【摘要】：番茄青枯病作為一種世界范圍內的毀滅性土傳病害,對我國番茄生產造成了巨大的損失,因此,迫切需要探索有效防控番茄青枯病的措施。生物防控作為控制植物病害的有效措施,近年來受到人們的高度重視。放線菌作為活性天然物質和藥物的主要微生物來源,是人們最早研究并應用到生產實踐中的生防微生物。許多研究表明,拮抗微生物和有機肥料結合制備的生物有機肥比單一的拮抗微生物菌劑能更有效地防控植物土傳病害。本研究從多年連作的番茄根際土壤中分離篩選得到一株對番茄青枯菌(R.solanacearum ZJ3721)(簡稱青枯菌)具有顯著抑制作用的放線菌菌株,對其進行鑒定,優(yōu)化發(fā)酵條件,并制備放線菌生物有機肥,驗證其對番茄青枯病的實際防控效果。主要研究結果如下:1.采取江蘇省南京市麒麟鎮(zhèn)的番茄連作土壤樣品,以本實驗室保存的番茄青枯菌R.solanacearum ZJ3721為指示菌,初篩分離純化得到6株對番茄青枯病菌有較好拮抗效果的放線菌菌株,分別編號為F5、F6、F14、F18、F27、F41,其中菌株F6、F18表現(xiàn)出最強的抑菌作用。通過比較各菌株發(fā)酵濾液對番茄青枯菌的抑菌作用進行復篩,選擇菌株F18作為實驗菌株。菌株F18除對番茄青枯菌具有抑制作用之外,還對大麗輪枝菌,煙草根腐病病原菌,黃瓜、棉花、香蕉枯萎病菌均具有較強的抑制作用。2.通過對放線菌F18的形態(tài)及培養(yǎng)特征觀察、生理生化特性測定,以及16SrRNA基因序列分析,菌株F18屬于鏈霉菌屬Streptomyces。3.通過對菌株F18液體發(fā)酵培養(yǎng)基成分和發(fā)酵條件進行優(yōu)化發(fā)現(xiàn),最適培養(yǎng)基成分為:可溶性淀粉 1%,大豆蛋白胨 0.4%,K2HPO4 0.05%,MgS04 0.05%,NaCl 0.05%,FeS040.01‰。使用有機氮源的發(fā)酵液比使用無機氮源表現(xiàn)出更強的抑菌活性。最適發(fā)酵條件為:pH8;培養(yǎng)溫度28℃;裝液量65mL/250mL;接種量6%;搖床轉速180rpm;發(fā)酵時間132h。發(fā)酵條件優(yōu)化后培養(yǎng)得到的發(fā)酵濾液對番茄青枯菌的抑菌能力進一步提高。菌株F18產生的抑菌活性物質主要為胞外代謝產物,水溶性強,可溶于甲醇和乙醇,難溶于其他有機溶劑。4.本試驗研究發(fā)現(xiàn)加入體積質量比為10%的氨基酸酸解液的有機肥有利于菌株F18的生長繁殖和抑菌活性物質的產生,在堆肥中加入氨基酸酸解液5天后接入F18菌懸液,菌株F18的生長狀況最好。盆栽和田間試驗結果表明,氨基酸有機肥有利于菌株F18在土壤中的定殖,含有菌株F18的生物有機肥對青枯菌具有一定的抑制作用,并對植物生長具有一定的促進作用,對番茄青枯病表現(xiàn)出較好的防控效果,且防控效果優(yōu)于單純向土壤里灌施F18菌懸液。
【圖文】：

圖１－１技術路線逡逑Ｆｉｇ．邋１－１邋Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ邋Ｒｏａｄｍａｐ逡逑

．２菌株Ｆ１８對病原菌的抑制效果測定逡逑采用對峙培養(yǎng)法觀察測定Ｆ１８菌株對病原菌的抑制效果。將Ｆ１８菌株和病原分別涂布在ＰＤＡ平板上，于２８°Ｃ恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)７ｄ。分別用直徑為５ｍｍ器制成相同大小的菌塊，，將拮抗放線菌Ｆ１８菌塊接種于ＰＤＡ平板中央，再將原菌以每皿３個菌塊的數(shù)量接種于放線菌Ｆ１８菌塊一定距離的周圍，于２８°Ｃ養(yǎng)箱倒]培養(yǎng)７？１０ｄ．觀察測定菌株所產的抑菌圈ｍ徑大小。逡逑結果分析逡逑１拮抗放線菌的初篩逡逑分離純化得到６株對番茄青枯病菌有比較好拮抗效果的放線菌菌株，分別編、Ｆ６、Ｆ１４、Ｆ１８、Ｆ２７、Ｆ４１，其中邋Ｆ６、Ｆ１８、Ｆ２７、Ｆ４１邋來源于番茄根際土壤，兩株則來源于番茄十．體十。逡逑
【學位授予單位】：南京農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S436.412.15

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本文編號：2654723