1.斜帶石斑魚肝細(xì)胞分離及原代培養(yǎng)方法的建立通過不同的分離方法和培養(yǎng)條件探索斜帶石斑魚肝細(xì)胞的原代培養(yǎng),以建立穩(wěn)定可靠的斜帶石斑魚肝細(xì)胞原代培養(yǎng)模型,同時(shí)觀察長(zhǎng)期培養(yǎng)過程中肝細(xì)胞的形態(tài)變化。采用組織塊分離法和胰蛋白酶(含EDTA)消化法分離肝細(xì)胞,并通過密度梯度離心法分離純化肝細(xì)胞,細(xì)胞懸液于DMEM/F-12、M199和L-15培養(yǎng)液中培養(yǎng);細(xì)胞活力及數(shù)量采用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),并通過MTT法測(cè)定細(xì)胞增殖率;同時(shí),測(cè)定不同時(shí)間培養(yǎng)上清液中乳酸脫氫酶(LDH)活性、白蛋白(ALB)和尿素氮(BUN)水平,分析原代培養(yǎng)肝細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。結(jié)果表明,斜帶石斑魚肝細(xì)胞原代培養(yǎng)不適合采用組織塊方法,而胰蛋白酶消化法則獲得良好穩(wěn)定的培養(yǎng)效果,細(xì)胞產(chǎn)量達(dá)到1.6×108 cells/g肝重,活細(xì)胞數(shù)達(dá)到95%;L-15培養(yǎng)基細(xì)胞生長(zhǎng)明顯優(yōu)于DMEM/F-12和M199兩種培養(yǎng)基;啟動(dòng)原代培養(yǎng)的48-72 h階段肝細(xì)胞生長(zhǎng)代謝旺盛,培養(yǎng)上清中LDH活性顯著降低(P<0.05),ALB和BUN含量顯著升高(P<0.05)。結(jié)果顯示,0.25%的胰蛋白酶常溫消化法適合斜帶石斑魚肝細(xì)胞的分離,斜帶石斑...

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
主要符號(hào)表
第1章 引言
    1.1 文獻(xiàn)綜述
        1.1.1 海水魚類細(xì)胞培養(yǎng)研究進(jìn)展
        1.1.2 皮質(zhì)醇對(duì)機(jī)體代謝調(diào)節(jié)的研究進(jìn)展
    1.2 研究?jī)?nèi)容
    1.3 本實(shí)驗(yàn)的研究目的和意義
第2章 斜帶石斑魚肝細(xì)胞分離及原代培養(yǎng)方法建立
    2.1 材料與方法
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)魚飼養(yǎng)管理
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 肝細(xì)胞原代培養(yǎng)方法
        2.1.4 肝細(xì)胞活力測(cè)定
        2.1.5 斜帶石斑魚肝細(xì)胞最佳培養(yǎng)基的確定
        2.1.6 肝細(xì)胞增殖率鑒定
        2.1.7 斜帶石斑魚肝細(xì)胞功能測(cè)定
        2.1.8 數(shù)據(jù)處理
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 分離與純化方法對(duì)斜帶石斑魚肝細(xì)胞數(shù)量和活力的影響
        2.2.2 不同培養(yǎng)基對(duì)斜帶石斑魚肝細(xì)胞原代培養(yǎng)的影響
        2.2.3 MTT法測(cè)定不同培養(yǎng)時(shí)間斜帶石斑魚肝細(xì)胞增殖率的變化
        2.2.4 不同培養(yǎng)時(shí)間斜帶石斑魚肝細(xì)胞培養(yǎng)上清液中LDH活性、ALB含量和BUN含量的變化
    2.3 討論
    2.4 小結(jié)
第3章 皮質(zhì)醇對(duì)斜帶石斑魚原代培養(yǎng)肝細(xì)胞功能的影響
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)魚飼養(yǎng)管理
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 肝細(xì)胞分離及原代培養(yǎng)
        3.1.4 皮質(zhì)醇孵育實(shí)驗(yàn)
        3.1.5 肝細(xì)胞增殖率鑒定
        3.1.6 生化分析
        3.1.7 數(shù)據(jù)處理
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 皮質(zhì)醇對(duì)肝細(xì)胞增值率的影響
        3.2.2 原代培養(yǎng)肝細(xì)胞生理功能分析
    3.3 討論
    3.4 小結(jié)
第4章 皮質(zhì)醇對(duì)原代培養(yǎng)肝細(xì)胞糖和脂肪代謝的影響
    4.1 材料與方法
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)魚飼養(yǎng)管理
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 肝細(xì)胞分離及原代培養(yǎng)
        4.1.4 皮質(zhì)醇孵育實(shí)驗(yàn)
        4.1.5 生化分析
        4.1.6 肝細(xì)胞總RNA提取和熒光定量PCR
        4.1.7 數(shù)據(jù)處理
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 肝細(xì)胞葡萄糖釋放以及肝細(xì)胞內(nèi)糖原、丙酮酸和甘油三酯含量分析
        4.2.2 肝細(xì)胞代謝相關(guān)酶活性分析
        4.2.3 肝細(xì)胞代謝相關(guān)基因表達(dá)表達(dá)量分析
    4.3 討論
    4.4 小結(jié)
全文總結(jié)
致謝
參考文獻(xiàn)
在學(xué)期間科研成果情況



本文編號(hào)：3751574