發(fā)布時間：2024-02-22 06:38

　　為了研究維甲酸類X受體(RXR)基因在甲殼動物蛻皮和卵巢發(fā)育中的作用，本研究首先通過反轉(zhuǎn)錄PCR (RT-PCR)和cDNA末端快速擴增(RACE)克隆獲得三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)RXR基因(PtRXR)全長cDNA序列。序列分析表明：PtRXR cDNA全長1365bp，包含25bp的5’末端非編碼區(qū)(UTR)，1140bp的開放閱讀框(ORF)，以及200bp的3’UTR，該基因可編碼379個氨基酸。PtRXR氨基酸序列包含從N端的A/B域(轉(zhuǎn)錄激活域)到C端的E域(配體結(jié)合域)4個核受體特征結(jié)構(gòu)域。經(jīng)氨基酸序列比對可知，PtRXR與其他已知甲殼動物的RXR氨基酸序列高度同源；系統(tǒng)進化樹顯示，PtRXR與其甲殼動物RXR聚在一起，并且與脊椎動物RXR的親緣關(guān)系要近于昆蟲的超氣門蛋白(ultraspiracles,USP)。本研究運用實時熒光定量PCR(qRT-PCR)方法檢測PtRXR的組織分布特性和在蛻皮、卵巢發(fā)育過程中的表達特征。組織分布研究顯示PtRXR廣泛存在于所檢測的三疣梭子蟹組織，且高表達于卵巢和Y-器。蛻皮過程中，PtRXR在Y-...

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
英文摘要
引言
1 緒論
    1.1 甲殼動物蛻皮
    1.2 甲殼動物卵巢發(fā)育
    1.3 蛻皮激素在蛻皮和卵巢發(fā)育中的作用
    1.4 甲基法尼酯在蛻皮和卵巢發(fā)育中的作用
    1.5 核受體家族
    1.6 RXR
        1.6.1 RXR-EcR-Ecs 模式
        1.6.2 RXR-MF 模式
    1.7 展望
2 PtRXR 全長 cDNA 的克隆及序列分析
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 試劑與耗材
        2.1.3 主要儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 引物設(shè)計與合成
        2.2.2 實驗前期準(zhǔn)備
        2.2.3 總 RNA 提取
        2.2.4 第一鏈 cDNA 合成
        2.2.5 RT-PCR
        2.2.6 3’RACE
        2.2.7 5’RACE
        2.2.8 PCR 產(chǎn)物的克隆及測序
        2.2.9 全長序列驗證
        2.2.10 序列分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 總 RNA 的提取
        2.3.2 PtRXR 全長 cDNA 的克隆
        2.3.3 PtRXR 序列特征
        2.3.4 PtRXR 的同源性分析
    2.4 小結(jié)
3 PtRXR 的組織分布特性
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗動物
        3.1.2 主要試劑和耗材
        3.1.3 主要儀器
    3.2 實驗方法
        3.2.1 內(nèi)參基因的選擇
        3.2.2 引物設(shè)計與合成
        3.2.3 總 RNA 提取和模板 cDNA 合成
        3.2.4 RT-PCR 檢測
        3.2.5 qRT-PCR 檢測
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 RT-PCR 檢測結(jié)果
        3.3.2 qRT-PCR 檢測結(jié)果
    3.4 小結(jié)
4 PtRXR 在蛻皮過程中的表達
    4.1 實驗材料
        4.1.1 實驗動物
        4.1.2 主要試劑和耗材
        4.1.3 主要儀器
    4.2 實驗方法
        4.2.1 引物設(shè)計與合成
        4.2.2 總 RNA 提取和模板 cDNA 獲得
        4.2.3 qRT-PCR 檢測
    4.3 結(jié)果
    4.4 小結(jié)
5 PtRXR 在卵巢發(fā)育過程中的表達
    5.1 實驗材料
        5.1.1 實驗動物
        5.1.2 主要試劑和耗材
        5.1.3 主要儀器
    5.2 實驗方法
        5.2.1 引物設(shè)計與合成
        5.2.2 總 RNA 提取和模板 cDNA 獲得
        5.2.3 qRT-PCR 檢測
    5.3 結(jié)果
        5.3.1 PtRXR 在一次卵巢發(fā)育過程中的表達
        5.3.2 PtRXR 在二次卵巢發(fā)育過程中的表達
    5.4 小結(jié)
6 結(jié)論
    6.1 序列分析
    6.2 PtRXR 的組織分布特性
    6.3 PtRXR 在蛻皮過程中的表達特征
    6.4 PtRXR 在卵巢發(fā)育過程中的表達特征
參考文獻
在學(xué)研究成果
致謝



本文編號：3906545