發(fā)布時(shí)間：2024-05-13 20:14

　　遲緩愛德華氏菌(Edwardsiella tarda)屬腸桿菌科,是魚類愛德華氏菌病的主要病原,給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。研究發(fā)現(xiàn)遲緩愛德華氏菌可以借助多種毒力相關(guān)因子以主動(dòng)攻擊或被動(dòng)吞噬的方式入侵宿主細(xì)胞,但具體機(jī)制并未闡明。組蛋白樣類核結(jié)構(gòu)蛋白H-NS (Histone-like nucleoid structuring protein)是廣泛分布于革蘭氏陰性菌中的一類重要的全局轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,參與調(diào)控多種與毒力、代謝、環(huán)境應(yīng)激反應(yīng)等相關(guān)基因的表達(dá)。前期研究發(fā)現(xiàn),H-NS對(duì)T6SS效應(yīng)子EvpP具有調(diào)控作用。本課題基于比較蛋白組學(xué)分析篩選遲緩愛德華氏菌中受到H-NS調(diào)控的蛋白。在此基礎(chǔ)上,重點(diǎn)研究H-NS調(diào)控遲緩愛德華氏菌T6SS效應(yīng)子EvpB和EvpC的分子機(jī)制。首先,通過雙向電泳技術(shù)比較野生株E. tarda EIB202與hns突變株在蛋白質(zhì)組上的差異,鑒定出7個(gè)蛋白的表達(dá)受到H-NS的調(diào)控,分別與應(yīng)激反應(yīng)、代謝合成、膜結(jié)構(gòu)及毒力有關(guān),其中包括E. tarda的T6SS效應(yīng)子EvpB和EvpC。通過qRT-PCR實(shí)驗(yàn),驗(yàn)證了H-NS對(duì)EvpB和EvpC具有調(diào)控作用。其次,...

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．２?￡．?中不同毒力調(diào)控系統(tǒng)么間的關(guān)系｜Ｍ｜??

從而引起系統(tǒng)性的感染。系統(tǒng)研究毒力相關(guān)因子的時(shí)序性表達(dá)與其感??染過程的關(guān)系將有助于闡明其致病機(jī)制。Ｌｅｕｎｇ等是出沈／感染宿主的過程可??分為六步（圖１．１）：第一步，細(xì)菌利用其鞭毛運(yùn)動(dòng)至宿主上皮細(xì)胞；第二步，細(xì)菌利用黏??附素黏附在上皮細(xì)胞表面并啟動(dòng)感染；第王步，借助侵染樣蛋....

圖１．４?Ｈ－ＮＳ髙親和性結(jié)合的ＤＮＡ序列１＂１??

識(shí)別并結(jié)合高ＡＴ含量ＤＮＡ序列的機(jī)制仍然不清楚。Ｂｏｕｆｆａｒｔｉｇｕｅｓ等ｔ４２ｌ通過分析沙口氏??菌Ｈ－ＮＳ在ｐｗＦ啟動(dòng)子區(qū)域內(nèi)結(jié)合位點(diǎn)的特點(diǎn)提出了一個(gè)由１０個(gè)核昔酸組成的高親和??性序列（圖１．４）。Ｌａｎｇ等利用染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)在全基因組上檢測Ｈ－ＮＳ的結(jié)合??位點(diǎn)發(fā)....

圖２．１不同￡？．伯ｚＹ／ａ菌株的胞外蛋白譜??Ｆｉｇ，?２．１?ＥｘｔｒａｃｅＨａｒ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｆｉｇｕｒｅ?ｉｎ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?左．／饑切

帶的灰度可Ｗ看出Ｅｖｐｌ和ＥｖｐＰ的胞外分泌量明顯較ＥｖｐＣ小。相對(duì)于野生株Ｅ舊２０２，??突變株Ａ２９６８、過表達(dá)株１５０５＾和巧６８＾的胞外圖譜基本上沒有差異，主要的蛋白條帶??灰度值基本一致（圖２．１）。??ＥＩＢ２０２?Ａ２９６８?２％８〇＝?１５０５班??Ｉ去＾?——Ｅ....

圖２．２野生?

帶的灰度可Ｗ看出Ｅｖｐｌ和ＥｖｐＰ的胞外分泌量明顯較ＥｖｐＣ小。相對(duì)于野生株Ｅ舊２０２，??突變株Ａ２９６８、過表達(dá)株１５０５＾和巧６８＾的胞外圖譜基本上沒有差異，主要的蛋白條帶??灰度值基本一致（圖２．１）。??ＥＩＢ２０２?Ａ２９６８?２％８〇＝?１５０５班??Ｉ去＾?——Ｅ....

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