發(fā)布時間：2024-01-18 17:20

　　中華絨螯蟹(Eriocheir sinensis)是我國重要的名優(yōu)水產養(yǎng)殖品種。近來年隨著養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴大和養(yǎng)殖環(huán)境的日趨惡化,由細菌、病毒、寄生蟲、類立克次體等病原生物等引起的病害日趨嚴重,給中華絨鰲蟹養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的損失,嚴重威脅、制約著我國蟹類養(yǎng)殖的健康發(fā)展。甲殼動物沒有類似高等動物的特異性免疫系統(tǒng),主要是依靠血細胞的天然免疫系統(tǒng)來防御病原微生物。對中華絨螯蟹先天免疫及相關機制研究已成為其抗病研究的熱點,通過研究其免疫機制,可為進一步研發(fā)免疫相關制劑,調控免疫能力,以達到減少或清除病害、實現(xiàn)健康養(yǎng)殖的目的提供依據(jù)。本研究中,我們在確定了中華絨螯蟹血細胞類型的基礎上,研究了各類細胞的體內吞噬功能、LPS誘導血細胞凋亡的機制、細胞粘附因子EsPX和絲裂原蛋白活化激酶EsMAPK等免疫相關蛋白在吞噬和凋亡中的免疫應答反應等。具體研究結果如下：1、中華絨螯蟹血細胞類型及吞噬功能結合相差顯微鏡、透射電子顯微鏡及細胞染色技術,本研究將中華絨螯蟹血細胞分為透明細胞、半顆粒細胞和顆粒細胞三大類群。透明細胞為圓形、卵圓形或不規(guī)則形狀,細胞質中含有極少數(shù)顆粒；半顆粒細胞為紡錘形或卵圓形,含有大量...

【文章頁數(shù)】：141 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
致謝
摘要
ABSTRACT
主要英文縮寫及譯名
第一章 緒論
    1.1 甲殼動物血細胞的分類方法
        1.1.1 顯微鏡分類法
        1.1.2 細胞染色分類法
        1.1.3 透射電子顯微鏡分類法
        1.1.4 流式細胞術分類法
    1.2 甲殼動物血細胞的分離
    1.3 甲殼動物血細胞的免疫功能
        1.3.1 細胞吞噬作用
        1.3.2 細胞粘附因子
        1.3.3 細胞酚氧化酶原系統(tǒng)
        1.3.4 細胞凝集素
        1.3.5 結節(jié)形成、包囊作用和細胞毒理作用
    1.4 甲殼動物血細胞凋亡的調控因子
        1.4.1 IAPs和IAP結合蛋白
        1.4.2 凋亡蛋白酶Caspases
        1.4.3 Bcl-2家族蛋白
        1.4.4 Apaf-1和Apip家族蛋白
        1.4.5 絲裂原活化蛋白激酶MAPK蛋白
    1.5 研究目的及意義
    1.6 技術路線
第二章 中華絨螯蟹血細胞分類及吞噬作用研究
    2.1 材料與儀器
        2.1.1 實驗儀器
        2.1.2 試劑及試劑盒
    2.2 實驗方法
        2.2.1 實驗動物
        2.2.2 血細胞收集
        2.2.3 血細胞形態(tài)觀察與分類
        2.2.4 血細胞數(shù)量統(tǒng)計
        2.2.5 流式細胞術檢測分類
        2.2.6 血細胞超微結構觀察
        2.2.7 血細胞體內吞噬作用觀察
        2.2.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    2.3 實驗結果
        2.3.1 中華絨螯蟹血細胞的分類
        2.3.2 血細胞的體內吞噬作用
    2.4 討論
    2.5 本章小結
第三章 LPS誘導中華絨螯蟹血細胞凋亡機制的研究
    3.1 材料與儀器
        3.1.1 實驗儀器
        3.1.2 試劑及試劑盒
    3.2 實驗方法
        3.2.1 實驗動物
        3.2.2 血細胞收集
        3.2.3 LPS、嗜水氣單胞菌及枯草芽孢桿菌對血細胞數(shù)量的影響
        3.2.4 LPS體外誘導血細胞凋亡的檢測
        3.2.5 LPS誘導血細胞ROS檢測
        3.2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    3.3 實驗結果
        3.3.1 嗜水氣單胞菌和枯草芽孢桿菌對中華絨螯蟹血細胞數(shù)量的影響
        3.3.2 不同濃度LPS對中華絨螯蟹血細胞數(shù)量的影響
        3.3.3 LPS誘導中華絨螯蟹血細胞凋亡的形態(tài)學觀察
        3.3.4 LPS誘導中華絨螯蟹血細胞凋亡的DNA片段化分析
        3.3.5 流式細胞術檢測LPS誘導后中華絨螯蟹血細胞的凋亡
        3.3.6 LPS誘導中華絨螯蟹血細胞的ROS檢測
    3.4 討論
    3.5 本章小結
第四章 中華絨螯蟹細胞粘附蛋白EsPX的克隆及其對外源刺激物的免疫反應
    4.1 材料與儀器
        4.1.1 實驗儀器
        4.1.2 試劑及試劑盒
    4.2 實驗方法
        4.2.1 實驗動物
        4.2.2 血細胞收集
        4.2.3 中華絨螯蟹EsPX序列分析
        4.2.4 EsPX mRNA組織表達分析
        4.2.5 外源刺激物對EsPX mRNA表達量的影響
        4.2.6 EsPX蛋白的亞細胞定位
        4.2.7 外源刺激物對EsPX蛋白表達的影響
        4.2.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    4.3 實驗結果
        4.3.1 EsPX序列及同源性分析結果
        4.3.2 EsPX多序列比對和系統(tǒng)發(fā)育樹的構建結果
        4.3.3 EsPX在不同組織中的分布情況
        4.3.4 外源刺激物對EsPX基因表達的影響
        4.3.5 EsPX蛋白在不同血細胞的定位
        4.3.6 外源刺激物對血細胞EsPX蛋白表達的影響
    4.4 討論
    4.5 本章小結
第五章 中華絨螯蟹MAPK基因的克隆及功能分析
    5.1 材料與儀器
        5.1.1 實驗儀器
        5.1.2 主要軟件
        5.1.3 試劑及試劑盒
    5.2 實驗方法
        5.2.1 實驗動物
        5.2.2 血細胞收集
        5.2.3 中華絨螯蟹EsMAPK序列分析
        5.2.4 EsMAPK mRNA組織表達分析
        5.2.5 外源刺激物對EsMAPK mRNA表達量的影響
        5.2.6 EsMAPK蛋白的原核表達
        5.2.7 中華絨螯蟹EsMAPK蛋白的亞細胞定位
        5.2.8 外源刺激物對EsMAPK蛋白表達的影響
        5.2.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    5.3 實驗結果
        5.3.1 EsMAPK序列分析
        5.3.2 EsMAPK氨基酸序列同源性分析和系統(tǒng)發(fā)育樹的構建
        5.3.3 EsMAPK在不同組織中的表達
        5.3.4 外源刺激物對EsMAPK基因表達的影響
        5.3.5 EsMAPK蛋白原核表達
        5.3.6 LPS和嗜水氣單胞菌對EsMAPK蛋白表達的影響
    5.4 討論
    5.5 本章小結
第六章 研究結果與展望
    6.1 研究結果
    6.2 主要創(chuàng)新點
    6.3 不足和展望
參考文獻
作者簡歷及攻讀博士期間發(fā)表的論文



本文編號：3879700