草魚是我國(guó)一種重要的淡水養(yǎng)殖魚類,多年來(lái)在全國(guó)淡水養(yǎng)殖魚類總產(chǎn)量中排名第一,亞硝酸鹽是生態(tài)系統(tǒng)氮循環(huán)中的一種重要中間產(chǎn)物,可污染養(yǎng)殖水,水體中產(chǎn)生過(guò)多的亞硝酸鹽會(huì)使魚體中毒甚至死亡。亞硝酸鹽可引起魚類的應(yīng)激,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是一種常見的應(yīng)激反應(yīng),其中的PERK通路對(duì)細(xì)胞抵御環(huán)境刺激起著重要的作用。本研究探討了急性亞硝酸鹽暴露對(duì)草魚及其分離細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、抗氧化、血液生化、細(xì)胞活力和凋亡等方面的影響,旨在為控制養(yǎng)殖水體中亞硝酸鹽濃度提供理論基礎(chǔ)。急性攻毒實(shí)驗(yàn)選取體格健康的1齡草魚(37.21±0.30 g),分別暴露于0 mg/L、8 mg/L、13 mg/L、25 mg/L、50 mg/L的亞硝酸鹽溶液中0 h、12 h、24 h、48 h、96 h后,收集鰓、肝臟、肌肉、血液等樣品,檢測(cè)草魚肝臟和肌肉中g(shù)rp78、perk、eif-2α、atf4、chop、bax、bcl-2基因的表達(dá),觀察草魚肝臟、鰓的組織學(xué)結(jié)構(gòu),檢測(cè)草魚血液中的生理生化指標(biāo)和抗氧化酶活性。體外實(shí)驗(yàn)以草魚離體肝細(xì)胞(L8824)、腎細(xì)胞(CIK)為材料,將L8824細(xì)胞暴露于不同濃度的亞硝酸鹽溶液后,檢測(cè)細(xì)胞活力、內(nèi)質(zhì)...

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語(yǔ)表
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 亞硝酸鹽概述
        1.1.1 亞硝酸鹽的來(lái)源
        1.1.2 亞硝酸鹽的毒性機(jī)制
        1.1.3 亞硝酸鹽對(duì)魚類的毒性效應(yīng)
    1.2 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
        1.2.1 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激概述
        1.2.2 未折疊蛋白反應(yīng)
        1.2.3 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與細(xì)胞凋亡
        1.2.4 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在魚類中的研究進(jìn)展
    1.3 亞硝酸鹽與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
    1.4 研究目的與意義
2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
        2.1.1 亞硝酸鹽急性攻毒草魚實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
        2.1.2 亞硝酸鹽急性攻毒細(xì)胞實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        2.2.1 組織樣品采集
        2.2.2 血液生化指標(biāo)測(cè)定
        2.2.3 組織總RNA的提取、反轉(zhuǎn)錄和實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        2.2.4 組織切片觀察
        2.2.5 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.6 數(shù)據(jù)分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 亞硝酸鹽急性脅迫對(duì)草魚的影響
        3.1.1 鰓、肝臟的組織學(xué)結(jié)構(gòu)
        3.1.2 血液抗氧化酶
        3.1.3 血液生化指標(biāo)
        3.1.4 草魚中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激PERK通路基因的組織表達(dá)
        3.1.5 草魚肝臟中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)基因的表達(dá)
        3.1.6 草魚肌肉中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激基因的表達(dá)
    3.2 亞硝酸鹽急性脅迫對(duì)草魚肝細(xì)胞的影響
        3.2.1 細(xì)胞活力
        3.2.2 基因表達(dá)檢測(cè)
        3.2.3 細(xì)胞凋亡檢測(cè)
        3.2.4 細(xì)胞形態(tài)觀察
        3.2.5 細(xì)胞內(nèi)[Ca²⁺]_i檢測(cè)
        3.2.6 抑制劑2-APB對(duì)細(xì)胞內(nèi)[Ca²⁺]_i信號(hào)的影響
        3.2.7 PERK抑制劑GSK2656157 對(duì)細(xì)胞凋亡的影響
    3.3 亞硝酸鹽急性脅迫對(duì)草魚腎細(xì)胞的影響
        3.3.1 細(xì)胞活力
        3.3.2 基因表達(dá)檢測(cè)
        3.3.3 細(xì)胞凋亡檢測(cè)
        3.3.4 細(xì)胞形態(tài)觀察
4 討論
    4.1 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)基因的表達(dá)
    4.2 肝臟、鰓的組織病理學(xué)
    4.3 血液生化指標(biāo)、抗氧化酶
    4.4 細(xì)胞活力、凋亡、[Ca²⁺]_i信號(hào)及細(xì)胞形態(tài)
    4.5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
發(fā)表論文及專利情況
致謝



本文編號(hào)：3828170