蛤仔廣泛養(yǎng)殖于歐洲和亞洲海域，是我國重要的海水養(yǎng)殖經(jīng)濟貝類。然而，隨著近年來的擴大生產(chǎn)和環(huán)境惡化，以及各類微生物引起的蛤仔疾病，嚴(yán)重威脅到了蛤仔養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的健康和可持續(xù)發(fā)展。因此，更好地了解蛤仔免疫反應(yīng)機制可以為蛤仔健康管理與養(yǎng)殖已經(jīng)病害的防治提供新的方向。 與其他無脊椎動物相同，蛤仔非特異性免疫因子在抵抗外來病原的入侵中起重要作用。而生物體內(nèi)的溶菌酶在先天性免疫中起到了舉足輕重的作用，能夠引發(fā)和維持機體免疫的防御過程。溶菌酶還起到了誘導(dǎo)其它免疫防御因子的合成與分泌，并協(xié)同其它免疫因子一起進(jìn)行免疫的作用，這對于以先天性免疫防御為主的無脊椎動物是極其重要的一部分。 本研究為首次在蛤仔（Ruditapes philippinarum）體內(nèi)發(fā)現(xiàn)并確定噬菌體型溶菌酶；在現(xiàn)有研究中，這也是迄今為止首次于真核生物中發(fā)現(xiàn)噬菌體型溶菌酶。實驗以我國重要海水養(yǎng)殖貝類蛤仔為研究對象，開展了蛤仔噬菌體型溶菌酶基因(RpLysBp)的克隆和體外重組表達(dá)研究，并以四種病原物刺激蛤仔，揭示了其對蛤仔噬菌體型溶菌酶基因表達(dá)的影響，初步探索了噬菌體型溶菌酶對于幾種常見細(xì)菌的抑制作用。實驗結(jié)果如下： 第一，利用EST蛤仔...

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 我國貝類養(yǎng)殖現(xiàn)狀和存在問題
    1.2 貝類的機體免疫防御體系
    1.3 溶菌酶的分類與生物學(xué)功能
    1.4 水產(chǎn)動物溶菌酶的研究進(jìn)展
    1.5 研究目的及意義
第二章 蛤仔(Ruditapes philippinarum)噬菌體型溶菌酶基因序列的克隆及序列分析
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 實驗試劑
        2.1.3 實驗儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 蛤仔總 RNA 的提取
        2.2.2 蛤仔噬菌體型溶菌酶基因 cDNA 序列全長獲得
        2.2.3 蛤仔噬菌體型溶菌酶 cDNA 序列的生物信息學(xué)分析
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 RNA 質(zhì)量檢測
        2.3.2 蛤仔 RpLysBp 基因特異性片段的擴增結(jié)果
        2.3.3 蛤仔 RpLysBp 基因全長及序列分析
        2.3.4 蛤仔 RpLysBp 基因的生物信息學(xué)分析結(jié)果
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 蛤仔(Ruditapes philippinarum)噬菌體型溶菌酶蛋白的原核表達(dá)
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗動物、載體、菌株及工具酶
        3.1.2 實驗試劑及其配制
        3.1.3 主要實驗儀器
    3.2 實驗方法
        3.2.1 蛤仔 RpLysBp 基因總 RNA 的提取
        3.2.2 第一條 cDNA 鏈的獲得
        3.2.3 引物設(shè)計及蛤仔 RpLysBp 基因目的片段的擴增
        3.2.4 重組質(zhì)粒 pMD19-T-ORF 的構(gòu)建及轉(zhuǎn)化(DH5α)
        3.2.5 重組質(zhì)粒 pET-30a-ORF 的構(gòu)建及轉(zhuǎn)化(BL21)
        3.2.6 融合蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
        3.2.7 菌體的超聲波破碎
        3.2.8 SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)
        3.2.9 重組蛋白的純化及濃度測定
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 ORF 目的片段擴增結(jié)果
        3.3.2 重組質(zhì)粒 pMD-19T-ORF 的構(gòu)建及轉(zhuǎn)化結(jié)果
        3.3.3 重組質(zhì)粒 pET-30a-ORF 的構(gòu)建及鑒定
        3.3.4 重組蛋白的純化及濃度測定
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第四章 蛤仔（Ruditapes philippinarum）噬菌體型溶菌酶熒光定量 PCR 分析
    4.1 實驗材料
        4.1.1 實驗動物
        4.1.2 主要實驗試劑及藥品
        4.1.3 主要實驗儀器
    4.2 實驗方法
        4.2.1 RNA 提取及反轉(zhuǎn)錄
        4.2.2 不同組織和免疫促進(jìn)劑刺激后表達(dá)變化檢測方法
        4.2.3 cDNA 第一條鏈的合成
        4.2.4 引物設(shè)計
        4.2.5 熒光實時定量 PCR 條件的優(yōu)化
        4.2.6 數(shù)據(jù)處理方法
    4.3 實驗結(jié)果
        4.3.1 總 RNA 提取結(jié)果
        4.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        4.3.3 蛤仔 RpLysPh 基因組織特異性表達(dá)結(jié)果
        4.3.4 蛤仔 RpLysPh 在免疫促進(jìn)劑刺激后的表達(dá)規(guī)律研究
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
第五章 蛤仔（Ruditapes philippinarum）噬菌體型溶菌酶基因多態(tài)性（SNP）初步分析
    5.1 實驗材料
        5.1.1 實驗動物
        5.1.2 實驗試劑
        5.1.3 實驗儀器
    5.2 實驗方法
        5.2.1 蛤仔總 DNA 的提取
        5.2.2 引物設(shè)計
        5.2.3 PCR 擴增和電泳檢測
        5.2.4 產(chǎn)物純化和測序
    5.3 實驗結(jié)果
    5.4 討論
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝



本文編號：3939143