【摘要】：草莓(Fragaria ananassa Duchesne)自從國外引進,由于其口感好,富含多種營養(yǎng)物質(zhì),又加上栽培周期短、結(jié)果實多、經(jīng)濟效益高,近幾年來在我國取得了迅猛發(fā)展,尤其是山東等北方地區(qū)。但草莓容易遭受葉斑病、白粉病等多種病害的嚴重威脅,制約了其發(fā)展。植物根際促生菌(Plant growth-promoting rhizobacteria,PGPR)一方面能夠分泌產(chǎn)生一些促進植物生長的激素(如生長素等)來直接促進植株生長;另一方面可以通過產(chǎn)生抗菌物質(zhì)抑制病原菌的生長,從而減緩植物病害對植物生長不利的影響。利用PGPR菌株促進草莓植株的生長及抑制其病害威脅,促進草莓植株生長,提高草莓的經(jīng)濟效益。本研究通過在草莓和非洲菊根際篩選有產(chǎn)蛋白酶能力、解磷能力、產(chǎn)IAA能力、解鉀能力、產(chǎn)鐵載體能力、拮抗病原菌能力的細菌,進行鑒定;并從中篩選效果好的細菌進行培養(yǎng)基優(yōu)化,進一步應(yīng)用于草莓植株盆栽試驗驗證其促生效果,為草莓微生物肥料的研制和應(yīng)用提供基礎(chǔ),主要研究結(jié)果如下。從草莓和非洲菊根際共篩選到產(chǎn)蛋白酶能力的菌56株、解磷能力的菌6株、產(chǎn)IAA能力的菌10株、解鉀能力的菌17株、產(chǎn)鐵載體能力的菌39株。經(jīng)功能篩選從中選取4株效果好的菌株通過菌體菌落形態(tài)觀察、生理生化實驗、16S rDNA序列分析進行鑒定,鑒定K1為西姆芽孢桿菌(Bacillus siamensis)、KFH3為貝萊斯芽孢桿菌(Bacillus velezensis)、FJ06-10為皺褶假單胞菌(Pseudomonas corrugata)、CT1-7為氣單胞菌(Aeromonas aquariorum)。對這四株菌進行培養(yǎng)基優(yōu)化,以添加2%葡萄糖的豆芽汁培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,通過單因素試驗,將CT1-7的最優(yōu)碳源確定為米糠,最優(yōu)氮源為硝酸銨,最優(yōu)無機鹽為磷酸氫二鉀;FJ06-10的最優(yōu)碳源確定為麥麩,最優(yōu)氮源為豆粕,最優(yōu)無機鹽為碳酸鈣;K1的最優(yōu)碳源確定為蔗糖,最優(yōu)氮源為豆粕,最優(yōu)無機鹽為磷酸氫二鉀;KFH3最優(yōu)碳源確定為蔗糖,最優(yōu)氮源為硫酸銨,最優(yōu)無機鹽為磷酸氫二鉀。再進行正交試驗確定最佳培養(yǎng)基配方,結(jié)果為:CT1-7最優(yōu)的培養(yǎng)基配比是米糠3%,硝酸銨1.5%,磷酸氫二鉀0.3%;FJ06-10最優(yōu)的培養(yǎng)基配比是麥麩3%,豆粕1.5%,碳酸鈣0.3%;K1最優(yōu)的培養(yǎng)基配比是蔗糖3%,豆粕1.5%,磷酸氫二鉀0.3%;KFH3最優(yōu)的培養(yǎng)基配比是蔗糖3%,硫酸銨1.5%,磷酸氫二鉀0.3%。通過應(yīng)用潛力評價研究單一菌株的應(yīng)用效果。試驗設(shè)四個處理,其中接種K1為處理1;接種KFH3為處理2;接種FJ06-10為處理3;接種CT1-7為處理4,以不施菌處理CK作為對照,測定菌劑對草莓葉片酶活、植株重量、根際土壤酶活的影響。結(jié)果表明:K1、KFH3、FJ06-10、CT1-7這四個菌對草莓苗期的生長都有促進作用。與CK相比,草莓植株的鮮重和干重都達到了顯著性差異,地草莓植株的干重分別提高了18%、104%、76%、81%,其中地上部分分別提高了23%、128%、82%、95%,地下部分分別提高了6%、76%、63%、61%。土壤中的蔗糖酶、脲酶、過氧化氫酶四個處理都比對照酶活提高了,50天時,葉片中的過氧化氫酶和丙二醛活性四個處理均能與對照CK達到極顯著性差異(p0.01),處理2、4的超氧化物歧化酶與對照CK達到極顯著性差異(p0.01),與處理1有顯著性差異(p0.05),過氧化物酶活性CK與處理1有顯著性差異(p0.05),與處理4夠達到極顯著性差異(p0.01),說明提高了土壤肥力。
【圖文】：

3 結(jié)果與分析3.1 病原菌的分離鑒定結(jié)果圖3-1 病原菌形態(tài)及鏡檢照片F(xiàn)ig. 3-1 Pathogen morphology and microscopic photos如圖 3-1 所示，用顯微鏡鏡檢，病原菌的形態(tài)與鏈格孢菌形態(tài)一致。分生孢子器為扁球形多腔，孔口部稍微突起，褐色至黑褐色，散生或聚生。又經(jīng) ITS 序列測序結(jié)果鑒定該菌為鏈格孢菌。經(jīng)查找文獻，鏈格孢菌能夠引起多種植物的葉片發(fā)生病變，造成葉斑病等。所以，以此菌為指示菌，進行下一步的實驗。3.2 根際細菌的分離篩選結(jié)果3.2.1 根際細菌的分離結(jié)果從涂布得到的平板上挑去單菌落，進行劃線純化，得到單菌落后再挑取單菌落進行劃線，如此重復數(shù)次，分離得到 86 株菌，編號如下：非洲菊土樣 1：FJ04-1~FJ04-8。非洲菊土樣 2：FJ05-1~FJ05-10。非洲菊土樣 3：FJ06-1~FJ06-12。非洲菊土樣 4：FJ07-1~FJ07-14。草莓土樣 1：CT1-1~CT1-7

經(jīng)初篩得到得到 56 株產(chǎn)蛋白酶性狀較好的菌株，在脫脂奶粉培養(yǎng)基上進行復篩測定酶活性，經(jīng) 37°C 培養(yǎng) 72h 后，結(jié)果見圖 3-2，這 56 株菌產(chǎn)酶性質(zhì)優(yōu)良穩(wěn)定。圖3-2 菌株解蛋白能力結(jié)果圖Fig. 3-2 Results of proteolytic protein復篩獲得的產(chǎn)蛋白酶能力優(yōu)良的菌株，對其產(chǎn)生的透明圈及菌落直徑進行測量，測量透明圈與菌落直徑比（HC）值的大小，，測量結(jié)果見表 3-1。
【學位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S668.4

【參考文獻】

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本文編號：2654714