細(xì)菌性病原在鮑病害中占據(jù)主導(dǎo)地位,而細(xì)菌性病原以弧菌為主,報(bào)道的鮑相關(guān)病原菌主要有:溶藻弧菌、副溶血弧菌、河流弧菌、亮弧菌、哈維弧菌等。目前針對(duì)細(xì)菌性疾病主要依賴抗菌藥物治療,抗菌藥物的使用使得養(yǎng)殖水體的病原菌處于選擇壓力的環(huán)境下,誘導(dǎo)病原菌產(chǎn)生耐藥性,甚至產(chǎn)生多重耐藥性,病原菌耐藥性的產(chǎn)生最終會(huì)導(dǎo)致抗菌藥物用量增加,最終無藥可用,造成惡性循環(huán)。水產(chǎn)養(yǎng)殖上對(duì)細(xì)菌耐藥性的研究主要集中在魚、蝦類,而對(duì)貝類相關(guān)的耐藥性研究及耐藥機(jī)制鮮有報(bào)道,因此本文調(diào)查4個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)鮑的消化道及養(yǎng)殖環(huán)境異養(yǎng)菌的耐藥性,并從所獲得的鮑消化道異養(yǎng)菌中選取對(duì)恩諾沙星敏感的哈維弧菌進(jìn)行耐藥性誘導(dǎo),對(duì)獲得的恩諾沙星耐藥株(HL-R)與恩諾沙星敏感株(HL-S)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組分析,從分子水平初步探究鮑體內(nèi)哈維弧菌的耐藥機(jī)制,為鮑細(xì)菌性疾病預(yù)防與治療提供理論基礎(chǔ)。采用紙片擴(kuò)散法對(duì)分離于鮑消化道及養(yǎng)殖水體的575株異養(yǎng)菌進(jìn)行耐藥性檢測(cè),發(fā)現(xiàn)菌株對(duì)青霉素G、卡那霉素、慶大霉素和利福平具有較高的耐藥率(消化道異養(yǎng)菌耐藥率范圍在40%⁸0.65%,水體菌為27.03%⁸3.95%),對(duì)諾氟沙星...

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮略詞
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 鮑的簡(jiǎn)介
        1.1.1 鮑的分布及養(yǎng)殖
        1.1.2 鮑的病害研究概況
    1.2 水產(chǎn)養(yǎng)殖中細(xì)菌的耐藥性研究現(xiàn)狀
        1.2.1 水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中抗生素的使用及其風(fēng)險(xiǎn)
        1.2.2 耐藥性來源與耐藥性研究概況
    1.3 耐藥性檢測(cè)方法
        1.3.1 常規(guī)的藥物敏感試驗(yàn)
        1.3.2 分子手段檢測(cè)耐藥性
        1.3.3 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序檢測(cè)耐藥性
    1.4 抗菌藥物的抗菌機(jī)制及耐藥機(jī)制
        1.4.1 抗菌藥物的抗菌機(jī)制
        1.4.2 細(xì)菌的耐藥機(jī)制
        1.4.3. 細(xì)菌對(duì)喹諾酮類藥物的耐藥機(jī)制
    1.5 學(xué)位論文結(jié)構(gòu)路線圖
    1.6 研究的目的和意義
2 鮑消化道及養(yǎng)殖環(huán)境中異養(yǎng)菌耐藥性的調(diào)查
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 菌株來源
        2.1.2 抗菌藥物種類
        2.1.3 所用培養(yǎng)基及試劑
        2.1.4 主要儀器與設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 采樣方法
        2.2.2 藥敏試驗(yàn)紙片擴(kuò)散法
        2.2.3 統(tǒng)計(jì)方法
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 不同養(yǎng)殖場(chǎng)鮑及養(yǎng)殖環(huán)境分離所得的菌株數(shù)
        2.3.2 鮑消化道與養(yǎng)殖環(huán)境異養(yǎng)菌的耐藥性分析
            2.3.2.1 鮑消化道與養(yǎng)殖環(huán)境異養(yǎng)菌對(duì)不同抗菌藥物耐藥率的差異
            2.3.2.2 鮑消化道及養(yǎng)殖環(huán)境異養(yǎng)菌的多重耐藥性差異
    2.4 討論
        2.4.1 鮑消化道及養(yǎng)殖環(huán)境中異養(yǎng)菌對(duì)不同抗菌藥物的耐藥性分析
        2.4.2 鮑消化道及養(yǎng)殖環(huán)境異養(yǎng)菌的多重耐藥性及MARI分析
3 哈維弧菌耐藥株的誘導(dǎo)
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 菌株來源
        3.1.2 抗菌藥物種類
        3.1.3 所用培養(yǎng)基及試劑
        3.1.4 所需引物
        3.1.5 主要儀器與設(shè)備
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 細(xì)菌DNA的提取
        3.2.2 菌株P(guān)CR鑒定
        3.2.3 K-B法
        3.2.4 最低抑菌濃度的測(cè)定
        3.2.5 耐藥株的誘導(dǎo)
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 菌株的鑒定
        3.3.2 敏感株與誘導(dǎo)耐藥株的藥敏結(jié)果
    3.4 討論
4 哈維弧菌的耐藥機(jī)制研究
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)菌株
        4.1.2 所用試劑與儀器
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的評(píng)估與處理
            4.2.1.1 轉(zhuǎn)錄組的實(shí)驗(yàn)流程與分析流程
            4.2.1.2 RNA-seq測(cè)序質(zhì)量評(píng)估
            4.2.1.3 與參考基因組比對(duì)
            4.2.1.4 基因統(tǒng)計(jì)
        4.2.2 轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的分析
            4.2.2.1 差異基因分析
            4.2.2.2 Gene Ontology功能注釋分析
        4.2.3 轉(zhuǎn)錄組中耐藥基因的qRT-PCR
            4.2.3.1 提取RNA
            4.2.3.2 cDNA的合成
            4.2.3.3 qRT-PCR引物的設(shè)計(jì)與合成
            4.2.3.4 qRT-PCR的實(shí)驗(yàn)操作
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 測(cè)序評(píng)估
            4.3.1.1 測(cè)序reads質(zhì)量評(píng)估
            4.3.1.2 測(cè)序飽和度分析
            4.3.1.3 比對(duì)參考基因組
        4.3.2 基因統(tǒng)計(jì)
            4.3.2.1 基因覆蓋度
        4.3.3 差異分析
            4.3.3.1 誘導(dǎo)前后差異基因分析
            4.3.3.2 差異基因GO功能注釋分析
            4.3.3.3 篩選與喹諾酮耐藥機(jī)制相關(guān)的差異基因
        4.3.4 qRT-PCR的驗(yàn)證
    4.4 討論
        4.4.1 靶酶基因突變與哈維弧菌耐藥性的關(guān)系
        4.4.2 主動(dòng)外排泵系統(tǒng)與哈維弧菌耐藥性的關(guān)系
        4.4.3 SOS反應(yīng)與哈維弧菌耐藥性的關(guān)系
        4.4.4 細(xì)菌群體效應(yīng)與哈維弧菌耐藥性的關(guān)系
5 全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介
導(dǎo)師簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3786666