金錢魚不但是一種具有觀賞和食用價值的名貴海水經(jīng)濟魚類,而且雌性生長速度明顯高于雄性。因此,獲得雌雄性別差異分子標(biāo)記,從遺傳角度鑒定金錢魚的性別,對實現(xiàn)分子輔助育種及后續(xù)的單性化養(yǎng)殖意義重大。目前,隨著環(huán)境惡化,金錢魚種質(zhì)資源退化越來越嚴(yán)重,因此,對金錢魚遺傳多樣性進行評估,可為制定科學(xué)的資源保護提供理論參考。本文以金錢魚為研究對象,采用SSR、AFLP、SRAP三種分子標(biāo)記技術(shù)篩選其雌雄性別差異標(biāo)記,并分析雌、雄群體遺傳多樣性。主要結(jié)果如下:1、基于SSR技術(shù)的金錢魚性別特異分子標(biāo)記篩選及雌雄群體遺傳多樣性分析以金錢魚基因組為模板,通過磁珠富集法得到65條微衛(wèi)星序列,并設(shè)計了45對引物對金錢魚雌雄基因池進行初步篩選。結(jié)果發(fā)現(xiàn),2對引物(SAS21、SAS23)可擴增出雌雄差異條帶。分別以雌雄金錢魚各30尾DNA為模板,再次采用引物SAS21、SAS23進行擴增。引物SAS21擴增的差異條帶在雌性金錢魚中出現(xiàn)比率為30%,在雄性金錢魚中所占比率為10%;而引物SAS23擴增的差異條帶在雌性金錢魚中所占比率為10%,在雄性金錢魚中出現(xiàn)比率為60%。以篩選獲得多態(tài)性較高的3對微衛(wèi)星引物對金錢...

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 SSR、AFLP、SRAP三種分子標(biāo)記的簡介
        1.1.1 SSR標(biāo)記技術(shù)
        1.1.2 AFLP標(biāo)記技術(shù)
        1.1.3 SRAP標(biāo)記技術(shù)
    1.2 SSR、AFLP、SRAP三種標(biāo)記在性別差異標(biāo)記中的應(yīng)用
        1.2.1 SSR標(biāo)記技術(shù)在性別差異標(biāo)記中的應(yīng)用
        1.2.2 AFLP標(biāo)記技術(shù)在性別差異標(biāo)記中的應(yīng)用
        1.2.3 SRAP標(biāo)記技術(shù)在性別差異標(biāo)記中的應(yīng)用
    1.3 SSR、AFLP、SRAP三種分子標(biāo)記在遺傳多樣性方面的應(yīng)用
        1.3.1 SSR標(biāo)記技術(shù)在遺傳多樣性的應(yīng)用
        1.3.2 AFLP在遺傳多樣性的應(yīng)用
        1.3.3 SRAP標(biāo)記技術(shù)在遺傳多樣性的應(yīng)用
    1.4 金錢魚的研究現(xiàn)狀
    1.5 本研究的目的和意義
2 基于SSR技術(shù)的金錢魚性別特異分子標(biāo)記篩選及雌雄群體遺傳多樣性分析
    2.1 材料與方法
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 主要儀器與工具
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 實驗方法
            2.1.4.1 冰凍切片技術(shù)鑒定雌雄金錢魚
            2.1.4.2 基因組DNA的提取
            2.1.4.3 酶切及接頭連接
            2.1.4.4 磁珠富集及片段克隆
            2.1.4.5 篩選陽性克隆及序列測定
            2.1.4.6 微衛(wèi)星序列分析及引物設(shè)計
            2.1.4.7 篩選微衛(wèi)星多態(tài)性引物
            2.1.4.8 建立雌雄金錢魚的BSA基因池
            2.1.4.9 金錢魚雌雄差異條帶的篩選
            2.1.4.10 數(shù)據(jù)分析
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 SSR序列的分析
        2.2.2 金錢魚雌雄性腺切片圖
        2.2.3 基于SSR技術(shù)的雌雄差異條帶的篩選
        2.2.4 基于SSR技術(shù)的雌雄群體遺傳多樣性的分析
    2.3 討論
        2.3.1 SSR序列的分析
        2.3.2 基于SSR技術(shù)的雌雄差異條帶的篩選
        2.3.3 基于SSR的雌雄群體遺傳多樣性的分析
        2.3.4 關(guān)于非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳的若干問題
3 基于AFLP技術(shù)的金錢魚性別特異分子標(biāo)記篩選及雌雄群體遺傳多樣性分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 引物與接頭序列
        3.1.3 方法
            3.1.3.1 基因組DNA的提取
            3.1.3.2 基因組DNA的酶切
            3.1.3.3 接頭的連接
            3.1.3.4 預(yù)擴增反應(yīng)
            3.1.3.5 選擇性擴增反應(yīng)
            3.1.3.6 變性聚丙烯酰胺凝膠的制備
            3.1.3.7 電泳
            3.1.3.8 銀染
            3.1.3.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計及分析
    3.2 實驗結(jié)果
        3.2.1 基于AFLP技術(shù)的雌雄差異條帶的篩選
        3.2.2 基于AFLP技術(shù)的雌雄群體遺傳多樣性的分析
    3.3 討論
        3.3.1 基于AFLP技術(shù)的雌雄差異條帶的篩選
        3.3.2 基于AFLP技術(shù)的雌雄群體遺傳多樣性的分析
        3.3.3 關(guān)于變形聚丙烯酰胺凝膠電泳的若干問題
4 基于SRAP技術(shù)的金錢魚性別特異分子標(biāo)記篩選及雌雄群體遺傳多樣性分析
    4.1 材料和方法
        4.1.1 實驗材料
        4.1.2 實驗方法
            4.1.2.1 基因組DNA的提取
            4.1.2.2 SRAP擴增
            4.1.2.3 數(shù)據(jù)分析
    4.2 實驗結(jié)果
        4.2.1 基于SRAP技術(shù)的雌雄差異條帶的篩選
        4.2.2 基于SRAP技術(shù)的雌雄群體遺傳多樣性的分析
    4.3 討論
        4.3.1 基于SRAP技術(shù)的雌雄差異條帶的篩選
        4.3.2 基于SRAP技術(shù)的雌雄群體遺傳多樣性的分析
5 結(jié)論
參考文獻
致謝
作者簡介
導(dǎo)師簡介



本文編號：3816437