉入 1.5%blocking 中，室溫輕搖 1h。ween-20 用 Maleic acid 稀釋為 0.3%，室溫漂溫下用檢出液漂洗 5min。ml 檢測液、2μl CDP-star 混勻，加到尼龍膜分析AC9 基因檢測差異探針的標記

東北林業(yè)大學碩士學位論文 的提取露地菊‘紐 9717’的野生型（WT）和三個轉和‘ClNAC9-13’，每個植株為獨立樣本分別于露地菊屬于多糖多酚植物，Northern 雜交對 CTAB 法提取 RNA。提取完成后分別取 3μl 樣-2，條帶較為清晰，明亮，說明提取的總 RNA定四個樣品純度分別為 1.78、1.86、2.01、1.9orthern 雜交 1.8-2.0 的最適純度，可以進行下一WT ClNAC9-5 ClNAC9-6 ClNAC9-13

圖 2-2 露地菊葉片總 RNA 電泳圖gel electrophoresis of total RNA in leaves of Chrysanthemum×地菊的 Northern blot 分析AC9 基因在露地菊‘紐 9717’中的表達情況，對露三個轉基因株系‘ClNAC9-5’、‘ClNAC9-6’和析。提取質量良好的總 RNA 后，為消除 RNA 中的排列并且變性為分子雜交準備，對總 RNA 進行甲針進行雜交檢測，轉基因株系雜交條帶較為清晰（NA 水平有表達信號，對照組露地菊 WT 沒有雜錄水平表達。WT ClNAC9-6 ClNAC9-13 WT ClNAC9-5C9

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