刺激隱核蟲(Cryptocaryon irritans)是嚴(yán)重危害東南亞海水養(yǎng)殖魚類的寄生蟲病原。前期研究發(fā)現(xiàn)刺激隱核蟲可以引起有效的皮膚粘膜及系統(tǒng)體液免疫應(yīng)答,但該寄生蟲感染后具體的免疫調(diào)控機(jī)理還不是十分清楚。本課題采用Real-time PCR檢測了石斑魚抗原遞呈通路免疫相關(guān)重要分子的組織分布,隨后測定了寄生蟲感染后粘膜免疫及系統(tǒng)免疫組織中的基因表達(dá)模式,探究它們在魚類抗寄生蟲感染中的作用。本論文取得的主要研究結(jié)果如下:首次克隆了石斑魚CTSS的全長序列(登錄號KU179320),同源比對顯示石斑魚CTSS與其他脊椎動物同源性為56.01%-79.1%。系統(tǒng)進(jìn)化樹分析顯示石斑魚CTSS與魚類同源蛋白親緣關(guān)系更近。組織表達(dá)分析顯示,CTSB和CTSL在健康石斑魚的13個試驗組織中廣泛表達(dá),但CTSB在脾臟、頭腎以及鰓中表達(dá)量較高,CTSL在肌肉及皮膚中表達(dá)水平較高。CTSS在試驗組織中呈現(xiàn)相對特異性表達(dá),在頭腎和脾臟中表達(dá)量較高。GILT表達(dá)量最高的組織是腮和頭腎。MHC ⅡA主要在石斑魚的胸腺、皮膚、腸和腮中檢測到較高表達(dá)水平;而MHC ⅡB在皮膚中表達(dá)量最高,其次是腮、脾臟、頭腎...

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞
第一章 緒論
    1.1 斜帶石斑魚簡介
        1.1.1 分類及分布情況
        1.1.2 形態(tài)特征
        1.1.3 養(yǎng)殖情況
    1.2 魚類免疫系統(tǒng)
        1.2.1 免疫器官及組織
        1.2.2 免疫細(xì)胞
        1.2.3 體液免疫因子
    1.3 魚類抗原遞呈及其相關(guān)基因研究概況
        1.3.1 組織蛋白酶
        1.3.2 γ-干擾素誘導(dǎo)的溶酶體硫還原酶GILT
        1.3.3 主要組織相容性復(fù)合體
    1.4 刺激隱核蟲及其免疫學(xué)研究
    1.5 本研究的目的及意義
第二章 石斑魚組織蛋白酶S克隆及序列分析
    2.1 實驗材料
        2.1.1 試驗試劑
        2.1.2 試驗儀器及工具準(zhǔn)備
        2.1.3 實驗魚
    2.2 實驗方法
        2.2.1 組織樣品的采集
        2.2.2 組織總RNA的提取
        2.2.3 RNA反轉(zhuǎn)錄
        2.2.4 CTSS全長克隆和序列分析
        2.2.5 瓊脂糖凝膠電泳檢測
        2.2.6 PCR產(chǎn)物的回收純化
        2.2.7 序列分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 RNA樣品質(zhì)量鑒定
        2.3.2 cDNA質(zhì)量鑒定
        2.3.3 CTSS 全長克隆
        2.3.4 蛋白比對
        2.3.5 進(jìn)化樹
    2.4 討論
    2.5 本章小結(jié)
第三章 刺激隱核蟲感染后石斑魚MHC Ⅱ免疫相關(guān)分子表達(dá)譜分析
    3.1 試驗材料
        3.1.1 試驗試劑及主要儀器
        3.1.2 試驗石斑魚
        3.1.3 感染用刺激隱核蟲
    3.2 試驗方法
        3.2.1 刺激隱核蟲感染
        3.2.2 組織樣品采集
        3.2.3 RNA提取及cDNA合成
        3.2.4 MHC Ⅱ免疫相關(guān)分子引物設(shè)計
        3.2.5 Real-time PCR
        3.2.6 數(shù)據(jù)分析
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 免疫相關(guān)分子的正常組織分布
        3.3.2 感染后MHC Ⅱ相關(guān)信號通路分子表達(dá)譜
    3.4 討論
    3.5 本章小結(jié)
第四章 刺激隱核蟲感染后石斑魚MHC Ⅰ類分子表達(dá)譜分析
    4.1 試驗材料
    4.2 試驗方法
        4.2.1 刺激隱核蟲感染及組織樣品的采集
        4.2.2 石斑魚組織總RNA提取
        4.2.3 cDNA合成
        4.2.4 引物設(shè)計
        4.2.5 Real-time PCR
        4.2.6 數(shù)據(jù)分析及信息學(xué)分析
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 石斑魚 β₂m蛋白比對及進(jìn)化分析
        4.3.2 健康石斑魚中MHC Ⅰα 和 β₂m組織分布
        4.3.3 刺激隱核蟲免疫M(jìn)HC Ⅰα 和 β₂m基因表達(dá)譜
    4.4 討論
    4.5 本章小結(jié)
結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀碩士學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
附件



本文編號：3867862