溫度依賴型性別決定（temperature-dependent sex determination,TSD）是一種典型的表型可塑性現(xiàn)象,主要存在于一些爬行動物中,例如紅耳龜（Trachemys scripta）、密西西比鱷魚（Alligator mississippiensis）、豹紋守宮（Eublepharis macularius）等。這類爬行動物沒有性染色體、根據(jù)孵化溫度范圍來決定個體性別,其中,紅耳龜能在較小的孵化溫度范圍（26℃～32℃）內(nèi)產(chǎn)出不同性別比率的后代。不同于研究較深入的基因型性別決定（genetic sex determination,GSD）(主要存在于哺乳動物和鳥類),TSD的機(jī)制研究較為膚淺,許多謎團(tuán)未被破解。本文對紅耳龜性別決定機(jī)理展開研究,15期之前紅耳龜性腺并未形成,隨著性腺發(fā)育至熱敏期（15-19期,也稱性別決定時期）時,呈現(xiàn)出溫度依賴性差異表達(dá)模式（如Dmrt1、Sox9、AMH等基因）。Foxl2作為一個遍布脊椎動物各門間高度保守的雌性基因,許多研究僅檢測了Foxl2的表達(dá)模式,并未進(jìn)行功能研究。本研究通過對紅耳龜早期胚胎性腺進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序分析,篩...

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
引言
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 脊椎動物類性別決定
        1.1.1 哺乳動物類性別決定
        1.1.2 鳥類性別決定
        1.1.3 爬行動物類性別決定
        1.1.4 兩棲動物類性別決定
        1.1.5 魚類性別決定
    1.2 Foxl2在脊椎動物性別決定中的研究進(jìn)展
    1.3 Foxl2在爬行動物中的研究進(jìn)展
    1.4 本研究目的和意義
第二章 紅耳龜性腺轉(zhuǎn)錄組分析
    2.1 實驗材料與方法
        2.1.1 實驗儀器和主要試劑
        2.1.2 實驗材料
        2.1.3 實驗方法
            2.1.3.1 性腺組織RNA提取、cDNA文庫構(gòu)建及測序
            2.1.3.2 測序數(shù)據(jù)質(zhì)量評估分析
            2.1.3.3 基因表達(dá)水平的量化
            2.1.3.4 差異表達(dá)分析
            2.1.3.5 差異表達(dá)基因GO富集分析
            2.1.3.6 KEGG通路富集分析
            2.1.3.7 性別決定和性別分化相關(guān)基因的篩選
            2.1.3.8 部分性別發(fā)育相關(guān)基因的驗證
    2.2 實驗結(jié)果
        2.2.1 測序數(shù)據(jù)質(zhì)量評估
        2.2.3 差異表達(dá)基因分析
        2.2.4 性腺差異表達(dá)基因GO富集、KEGG分析
        2.2.5 篩選性別決定和性別分化相關(guān)基因
        2.2.6 部分性別發(fā)育相關(guān)基因的驗證
    2.3 討論
第三章 紅耳龜Foxl2 基因的cDNA克隆和表達(dá)分析
    3.1 實驗材料與方法
        3.1.1 實驗儀器和主要試劑
        3.1.2 實驗材料
        3.1.3 實驗方法
            3.1.3.1 各組織RNA提取及cDNA合成
            3.1.3.2 第一鏈cDNA合成
            3.1.3.3 TA克隆
            3.1.3.4 菌液PCR檢測和送樣測序
            3.1.3.5 Foxl2基因序列拼接及生物信息學(xué)分析
            3.1.3.6 半定量PCR和實時熒光定量PCR
            3.1.3.7 數(shù)據(jù)分析
    3.2 實驗結(jié)果
        3.2.1 紅耳龜Foxl2 基因的cDNA全長克隆、同源性分析
        3.2.2 Foxl2在紅耳龜不同組織中的表達(dá)分析
        3.2.3 Foxl2在紅耳龜不同胚胎時期性腺中的表達(dá)分析
        3.2.4 Foxl2關(guān)于溫度的敏感性分析
        3.2.5 雌二醇E2誘導(dǎo)的性逆轉(zhuǎn)中Foxl2的表達(dá)分析
    3.3 討論
第四章 Foxl2的功能研究
    4.1 實驗材料與方法
        4.1.1 實驗儀器和主要試劑
        4.1.2 實驗材料
        4.1.3 實驗方法
            4.1.3.1 Foxl2慢病毒載體的構(gòu)建及龜胚侵染
            4.1.3.2 RNA提取cDNA合成
            4.1.3.3 實時熒光定量PCR
            4.1.3.4 石蠟切片
            4.1.3.5 蘇木素-伊紅(H&E)染色
            4.1.3.6 免疫熒光染色
            4.1.3.7 數(shù)據(jù)分析
    4.2 實驗結(jié)果
        4.2.1 Foxl2功能缺失研究
            4.2.1.1 Foxl2-慢病毒載體干擾后的有效性分析
            4.2.1.2 Foxl2 基因敲低后FPT性腺組織形態(tài)學(xué)變化
            4.2.1.3 Foxl2 基因敲低后FPT性腺雄性特異性基因表達(dá)變化
            4.2.1.4 Foxl2 基因敲低后FPT性腺生殖細(xì)胞分布變化
        4.2.2 Foxl2功能獲得研究
            4.2.2.1 Foxl2 基因過表達(dá)后MPT性腺組織形態(tài)學(xué)變化
            4.2.2.2 Foxl2 基因過表達(dá)后MPT性腺雄性特異性基因表達(dá)變化
            4.2.2.3 Foxl2 基因過表達(dá)后MPT性腺生殖細(xì)胞分布變化
    4.3 討論
第五章 小結(jié)與展望
    5.1 小結(jié)
    5.2 本文的創(chuàng)新點(diǎn)
    5.3 本文的不足與展望
參考文獻(xiàn)
附錄 科研成果及資助單位(人)
致謝



本文編號：4023974