鰻鱺是我國重要的經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖魚類,但大規(guī)模集約化的養(yǎng)殖方式使得鰻鱺病害發(fā)生日益頻繁,其中細(xì)菌性疾病是造成養(yǎng)殖鰻鱺重大損失的主要病原菌。細(xì)菌性疾病種類繁多,因而只針對單一菌種研制的鰻鱺亞單位疫苗常存在保護(hù)效率偏低、有效保護(hù)范圍有限等問題,難以在水產(chǎn)養(yǎng)殖實踐中推廣。在本課題組已有的研究基礎(chǔ)上,此次試驗選取病原性創(chuàng)傷弧菌和嗜水氣單胞菌作為代表菌株,通過基因提取試劑盒提取細(xì)菌基因組DNA,參考GenBank數(shù)據(jù)庫中已提交的創(chuàng)傷弧菌和氣單胞菌外膜蛋白基因序列設(shè)計引物,PCR克隆獲得病原性創(chuàng)傷弧菌OmpU和嗜水氣單胞菌Ⅱ型孔蛋白的基因全長序列。經(jīng)序列分析后選取外膜蛋白基因所表達(dá)的膜外多肽基因序列,通過融合PCR連接兩個外膜蛋白基因片段、構(gòu)建表達(dá)載體(pGEX-2T-His-Vibrio-Aero)并進(jìn)行高效表達(dá);表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)純化后免疫美洲鰻鱺,通過對溶菌酶含量、全血細(xì)胞刺激指數(shù)、血清抗體效價以及攻毒感染后免疫保護(hù)率的測定研究其免疫原性。研究方法與獲得的主要結(jié)果如下:1.據(jù)GeneBank數(shù)據(jù)庫已提交的創(chuàng)傷弧菌和嗜水氣單胞菌全長序列中外膜蛋白基因序列左右兩端設(shè)計引物,繼而利用已提取的基因組DNA模板進(jìn)行創(chuàng)...

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2.3瓊脂糖電泳結(jié)果

創(chuàng)傷弧菌與嗜水氣單胞菌二聯(lián)外膜蛋白基因弧菌和嗜水氣單胞菌外膜蛋白基因的體系下擴(kuò)增病原性創(chuàng)傷弧菌外膜蛋白基因（的瓊脂糖電泳結(jié)果顯示，B82和B11都得到了的片段分子量在1200bp左右，與預(yù)期目的了序列分析并成功測序。創(chuàng)傷弧菌外膜蛋白基開放閱讀框的大小分別為1023....

圖2.4SOPMA法預(yù)測ompU基因編碼的蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)

集美大學(xué)碩士學(xué)位論文創(chuàng)傷弧菌與嗜水氣單胞菌二聯(lián)外膜蛋白基因表達(dá)產(chǎn)物的免疫原性研個苯丙氨酸F，16個纈氨酸V）和159個極性中性氨基酸（22個天冬酰胺N，10個谷酰胺Q，19個絲氨酸S，28個蘇氨酸T，28個酪氨酸Y，44個甘氨酸G，8個蛋氨....

圖2.5SOPMA法預(yù)測Ⅱ型孔蛋白基因編碼的蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)

集美大學(xué)碩士學(xué)位論文創(chuàng)傷弧菌與嗜水氣單胞菌二聯(lián)外膜蛋白基因表達(dá)產(chǎn)物的免疫原性研究42個甘氨酸G，4個蛋氨酸M）；3個脯氨酸P，1個任意氨基酸X。利用SOPMA程序預(yù)測的蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)。結(jié)果顯示，此外膜蛋白可形成螺旋（Helix片層（Sheet）、轉(zhuǎn)角（Tur....

圖2.8Ⅱ型孔蛋白(B11)的親水性分析結(jié)果

其在蛋白質(zhì)上氨基酸順序分別位于25-33、34-41、42-50、51-59、63-70、82-92、95-17-113、114-122、147-154、167-182、183-195、209-220、247-253、269-278、279-287、293-298、306-7-....

本文編號：3965340