鉀離子通道是細(xì)胞膜上一類僅允許鉀離子出入細(xì)胞的跨膜蛋白,通過(guò)通道的啟閉控制著離子的跨膜流動(dòng),啟動(dòng)胞內(nèi)各種重要的信息傳導(dǎo)系統(tǒng),參與多種細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)。SKCa2屬于小電導(dǎo)鈣激活型鉀離子通道(KCa)家族,具有K+選擇性、Ca2+高敏感性和電壓不依賴性等特性,是淋巴細(xì)胞上一種重要的鉀離子通道。當(dāng)淋巴細(xì)胞受到刺激時(shí),細(xì)胞表面的鉀通道可以通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的離子濃度以及膜電位,在淋巴細(xì)胞的激活、增殖、分化和機(jī)體整個(gè)免疫應(yīng)答起著重要的調(diào)節(jié)作用。 星斑川鰈(Platichthys stellatus)屬海洋經(jīng)濟(jì)魚(yú)類中的名貴珍稀物種,具有極高的商業(yè)價(jià)值。養(yǎng)殖病害頻發(fā)往往會(huì)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失,直接制約著海水養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的產(chǎn)量和健康發(fā)展。鑒于鉀離子通道在機(jī)體免疫應(yīng)答機(jī)制中所起的關(guān)鍵作用,深入了解魚(yú)類非特異性免疫應(yīng)答及調(diào)控機(jī)制,對(duì)于豐富魚(yú)類免疫學(xué)的基本內(nèi)容與基礎(chǔ)理論,為海洋魚(yú)類健康養(yǎng)殖提供理論依據(jù)和技術(shù)指導(dǎo)都有著重要的科學(xué)價(jià)值與現(xiàn)實(shí)意義。目前,離子通道蛋白對(duì)免疫系統(tǒng)功能調(diào)控的研究已成為國(guó)內(nèi)外專家學(xué)者研究的熱點(diǎn)。 本文以經(jīng)濟(jì)魚(yú)類星斑川鰈的腦cDNA為模板,利用RT-PCR和RACE技術(shù)獲得了星斑川鰈SKCa2基因的...

【文章頁(yè)數(shù)】：90 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
CONTENTS
中文摘要
ABSTRACT
縮略詞
第一章 前言
    1.1 離子通道概述
    1.2 鉀離子通道概述
        1.2.1 鉀離子通道的結(jié)構(gòu)
        1.2.2 鉀離子通道的分類
    1.3 鉀離子通道與魚(yú)類免疫機(jī)制研究
        1.3.1 魚(yú)類的免疫機(jī)制概述
        1.3.2 鉀離子通道在魚(yú)體免疫中的作用
    1.4 小電導(dǎo)鈣激活型鉀離子通道研究進(jìn)展
    1.5 本研究的目的及意義
第二章 星斑川鰈SKCa2基因的克隆與序列的生物信息學(xué)分析
    2.1 材料與方法
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑和儀器
        2.1.3 SKCa2基因PCR引物設(shè)計(jì)
        2.1.4 星斑川鰈腦總RNA提取
        2.1.5 cDNA第一鏈的合成
        2.1.6 PCR擴(kuò)增星斑川鰈SKCa2基因核心片段序列
        2.1.7 PCR產(chǎn)物純化
        2.1.8 目的片段與T載體連接并轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞
        2.1.9 挑取單菌落進(jìn)行陽(yáng)性檢測(cè)
        2.1.10 測(cè)序結(jié)果驗(yàn)證
        2.1.11 星斑川鰈SKCa2基因的5’RACE
        2.1.12 星斑川鰈SKCa2基因的3’RACE
        2.1.13 星斑川鰈SKCa2基因的測(cè)序結(jié)果拼接
        2.1.14 星斑川鰈SKCa2基因序列的生物信息學(xué)分析
    2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.2.1 總RNA的提取
        2.2.2 星斑川鰈SKCa2基因核心片段序列擴(kuò)增
        2.2.3 星斑川鰈SKCa2基因的5'-RACE和3'-RACE
        2.2.4 拼接獲取星斑川鰈SKCa2的cDNA全長(zhǎng)
        2.2.5 星斑川鰈SKCa2基因的生物信息學(xué)分析
    2.3 討論
第三章 星斑川鰈SKCa2通道在LPS刺激下的表達(dá)模式
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑和儀器
        3.1.3 RT-PCR引物設(shè)計(jì)
        3.1.4 各組織總RNA提取及cDNA合成
        3.1.5 cDNA質(zhì)量檢測(cè)
        3.1.6 星斑川鰈SKCa2在不同組織中的表達(dá)
        3.1.7 星斑川鰈SKCa2在LPS刺激不同時(shí)間后各組織表達(dá)模式的變化
        3.1.8 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理
    3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.2.1 各組織cDNA的質(zhì)量及RT-PCR引物特異性
        3.2.2 SKCa2 mRNA在不同組織的相對(duì)表達(dá)量
        3.2.3 SKCa2 mRNA在LPS刺激不同時(shí)間后各組織中的相對(duì)表達(dá)量變化
    3.3 討論
第四章 星斑川鰈SKCa2在淋巴細(xì)胞中的免疫應(yīng)答機(jī)制
    4.1 材料與方法
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑和儀器
        4.1.3 星斑川鰈外周血淋巴細(xì)胞的制備
        4.1.4 淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)
        4.1.5 Apamin對(duì)淋巴細(xì)胞增殖的影響
        4.1.6 星斑川鰈淋巴細(xì)胞增殖測(cè)定
        4.1.7 星斑川鰈淋巴細(xì)胞呼吸爆發(fā)活性的測(cè)定
    4.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.2.1 淋巴細(xì)胞的分離與計(jì)數(shù)
        4.2.2 Apamin對(duì)淋巴細(xì)胞增殖的影響
        4.2.3 淋巴細(xì)胞增殖測(cè)定
        4.2.4 淋巴細(xì)胞呼吸爆發(fā)活性測(cè)定
    4.3 討論
第五章 總結(jié)與展望
    5.1 實(shí)驗(yàn)總結(jié)
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
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本文編號(hào)：3892177