海洋環(huán)境中的溶藻細(xì)菌是一類對海洋微藻生長具有抑制作用，能裂解或直接殺死藻細(xì)胞的細(xì)菌。研究溶藻細(xì)菌的功能與機(jī)制是藻菌作用關(guān)系的熱點(diǎn)問題，對探討赤潮的生物治理等關(guān)鍵科學(xué)問題具有重要的指導(dǎo)意義。本文以一株微藻共棲細(xì)菌Rhodobacteraceae strain PD-2為研究對象，探明了它釋放的抑藻物質(zhì)和作用方式，確定了其群體感應(yīng)基因，并建立了利用同源重組技術(shù)敲除群體感應(yīng)基因的方法。主要研究內(nèi)容包括： 對微藻共棲細(xì)菌Rhodobacteraceae strain PD-2的培養(yǎng)條件進(jìn)行了優(yōu)化實(shí)驗，通過對比不同條件下的細(xì)菌密度、抑藻活性，獲得最適的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)基添加成分。結(jié)果表明采用Zobell2216E加葡萄糖培養(yǎng)基，30C的條件下培養(yǎng)細(xì)菌密度和抑藻活性最高。利用基于生物傳感器的雙層瓊脂法對PD-2產(chǎn)生的AHLs信號分子的種類進(jìn)行了初步研究，發(fā)現(xiàn)該菌至少可以產(chǎn)生3種AHLs分子，并與標(biāo)準(zhǔn)品比較，其中可能存在新種類的AHLs。 應(yīng)用之前實(shí)驗獲得的最適培養(yǎng)條件對具有抑藻效果的微藻共棲細(xì)菌PD-2進(jìn)行大規(guī)模的發(fā)酵培養(yǎng)，利用各種化學(xué)分離純化手段與生物活性示蹤方法(生物自顯影)對其代謝產(chǎn)物中的抑藻...

【文章頁數(shù)】：93 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1 赤潮的成因及發(fā)生過程
        1.1 赤潮形成的原因
        1.2 赤潮的發(fā)生過程
        1.3 赤潮生消與微生物的關(guān)系
    2 赤潮的生物防治
        2.1 海洋抑藻微生物的多樣性
            2.1.1 利用病毒抑制微藻的生長
            2.1.2 利用真菌抑制微藻的生長
            2.1.3 利用細(xì)菌抑制微藻的生長
            2.1.4 利用放線菌抑制微藻的生長
        2.2 海洋微生物抑藻方式及其作用機(jī)理
            2.2.1 直接溶藻
            2.2.2 間接溶藻
        2.3 海洋溶藻菌抑藻物質(zhì)的種類
            2.3.1 蛋白質(zhì)
            2.3.2 抗生素
            2.3.3 多肽
            2.3.4 氨基酸
            2.3.5 含氮類化合物
            2.3.6 其它抑藻物質(zhì)
    3 海洋細(xì)菌的抑藻與群體感應(yīng)現(xiàn)象
    4 本文研究的目的和意義
第二章 海洋抑藻細(xì)菌 PD-2 培養(yǎng)條件的優(yōu)化及 AHLs 產(chǎn)生特性研究
    1 前言
    2 實(shí)驗部分
        2.1 實(shí)驗材料及儀器試劑
            2.1.1 實(shí)驗材料與培養(yǎng)條件
            2.1.2 實(shí)驗藥品及試劑
            2.1.3 實(shí)驗儀器
            2.1.4 培養(yǎng)基及溶液配制
        2.2 實(shí)驗方法
            2.2.1 細(xì)菌 PD-2 培養(yǎng)條件優(yōu)化
            2.2.2 細(xì)菌 PD-2 代謝產(chǎn)物的提取
            2.2.3 不同培養(yǎng)條件下抑藻活性檢測
            2.2.4 不同培養(yǎng)條件下 AHLs 含量大小定性檢測
            2.2.5 AHLs 信號分子產(chǎn)生量與細(xì)菌密度生長關(guān)系
            2.2.6 利用 TLC 生物自顯影方法研究細(xì)菌 PD-2 中 AHLs 的種類
    3 實(shí)驗結(jié)果
        3.1 不同培養(yǎng)條件抑藻細(xì)菌 PD-2 的生長特性
