糖酵解酶是生物體的持家酶,通常在胞內(nèi)發(fā)揮生理生化作用。有研究表明,一些細(xì)菌的糖酵解酶會(huì)分泌到胞外發(fā)揮非糖酵解功能,在病原菌的侵染和毒力方面具有重要作用。遲緩愛(ài)德華氏菌是廣宿主的胞內(nèi)寄生菌,能感染多種淡水和海水魚(yú)類并導(dǎo)致其死亡,本工作對(duì)該病原菌的多種糖酵解酶蛋白的非糖酵解功能進(jìn)行了相關(guān)研究。首先利用免疫印跡和酶聯(lián)免疫吸附法,考察了5種糖酵解酶在50種不同來(lái)源愛(ài)德華氏菌的胞外分泌,發(fā)現(xiàn)這些糖酵解酶蛋白均能分泌到病原菌胞外,盡管各毒株的糖酵解酶胞外分泌量與其毒力并無(wú)直接關(guān)聯(lián),但同一種屬的菌株其胞外分泌量一般較相似,且同一菌株分泌的糖酵解酶蛋白量一般也具有相關(guān)性。其次檢測(cè)了遲緩愛(ài)德華氏菌T3SS、T4SS、T6SS和Tat分泌系統(tǒng)功能缺失的突變株胞外5種糖酵解酶蛋白的分泌情況,發(fā)現(xiàn)這些分泌系統(tǒng)的缺失并沒(méi)有導(dǎo)致糖酵解酶蛋白胞外分泌的顯著減少,相反部分突變株胞外蛋白的分泌量還有所增加,暗示著這些分泌系統(tǒng)在EIB202的糖酵解酶蛋白的分泌中不起主要作用;而毒株EIB202周質(zhì)空間中普遍存在5種糖酵解酶蛋白,表明這些蛋白可能通過(guò)兩步分泌途徑先運(yùn)輸?shù)街苜|(zhì)空間進(jìn)而轉(zhuǎn)運(yùn)到胞外的。隨后的細(xì)胞侵染和抗體中和實(shí)驗(yàn)...

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖５．１?ｐＥＴ－２８ａ（＋）質(zhì)粒圖譜??Ｆｉｇ．?５．１?Ｐｌａｓｍｉｄ?ｐｒｏｆｉｌｅ?ｏｆ?ｐＥＴ－２８ａ（＋）．??５．２．?

５．２實(shí)驗(yàn)材料??５．２．１菌株和質(zhì)粒??本章所用菌株和質(zhì)粒如表５．１。ｐＥＴ－２８ａ（＋）質(zhì)粒圖譜如圖５．１。??表５．１菌株及其基因型??Ｔａｂｌｅ?５．１?Ｓｔｒａｉｎｓ?ａｎｄ?ｔｈｅｉｒ?ｇｅｎｏｔｙｐｅ．??菌株和質(zhì)粒?ｍ?來(lái)源??菌株??Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ?ｃｏ....

圖5.4SDs一以GE分析蛋白誘導(dǎo)純化倩況

ＡＧＥ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ?ａｎｄ?ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ．?（Ａ）?ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ?ａｎＳＴ，?Ｍ：?ＰａｇｅＲｕｌｅｒ?Ｐｒｅｓｔａｉｎｅｄ?Ｐｒｏｔｅｉｎ?Ｌａｄｄｅｒ；?（Ｂ）?ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ?ａｎｄ?ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉ....

圖5.7FLAG重組表達(dá)菌株的免疫印跡實(shí)驗(yàn)

／ｆａｏ－ｆｌａｇ?ＡＮ／ｂａ－ｆｌａｇ２?３?４?５?ＢＭ１?２３?４?Ｃ４ＳＯ〇３。。。３關(guān)？?’?：??必潑十每麵■廁＇－＇？?議讀，轉(zhuǎn)康雜錄對(duì)夢(mèng)?教，恭?ｆ，?８〇〇?８００??絲??々＾ｖｄ卜卜苽?ｓ〇〇?ｙ?＂?、？＿■?．?３?ｒＳ＂－＇＂ｃ??．ｊ?２〇〇?２００....

本文編號(hào)：3973359