中華絨螯蟹(Eriocheir sinensis)是我國重要的名優(yōu)水產(chǎn)養(yǎng)殖品種。近來年隨著養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴大和養(yǎng)殖環(huán)境的日趨惡化,由細(xì)菌、病毒、寄生蟲、類立克次體等病原生物等引起的病害日趨嚴(yán)重,給中華絨鰲蟹養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的損失,嚴(yán)重威脅、制約著我國蟹類養(yǎng)殖的健康發(fā)展。甲殼動物沒有類似高等動物的特異性免疫系統(tǒng),主要是依靠血細(xì)胞的天然免疫系統(tǒng)來防御病原微生物。對中華絨螯蟹先天免疫及相關(guān)機制研究已成為其抗病研究的熱點,通過研究其免疫機制,可為進一步研發(fā)免疫相關(guān)制劑,調(diào)控免疫能力,以達(dá)到減少或清除病害、實現(xiàn)健康養(yǎng)殖的目的提供依據(jù)。本研究中,我們在確定了中華絨螯蟹血細(xì)胞類型的基礎(chǔ)上,研究了各類細(xì)胞的體內(nèi)吞噬功能、LPS誘導(dǎo)血細(xì)胞凋亡的機制、細(xì)胞粘附因子EsPX和絲裂原蛋白活化激酶EsMAPK等免疫相關(guān)蛋白在吞噬和凋亡中的免疫應(yīng)答反應(yīng)等。具體研究結(jié)果如下：1、中華絨螯蟹血細(xì)胞類型及吞噬功能結(jié)合相差顯微鏡、透射電子顯微鏡及細(xì)胞染色技術(shù),本研究將中華絨螯蟹血細(xì)胞分為透明細(xì)胞、半顆粒細(xì)胞和顆粒細(xì)胞三大類群。透明細(xì)胞為圓形、卵圓形或不規(guī)則形狀,細(xì)胞質(zhì)中含有極少數(shù)顆粒；半顆粒細(xì)胞為紡錘形或卵圓形,含有大量...

【文章頁數(shù)】：141 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
致謝
摘要
ABSTRACT
主要英文縮寫及譯名
第一章 緒論
    1.1 甲殼動物血細(xì)胞的分類方法
        1.1.1 顯微鏡分類法
        1.1.2 細(xì)胞染色分類法
        1.1.3 透射電子顯微鏡分類法
        1.1.4 流式細(xì)胞術(shù)分類法
    1.2 甲殼動物血細(xì)胞的分離
    1.3 甲殼動物血細(xì)胞的免疫功能
        1.3.1 細(xì)胞吞噬作用
        1.3.2 細(xì)胞粘附因子
        1.3.3 細(xì)胞酚氧化酶原系統(tǒng)
        1.3.4 細(xì)胞凝集素
        1.3.5 結(jié)節(jié)形成、包囊作用和細(xì)胞毒理作用
    1.4 甲殼動物血細(xì)胞凋亡的調(diào)控因子
        1.4.1 IAPs和IAP結(jié)合蛋白
        1.4.2 凋亡蛋白酶Caspases
        1.4.3 Bcl-2家族蛋白
        1.4.4 Apaf-1和Apip家族蛋白
        1.4.5 絲裂原活化蛋白激酶MAPK蛋白
    1.5 研究目的及意義
    1.6 技術(shù)路線
第二章 中華絨螯蟹血細(xì)胞分類及吞噬作用研究
    2.1 材料與儀器
        2.1.1 實驗儀器
        2.1.2 試劑及試劑盒
    2.2 實驗方法
        2.2.1 實驗動物
        2.2.2 血細(xì)胞收集
        2.2.3 血細(xì)胞形態(tài)觀察與分類
        2.2.4 血細(xì)胞數(shù)量統(tǒng)計
        2.2.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測分類
        2.2.6 血細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)觀察
        2.2.7 血細(xì)胞體內(nèi)吞噬作用觀察
        2.2.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 中華絨螯蟹血細(xì)胞的分類
        2.3.2 血細(xì)胞的體內(nèi)吞噬作用
    2.4 討論
    2.5 本章小結(jié)
第三章 LPS誘導(dǎo)中華絨螯蟹血細(xì)胞凋亡機制的研究
    3.1 材料與儀器
        3.1.1 實驗儀器
        3.1.2 試劑及試劑盒
    3.2 實驗方法
        3.2.1 實驗動物
        3.2.2 血細(xì)胞收集