        3.2 不同生長條件對抑藻活性的影響
        3.3 不同生長條件下對 AHLs 產(chǎn)生的影響
        3.4 AHLs 信號分子產(chǎn)生量與細(xì)菌密度生長關(guān)系
        3.5 基于 TLC 生物自顯影方法研究細(xì)菌 PD-2 中 AHLs 的種類
    4 本章小結(jié)
第三章 海洋微藻共棲細(xì)菌抑藻化合物的分離純化及結(jié)構(gòu)解析
    1 前言
    2 實(shí)驗部分
        2.1 實(shí)驗材料及儀器試劑
            2.1.1 實(shí)驗材料與培養(yǎng)條件
            2.1.2 實(shí)驗藥品及試劑
            2.1.3 實(shí)驗儀器
        2.2 實(shí)驗方法
            2.2.1 菌株培養(yǎng)和發(fā)酵
            2.2.2 細(xì)菌代謝產(chǎn)物的提取
            2.2.3 細(xì)菌抑藻活性代謝產(chǎn)物的分離純化及活性檢測
            2.2.4 抑藻化合物分子量的測定
            2.2.5 NMR 測定
            2.2.6 抑藻化合物的抑藻作用方式
    3 實(shí)驗結(jié)果
        3.1 細(xì)菌 PD-2 代謝產(chǎn)物中抑藻化合物的分離純化
            3.1.1 TLC 分離純化抗菌化合物
            3.1.2 抑藻活性的初步檢測
            3.1.3 3 號樣品分離純化抑藻化合物
        3.2 細(xì)菌 PD-2 代謝產(chǎn)物中抑藻化合物分子量的測定
        3.3 NMR 解析抑藻化合物的結(jié)構(gòu)
        3.4 抑藻化合物的抑藻作用方式
    4 本章小結(jié)
第四章 抑藻細(xì)菌 PD-2 中 luxI/R 同源基因敲除方法的建立
    1 抑藻細(xì)菌 PD-2 中 luxI/R 同源基因序列的探明
        1.1 前言
        1.2 實(shí)驗部分
            1.2.1 實(shí)驗材料及試劑
            1.2.2 實(shí)驗方法
        1.3 實(shí)驗結(jié)果與討論
            1.3.1 細(xì)菌 PD-2 中 luxI/R 同源基因序列的分析
            1.3.2 luxI/R 同源基因克隆
        1.4 小結(jié)
    2 PD-2 與 E.coli S17-1 pSRK Gm 結(jié)合能力研究
        2.1 前言
        2.2 實(shí)驗部分
            2.2.1 實(shí)驗材料及實(shí)驗儀器
            2.2.2 實(shí)驗方法
        2.3 實(shí)驗結(jié)果
            2.3.1 細(xì)菌 PD-2 利福平突變株的篩選
            2.3.2 細(xì)菌 PD-2-Rif-R-001 與 E.coli S17-1 pSRK Gm 結(jié)合實(shí)驗
            2.3.3 結(jié)合菌株中 pSRK Gm 質(zhì)粒的確認(rèn)
            2.3.4 細(xì)菌 PD-2 與 E.coli S17-1 pSRK Gm 結(jié)合培養(yǎng)條件優(yōu)化
        2.4 小結(jié)
    3 zlb I 上下游基因片段的融合及自殺質(zhì)粒重組子的構(gòu)建
        3.1 前言
        3.2 實(shí)驗部分
            3.2.1 實(shí)驗材料及實(shí)驗儀器
            3.2.2 實(shí)驗方法
        3.3 實(shí)驗結(jié)果
            3.3.1 zlb I 上下游基因的克隆與連接
            3.3.2 E.coli S17-1 pNPTS 138 Kan 重組轉(zhuǎn)化子的構(gòu)建
        3.4 小結(jié)
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
在讀期間發(fā)表論文
致謝
附錄



本文編號：3845674