本試驗(yàn)以烏克蘭鱗鯉(Ukraine scale carp)為研究對象,采用cDNA末端快速擴(kuò)增(RACE)和降落PCR(touch down PCR)技術(shù)對其丙酮酸激酶(PK)和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)的全長cDNA序列進(jìn)行解析,運(yùn)用DNAStar,NCBI等軟件和數(shù)據(jù)庫進(jìn)行了序列分析、同源比對、系統(tǒng)進(jìn)化樹的構(gòu)建和蛋白高級結(jié)構(gòu)預(yù)測。1.獲得烏克蘭鱗鯉全長PKcDNA序列1913bp,其中開放閱讀框1617bp,翻譯538個氨基酸,預(yù)測分子質(zhì)量為58.72kDa,等電點(diǎn)為6.57,3’非翻譯區(qū)長154bp及多聚腺苷酸尾巴,5’非翻譯區(qū)長143bp。具有活性位點(diǎn)和結(jié)構(gòu)域邊界。烏克蘭鱗鯉PK保守性較好,與已知的草魚、斑馬魚和綠河鲀的相似性為84%⁹2%,與哺乳類(人類PEPCK)的相似度為68%。2.獲得烏克蘭鱗鯉全長PEPCKcDNA序列2567bp,其中開放閱讀框1911bp,翻譯636個氨基酸,預(yù)測分子質(zhì)量為69.76kDa,等電點(diǎn)為7.89,3’非翻譯區(qū)長526bp及多聚腺苷酸尾巴,5’非翻譯區(qū)長151bp。具有活性位點(diǎn),GTP結(jié)合位點(diǎn),金屬結(jié)合位點(diǎn)...

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
第一章 文獻(xiàn)綜述
    第一節(jié) 研究背景
        1 魚類對飼料糖的利用能力
        2 魚類體內(nèi)糖代謝的調(diào)節(jié)
            2.1 胰島素的調(diào)節(jié)
            2.2 糖代謝酶的調(diào)節(jié)
        3 烏克蘭鱗鯉研究進(jìn)展
        4 RACE技術(shù)簡介
            4.1 3’RACE技術(shù)原理
            4.2 5’RACE技術(shù)原理
            4.3 RACE技術(shù)在水產(chǎn)動物研究中的應(yīng)用
        5 降落PCR技術(shù)簡介
    第二節(jié) 研究的目的與意義
    第三節(jié) 主要試驗(yàn)內(nèi)容
第二章 烏克蘭鱗鯉PK基因的克隆及序列分析
    第一節(jié) 材料和方法
        1 試驗(yàn)魚的暫養(yǎng)
        2 克隆載體與宿主細(xì)菌
        3 主要試劑和試劑盒
        4 主要試驗(yàn)儀器
        5 引物設(shè)計(jì)
        6 烏克蘭鱗鯉肝胰臟總 RNA 的制備
        7 第一鏈cDNA的合成
        8 PCR擴(kuò)增PK基因中間片段
        9 3’RACE PCR
        10 5’RACE PCR
        11 瓊脂糖電泳檢測PCR擴(kuò)增結(jié)果
        12 回收純化PCR產(chǎn)物
        13 感受態(tài)細(xì)胞的制備
        14 T-A克隆
        15 感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化
        16 菌液PCR方法篩選陽性克隆
        17 序列分析
    第二節(jié) 結(jié)果與分析
        1 烏克蘭鱗鯉肝胰臟總 RNA 的制備
        2 烏克蘭鱗鯉 PK 基因的克隆與測序結(jié)果
    第三節(jié) 討論
        1 PCR方法的選擇
        2 烏克蘭鱗鯉 PK 基因序列的分析
第三章 烏克蘭鱗鯉PEPCK基因的克隆及序列分析
    第一節(jié) 材料和方法
        1 試驗(yàn)魚的暫養(yǎng)
        2 克隆載體與宿主細(xì)菌
        3 主要試劑和試劑盒
        4 主要試驗(yàn)儀器
        5 引物設(shè)計(jì)
        6 制備烏克蘭鱗鯉肝胰臟總 RNA
        7 合成第一鏈 cDNA
        8 PCR擴(kuò)增PEPCK基因中間片段
        9 3’RACE PCR
        10 5’RACE PCR
        11 瓊脂糖電泳檢測PCR擴(kuò)增結(jié)果
        12 回收純化PCR產(chǎn)物、T-A克隆、轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞
        13 菌液PCR方法篩選陽性克隆
        14 序列分析
    第二節(jié) 結(jié)果與分析
        1 烏克蘭鱗鯉肝胰臟總 RNA 的制備
        2 烏克蘭鱗鯉 PEPCK 基因的克隆與測序結(jié)果
    第三節(jié) 討論
        1 PCR方法的選擇
        2 烏克蘭鱗鯉 PEPCK 基因序列的分析
第四章 不同營養(yǎng)水平下烏克蘭鱗鯉各組織PK、PEPCK基因的差異性表達(dá)的分析
    第一節(jié) 材料和方法
        1 試驗(yàn)魚的暫養(yǎng)
        2 主要試劑和試劑盒
        3 主要試驗(yàn)儀器
        4 引物設(shè)計(jì)
        5 飼養(yǎng)和取樣
        6 制備烏克蘭鱗鯉各組織總 RNA
        7 合成烏克蘭鱗鯉各組織第一鏈 cDNA
        8 PCR 確定低糖組、高糖組和禁食組烏克蘭鱗鯉各組織 PK、PEPCK 基因的表達(dá)
    第二節(jié) 結(jié)果與分析
        1 禁食組烏克蘭鱗鯉各組織 PK、PEPCK 基因的表達(dá)水平
        2 低糖組烏克蘭鱗鯉各組織 PK、PEPCK 基因的表達(dá)水平
        3 高糖組烏克蘭鱗鯉各組織 PK、PEPCK 基因的表達(dá)水平
    第三節(jié) 討論
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表文章情況



本文編號：3838088