本文依托實(shí)驗(yàn)室自建的雜色鮑轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫、網(wǎng)絡(luò)NCBI和KEGG數(shù)據(jù)庫,篩選出若干雜色鮑幼蟲能量代謝相關(guān)的基因片段,并構(gòu)建了雜色鮑幼蟲能量代謝調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。通過設(shè)計(jì)RNA干擾實(shí)驗(yàn)和誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn),利用qPCR和原位雜交檢測(cè)基因表達(dá)情況,主要研究結(jié)果如下:(1)以甲狀腺激素信號(hào)通路和胰島素/胰島素樣生長(zhǎng)因子信號(hào)通路基因?yàn)楹诵?結(jié)合NCBI的核酸數(shù)據(jù)庫、文獻(xiàn)和網(wǎng)上的資料,經(jīng)過序列拼接并使用Blast2Go軟件對(duì)其轉(zhuǎn)錄組序列進(jìn)行注釋分析,最終獲得具有明確功能注釋的候選基因序列186個(gè),將其分為細(xì)胞組分、生物學(xué)過程和分子功能共三類。進(jìn)一步分析各基因表達(dá)量變化趨勢(shì),將106條表達(dá)量具有顯著性差異基因的功能進(jìn)行分析,歸類為免疫或應(yīng)激反應(yīng)、蛋白質(zhì)翻譯過程、細(xì)胞新陳代謝、細(xì)胞周期、膜蛋白、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)、染色體組成、鈣離子結(jié)合、神經(jīng)系統(tǒng)和未知九類。(2)使用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS對(duì)所有基因兩兩之間的表達(dá)量相關(guān)系數(shù)r進(jìn)行計(jì)算,并將結(jié)果導(dǎo)入Cytoscape軟件中,繪制雜色鮑幼蟲能量代謝調(diào)控網(wǎng)絡(luò),這是對(duì)爆炸性增長(zhǎng)的測(cè)序數(shù)據(jù)發(fā)掘利用的一次嘗試。(3)RNA干擾實(shí)驗(yàn)和誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示甲狀腺激素能正調(diào)控的信號(hào)通路有MAPK(ERK)...

【文章頁數(shù)】：89 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 緒論
    1.1 軟體動(dòng)物能量代謝研究進(jìn)展
        1.1.1 環(huán)境溫度對(duì)能量代謝的影響
        1.1.2 體重與能量代謝的關(guān)系
        1.1.3 鹽度對(duì)能量代謝的影響
        1.1.4 攝食與饑餓對(duì)能量代謝的影響
        1.1.5 其它因素對(duì)能量代謝的影響
        1.1.6 軟體動(dòng)物胚胎及幼蟲發(fā)育過程中能量代謝底物的研究
    1.2 TH信號(hào)通路與IIS信號(hào)通路對(duì)能量代謝的調(diào)控
        1.2.1 TH信號(hào)通路研究進(jìn)展及其對(duì)能量代謝的調(diào)控
        1.2.2 IIS信號(hào)通路研究進(jìn)展及其對(duì)能量代謝的調(diào)控
        1.2.3 TH信號(hào)通路與IIS信號(hào)通路的相關(guān)性
    1.3 整胚原位雜交技術(shù)簡(jiǎn)介
        1.3.1 整胚原位雜交發(fā)展歷程及原理
        1.3.2 整胚原位雜交的應(yīng)用
    1.4 本研究的目的
    1.5 研究?jī)?nèi)容和意義
第2章 能量代謝調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)流程設(shè)計(jì)
        2.2.2 文庫構(gòu)建與序列拼接
        2.2.3 功能分析
        2.2.4 表達(dá)趨勢(shì)歸類
        2.2.5 相關(guān)度分析
        2.2.6 網(wǎng)絡(luò)生成及優(yōu)化
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 序列拼接與功能分析
        2.3.2 表達(dá)趨勢(shì)歸類
        2.3.3 相關(guān)度分析
        2.3.4 網(wǎng)絡(luò)優(yōu)化及結(jié)果輸出
    2.4 討論
第3章 TH信號(hào)通路對(duì)能量代謝的調(diào)控
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 雜色鮑成鮑與幼蟲采樣
        3.1.2 主要儀器和試劑
        3.1.3 引物
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 異硫氰酸胍(GT)一步法提取總RNA
        3.2.2 總RNA逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一條鏈
        3.2.3 普通PCR獲取體外轉(zhuǎn)錄模板序列
        3.2.4 割膠純化PCR產(chǎn)物
        3.2.5 載體連接
        3.2.6 制備感受態(tài)細(xì)胞
        3.2.7 感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化及培養(yǎng)
        3.2.8 陽性單克隆菌株篩選
        3.2.9 菌液測(cè)序
        3.2.10 干擾實(shí)驗(yàn)與誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)
        3.2.11 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        3.2.12 胚胎整體原位雜交
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 總RNA提取結(jié)果
        3.3.2 干擾探針模板的制備結(jié)果
        3.3.3 雙鏈探針制備結(jié)果
        3.3.4 干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.5 誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.4 討論
第4章 IIS信號(hào)通路對(duì)能量代謝的調(diào)控
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 總RNA提取結(jié)果
        4.3.2 干擾探針模板的制備結(jié)果
        4.3.3 雙鏈探針制備結(jié)果
        4.3.4 干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.5 誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.4 討論
第5章 結(jié)論與展望
致謝
參考文獻(xiàn)
在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號(hào)：3818971