發(fā)布時(shí)間：2024-01-18 17:07

　　團(tuán)頭魴(Megalobrama amblycephala)屬于鯉科鯉亞科魴屬,草食性,是僅存于我國(guó)的一種重要淡水養(yǎng)殖魚類,具有非常好的市場(chǎng)需求。然而,近年來(lái)隨著養(yǎng)殖密度的擴(kuò)大和環(huán)境污染等因素的影響,各類疾病頻繁爆發(fā)。尤其以嗜水氣單胞菌的侵?jǐn)_最為猛烈,引起團(tuán)頭魴大量死亡,使團(tuán)頭魴的養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展遭受了巨大的損失。白細(xì)胞介素-6(Interleukin-6,IL-6),是迄今為止發(fā)現(xiàn)的具有廣泛生物學(xué)效應(yīng)的細(xì)胞因子之一,在先天性免疫與獲得性免疫方面皆具有重要作用,已有研究表明其在抵抗病原微生物入侵方面起著重要作用。為了闡明IL-6基因在團(tuán)頭魴抵抗嗜水氣單胞菌感染過程中的可能作用,本研究分析了團(tuán)頭魴IL-6基因(Mam IL-6)的序列特征,組織分布情況以及細(xì)菌感染后在免疫相關(guān)組織中的表達(dá)情況。此外,構(gòu)建了一系列Mam IL-6啟動(dòng)子p GL3重組載體并轉(zhuǎn)染進(jìn)細(xì)胞,并用LPS誘導(dǎo)轉(zhuǎn)染過重組載體的細(xì)胞,分析LPS對(duì)Mam IL-6啟動(dòng)子活性的影響,為進(jìn)一步對(duì)IL-6轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)理的研究奠定了基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:1.Mam IL-6的序列及表達(dá)分析Mam IL-6基因的c DNA序列全長(zhǎng)為1092 ...

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語(yǔ)表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 研究問題由來(lái)
    2 白細(xì)胞介素6的研究概況
        2.1 白細(xì)胞介素6的發(fā)現(xiàn)和來(lái)源
        2.2 白細(xì)胞介素6的分子結(jié)構(gòu)
        2.3 白細(xì)胞介素6的生物學(xué)活性
        2.4 白細(xì)胞介素6在臨床中的應(yīng)用
            2.4.1 作為多種疾病的臨床診斷指標(biāo)
            2.4.2 對(duì)機(jī)體的免疫保護(hù)作用
    3 研究的目的和意義
第二章 團(tuán)頭魴白細(xì)胞介素6基因的生物信息學(xué)分析及表達(dá)
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2 主要試劑耗材及儀器設(shè)備
            2.2.1 主要儀器設(shè)備
            2.2.2 試劑盒及藥品
            2.2.3 主要試劑配制
        2.3 總RNA提取和檢測(cè)
        2.4 c DNA第一條鏈的合成
        2.5 目的基因序列驗(yàn)證及定量引物專一性檢測(cè)
            2.5.1 PCR擴(kuò)增反應(yīng)
            2.5.2 PCR產(chǎn)物回收與純化
            2.5.3 連接轉(zhuǎn)化
            2.5.4 陽(yáng)性克隆的篩選
        2.6 Mam IL-6 基因的序列分析
        2.7 熒光定量PCR反應(yīng)檢測(cè)Mam IL-6 基因表達(dá)
        2.8 數(shù)據(jù)分析
    3 結(jié)果
        3.1 Mam IL-6 基因的序列分析
            3.1.1 Mam IL-6 序列的生物信息學(xué)分析
            3.1.2 IL-6 氨基酸序列比對(duì)和進(jìn)化分析
            3.1.3 Mam IL-6 的基因結(jié)構(gòu)分析
        3.2 Mam IL-6 的組織差異表達(dá)
        3.3 嗜水氣單胞菌感染對(duì)Mam IL-6 基因表達(dá)的影響
    4 討論
第三章 Mam IL-6 基因啟動(dòng)子缺失突變體的構(gòu)建與活性分析
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2 主要試劑耗材及儀器設(shè)備
            2.2.1 載體構(gòu)建主要試劑
            2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染主要試劑
            2.2.3 主要儀器設(shè)備
        2.3 團(tuán)頭魴基因組DNA的提取
        2.4 Mam IL-6 啟動(dòng)子生物信息學(xué)分析
            2.4.1 Mam IL-6 啟動(dòng)子序列的擴(kuò)增
            2.4.2 轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)與TATA box預(yù)測(cè)軟件及網(wǎng)址
            2.4.3 轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)預(yù)測(cè)軟件及網(wǎng)址
        2.5 構(gòu)建克隆載體p Blue-T-IL-6
        2.6 構(gòu)建重組質(zhì)粒p GL3-IL-6
            2.6.1 雙酶切
            2.6.2 酶切產(chǎn)物的純化回收
            2.6.3 酶切后目的片段與p GL3-basic載體的連接
            2.6.4 轉(zhuǎn)化及陽(yáng)性克隆的鑒定
            2.6.5 高純度質(zhì)粒的提取
        2.7 細(xì)胞培養(yǎng)與質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        2.8 LPS對(duì)IL-6 基因啟動(dòng)子的誘導(dǎo)
        2.9 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)及數(shù)據(jù)分析
    3 結(jié)果
        3.1 Mam IL-6 基因啟動(dòng)子分析
            3.1.1 Mam IL-6 轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)預(yù)測(cè)結(jié)果
            3.1.2 不同物種IL-6 基因近端啟動(dòng)子的分析結(jié)果
        3.2 Mam IL-6 基因系列p GL3重組載體的構(gòu)建及電泳鑒定結(jié)果
        3.3 Mam IL-6 基因系列啟動(dòng)子缺失體活性測(cè)定
        3.4 LPS處理對(duì)Mam IL-6 系列啟動(dòng)子缺失體活性的影響
    4 討論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝



本文編號(hào)：3879681