發(fā)布時間：2024-02-01 13:15

　　鉀離子通道是細胞膜上一類僅允許鉀離子出入細胞的跨膜蛋白,通過通道的啟閉控制著離子的跨膜流動,啟動胞內各種重要的信息傳導系統(tǒng),參與多種細胞功能的調節(jié)。SKCa2屬于小電導鈣激活型鉀離子通道(KCa)家族,具有K+選擇性、Ca2+高敏感性和電壓不依賴性等特性,是淋巴細胞上一種重要的鉀離子通道。當淋巴細胞受到刺激時,細胞表面的鉀通道可以通過調節(jié)細胞內的離子濃度以及膜電位,在淋巴細胞的激活、增殖、分化和機體整個免疫應答起著重要的調節(jié)作用。 星斑川鰈(Platichthys stellatus)屬海洋經濟魚類中的名貴珍稀物種,具有極高的商業(yè)價值。養(yǎng)殖病害頻發(fā)往往會造成巨大的經濟損失,直接制約著海水養(yǎng)殖產業(yè)的產量和健康發(fā)展。鑒于鉀離子通道在機體免疫應答機制中所起的關鍵作用,深入了解魚類非特異性免疫應答及調控機制,對于豐富魚類免疫學的基本內容與基礎理論,為海洋魚類健康養(yǎng)殖提供理論依據(jù)和技術指導都有著重要的科學價值與現(xiàn)實意義。目前,離子通道蛋白對免疫系統(tǒng)功能調控的研究已成為國內外專家學者研究的熱點。 本文以經濟魚類星斑川鰈的腦cDNA為模板,利用RT-PCR和RACE技術獲得了星斑川鰈SKCa2基因的...

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
CONTENTS
中文摘要
ABSTRACT
縮略詞
第一章 前言
    1.1 離子通道概述
    1.2 鉀離子通道概述
        1.2.1 鉀離子通道的結構
        1.2.2 鉀離子通道的分類
    1.3 鉀離子通道與魚類免疫機制研究
        1.3.1 魚類的免疫機制概述
        1.3.2 鉀離子通道在魚體免疫中的作用
    1.4 小電導鈣激活型鉀離子通道研究進展
    1.5 本研究的目的及意義
第二章 星斑川鰈SKCa2基因的克隆與序列的生物信息學分析
    2.1 材料與方法
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 實驗試劑和儀器
        2.1.3 SKCa2基因PCR引物設計
        2.1.4 星斑川鰈腦總RNA提取
        2.1.5 cDNA第一鏈的合成
        2.1.6 PCR擴增星斑川鰈SKCa2基因核心片段序列
        2.1.7 PCR產物純化
        2.1.8 目的片段與T載體連接并轉化感受態(tài)細胞
        2.1.9 挑取單菌落進行陽性檢測
        2.1.10 測序結果驗證
        2.1.11 星斑川鰈SKCa2基因的5’RACE
        2.1.12 星斑川鰈SKCa2基因的3’RACE
        2.1.13 星斑川鰈SKCa2基因的測序結果拼接
        2.1.14 星斑川鰈SKCa2基因序列的生物信息學分析
    2.2 實驗結果
        2.2.1 總RNA的提取
        2.2.2 星斑川鰈SKCa2基因核心片段序列擴增
        2.2.3 星斑川鰈SKCa2基因的5'-RACE和3'-RACE
        2.2.4 拼接獲取星斑川鰈SKCa2的cDNA全長
        2.2.5 星斑川鰈SKCa2基因的生物信息學分析
    2.3 討論
第三章 星斑川鰈SKCa2通道在LPS刺激下的表達模式
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 實驗試劑和儀器
        3.1.3 RT-PCR引物設計
        3.1.4 各組織總RNA提取及cDNA合成
        3.1.5 cDNA質量檢測
        3.1.6 星斑川鰈SKCa2在不同組織中的表達
        3.1.7 星斑川鰈SKCa2在LPS刺激不同時間后各組織表達模式的變化
        3.1.8 實驗數(shù)據(jù)處理
    3.2 實驗結果
        3.2.1 各組織cDNA的質量及RT-PCR引物特異性
        3.2.2 SKCa2 mRNA在不同組織的相對表達量
        3.2.3 SKCa2 mRNA在LPS刺激不同時間后各組織中的相對表達量變化
    3.3 討論
第四章 星斑川鰈SKCa2在淋巴細胞中的免疫應答機制
    4.1 材料與方法
        4.1.1 實驗材料
        4.1.2 實驗試劑和儀器
        4.1.3 星斑川鰈外周血淋巴細胞的制備
        4.1.4 淋巴細胞計數(shù)
        4.1.5 Apamin對淋巴細胞增殖的影響
        4.1.6 星斑川鰈淋巴細胞增殖測定
        4.1.7 星斑川鰈淋巴細胞呼吸爆發(fā)活性的測定
    4.2 實驗結果
        4.2.1 淋巴細胞的分離與計數(shù)
        4.2.2 Apamin對淋巴細胞增殖的影響
        4.2.3 淋巴細胞增殖測定
        4.2.4 淋巴細胞呼吸爆發(fā)活性測定
    4.3 討論
第五章 總結與展望
    5.1 實驗總結
    5.2 展望
參考文獻
致謝
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本文編號：3892177