發(fā)布時(shí)間：2024-03-25 00:59

　　由鱖傳染性脾腎壞死病毒(Infectious spleen and kidney necrosis virus,ISKNV)引起的鱖虹彩病毒病是危害鱖養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)最主要疫病,而疫苗接種是預(yù)防該病最為有效的技術(shù)手段。在疫苗制備過程中,安全性和效力是評(píng)價(jià)疫苗質(zhì)量重要指標(biāo),而滅活快速檢驗(yàn)及抗原含量測(cè)定是評(píng)價(jià)滅活疫苗安全性和效力的關(guān)鍵技術(shù),因此本論文針對(duì)ISKNV滅活疫苗制備中關(guān)鍵問題,開展了ISKNV滅活快速檢驗(yàn)及有效抗原含量測(cè)定方法研究及應(yīng)用,旨在提高ISKNV滅活疫苗生產(chǎn)效率和疫苗質(zhì)量,取得的主要結(jié)果如下:1、從ISKNV感染CPB細(xì)胞轉(zhuǎn)錄譜中篩選并驗(yàn)證病毒早期基因ORF099基因表達(dá)量最高,以該基因轉(zhuǎn)錄本作為靶標(biāo),建立了基于熒光定量RT-PCR監(jiān)測(cè)病毒mRNA的滅活快速檢測(cè)方法。首先,以含ISKNV ORF099基因質(zhì)粒作為模板,采用qPCR方法繪制了CT值與質(zhì)�？截悢�(shù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線,其線性方程為CT=-3.42lgx+39.455(R2=0.998),最低檢測(cè)限為3拷貝/μL,重復(fù)試驗(yàn)結(jié)果顯示組間和組內(nèi)變異系數(shù)均小于2%。病毒轉(zhuǎn)錄本靈敏度實(shí)驗(yàn)顯示在第7 d即可從接種1個(gè)拷貝病毒的細(xì)胞中檢測(cè)出...

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖2-1Real-timePCR絕對(duì)定量標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖2-1Real-timePCR絕對(duì)定量標(biāo)準(zhǔn)曲線ThestandarddilutionseriesofabsolutelyquantitR的靈敏度和重復(fù)性pMD099各稀釋度樣品進(jìn)行熒光定量PC

圖2-2基于ORF099基因的ISKNV熒光定量PCR檢測(cè)方法的靈敏度和重復(fù)性

ORF099基因的定量分析。(a)(b)圖2-2基于ORF099基因的ISKNV熒光定量PCR檢測(cè)方法的靈敏度和重復(fù)性(a)1-11．質(zhì)�？截悢�(shù)分別為3×1010、3×109、3×108、3×107、3×106、3×105、3×104、3×103、3×102、3×101、3....

圖2-3ISKNV感染CPB細(xì)胞總RNA中g(shù)DNA去除驗(yàn)證（誤差線表示標(biāo)準(zhǔn)差的值）

(a)(b)圖2-3ISKNV感染CPB細(xì)胞總RNA中g(shù)DNA去除驗(yàn)證（誤差線表示標(biāo)準(zhǔn)差的值）（a）表示稀釋病毒液接種CPB細(xì)胞7d（U-A，R-A）和11d（U-B，R-B）后提取的R品，U-A\U-B表示未去除gDNA的RNA，R-A....

圖2-4熒光定量RT-PCR檢測(cè)ISKNV感染CPB細(xì)胞后病毒基因轉(zhuǎn)錄數(shù)量（誤差線表示標(biāo)準(zhǔn)差的值）

2-4熒光定量RT-PCR檢測(cè)ISKNV感染CPB細(xì)胞后病毒基因轉(zhuǎn)錄數(shù)量（誤差線表示標(biāo)準(zhǔn)差的值）Fig.2-4qRT-PCRdetectionofISKNVtranscriptsafterISKNVinfectedCPBcells(error....

本文編號(hào)：3938292