發(fā)布時間：2023-06-02 22:49

　　草魚是我國一種重要的淡水養(yǎng)殖魚類,多年來在全國淡水養(yǎng)殖魚類總產量中排名第一,亞硝酸鹽是生態(tài)系統(tǒng)氮循環(huán)中的一種重要中間產物,可污染養(yǎng)殖水,水體中產生過多的亞硝酸鹽會使魚體中毒甚至死亡。亞硝酸鹽可引起魚類的應激,內質網應激是一種常見的應激反應,其中的PERK通路對細胞抵御環(huán)境刺激起著重要的作用。本研究探討了急性亞硝酸鹽暴露對草魚及其分離細胞的內質網應激、抗氧化、血液生化、細胞活力和凋亡等方面的影響,旨在為控制養(yǎng)殖水體中亞硝酸鹽濃度提供理論基礎。急性攻毒實驗選取體格健康的1齡草魚(37.21±0.30 g),分別暴露于0 mg/L、8 mg/L、13 mg/L、25 mg/L、50 mg/L的亞硝酸鹽溶液中0 h、12 h、24 h、48 h、96 h后,收集鰓、肝臟、肌肉、血液等樣品,檢測草魚肝臟和肌肉中grp78、perk、eif-2α、atf4、chop、bax、bcl-2基因的表達,觀察草魚肝臟、鰓的組織學結構,檢測草魚血液中的生理生化指標和抗氧化酶活性。體外實驗以草魚離體肝細胞(L8824)、腎細胞(CIK)為材料,將L8824細胞暴露于不同濃度的亞硝酸鹽溶液后,檢測細胞活力、內質...

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表
1 文獻綜述
    1.1 亞硝酸鹽概述
        1.1.1 亞硝酸鹽的來源
        1.1.2 亞硝酸鹽的毒性機制
        1.1.3 亞硝酸鹽對魚類的毒性效應
    1.2 內質網應激
        1.2.1 內質網應激概述
        1.2.2 未折疊蛋白反應
        1.2.3 內質網應激與細胞凋亡
        1.2.4 內質網應激在魚類中的研究進展
    1.3 亞硝酸鹽與內質網應激
    1.4 研究目的與意義
2 實驗材料與方法
    2.1 實驗設計
        2.1.1 亞硝酸鹽急性攻毒草魚實驗設計
        2.1.2 亞硝酸鹽急性攻毒細胞實驗設計
    2.2 實驗材料與方法
        2.2.1 組織樣品采集
        2.2.2 血液生化指標測定
        2.2.3 組織總RNA的提取、反轉錄和實時熒光定量PCR
        2.2.4 組織切片觀察
        2.2.5 細胞實驗方法
        2.2.6 數(shù)據(jù)分析
3 結果與分析
    3.1 亞硝酸鹽急性脅迫對草魚的影響
        3.1.1 鰓、肝臟的組織學結構
        3.1.2 血液抗氧化酶
        3.1.3 血液生化指標
        3.1.4 草魚中內質網應激PERK通路基因的組織表達
        3.1.5 草魚肝臟中內質網應激相關基因的表達
        3.1.6 草魚肌肉中內質網應激基因的表達
    3.2 亞硝酸鹽急性脅迫對草魚肝細胞的影響
        3.2.1 細胞活力
        3.2.2 基因表達檢測
        3.2.3 細胞凋亡檢測
        3.2.4 細胞形態(tài)觀察
        3.2.5 細胞內[Ca²⁺]_i檢測
        3.2.6 抑制劑2-APB對細胞內[Ca²⁺]_i信號的影響
        3.2.7 PERK抑制劑GSK2656157 對細胞凋亡的影響
    3.3 亞硝酸鹽急性脅迫對草魚腎細胞的影響
        3.3.1 細胞活力
        3.3.2 基因表達檢測
        3.3.3 細胞凋亡檢測
        3.3.4 細胞形態(tài)觀察
4 討論
    4.1 內質網應激相關基因的表達
    4.2 肝臟、鰓的組織病理學
    4.3 血液生化指標、抗氧化酶
    4.4 細胞活力、凋亡、[Ca²⁺]_i信號及細胞形態(tài)
    4.5 結論
參考文獻
發(fā)表論文及專利情況
致謝



本文編號：3828170