        3.2.3 LPS、嗜水氣單胞菌及枯草芽孢桿菌對血細(xì)胞數(shù)量的影響
        3.2.4 LPS體外誘導(dǎo)血細(xì)胞凋亡的檢測
        3.2.5 LPS誘導(dǎo)血細(xì)胞ROS檢測
        3.2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 嗜水氣單胞菌和枯草芽孢桿菌對中華絨螯蟹血細(xì)胞數(shù)量的影響
        3.3.2 不同濃度LPS對中華絨螯蟹血細(xì)胞數(shù)量的影響
        3.3.3 LPS誘導(dǎo)中華絨螯蟹血細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)觀察
        3.3.4 LPS誘導(dǎo)中華絨螯蟹血細(xì)胞凋亡的DNA片段化分析
        3.3.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測LPS誘導(dǎo)后中華絨螯蟹血細(xì)胞的凋亡
        3.3.6 LPS誘導(dǎo)中華絨螯蟹血細(xì)胞的ROS檢測
    3.4 討論
    3.5 本章小結(jié)
第四章 中華絨螯蟹細(xì)胞粘附蛋白EsPX的克隆及其對外源刺激物的免疫反應(yīng)
    4.1 材料與儀器
        4.1.1 實驗儀器
        4.1.2 試劑及試劑盒
    4.2 實驗方法
        4.2.1 實驗動物
        4.2.2 血細(xì)胞收集
        4.2.3 中華絨螯蟹EsPX序列分析
        4.2.4 EsPX mRNA組織表達(dá)分析
        4.2.5 外源刺激物對EsPX mRNA表達(dá)量的影響
        4.2.6 EsPX蛋白的亞細(xì)胞定位
        4.2.7 外源刺激物對EsPX蛋白表達(dá)的影響
        4.2.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    4.3 實驗結(jié)果
        4.3.1 EsPX序列及同源性分析結(jié)果
        4.3.2 EsPX多序列比對和系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建結(jié)果
        4.3.3 EsPX在不同組織中的分布情況
        4.3.4 外源刺激物對EsPX基因表達(dá)的影響
        4.3.5 EsPX蛋白在不同血細(xì)胞的定位
        4.3.6 外源刺激物對血細(xì)胞EsPX蛋白表達(dá)的影響
    4.4 討論
    4.5 本章小結(jié)
第五章 中華絨螯蟹MAPK基因的克隆及功能分析
    5.1 材料與儀器
        5.1.1 實驗儀器
        5.1.2 主要軟件
        5.1.3 試劑及試劑盒
    5.2 實驗方法
        5.2.1 實驗動物
        5.2.2 血細(xì)胞收集
        5.2.3 中華絨螯蟹EsMAPK序列分析
        5.2.4 EsMAPK mRNA組織表達(dá)分析
        5.2.5 外源刺激物對EsMAPK mRNA表達(dá)量的影響
        5.2.6 EsMAPK蛋白的原核表達(dá)
        5.2.7 中華絨螯蟹EsMAPK蛋白的亞細(xì)胞定位
        5.2.8 外源刺激物對EsMAPK蛋白表達(dá)的影響
        5.2.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    5.3 實驗結(jié)果
        5.3.1 EsMAPK序列分析
        5.3.2 EsMAPK氨基酸序列同源性分析和系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建
        5.3.3 EsMAPK在不同組織中的表達(dá)
        5.3.4 外源刺激物對EsMAPK基因表達(dá)的影響
        5.3.5 EsMAPK蛋白原核表達(dá)
        5.3.6 LPS和嗜水氣單胞菌對EsMAPK蛋白表達(dá)的影響
    5.4 討論
    5.5 本章小結(jié)
第六章 研究結(jié)果與展望
    6.1 研究結(jié)果
    6.2 主要創(chuàng)新點
    6.3 不足和展望
參考文獻(xiàn)
作者簡歷及攻讀博士期間發(fā)表的論文



本文編號：3879700