1.斜帶石斑魚肝細胞分離及原代培養(yǎng)方法的建立通過不同的分離方法和培養(yǎng)條件探索斜帶石斑魚肝細胞的原代培養(yǎng),以建立穩(wěn)定可靠的斜帶石斑魚肝細胞原代培養(yǎng)模型,同時觀察長期培養(yǎng)過程中肝細胞的形態(tài)變化。采用組織塊分離法和胰蛋白酶(含EDTA)消化法分離肝細胞,并通過密度梯度離心法分離純化肝細胞,細胞懸液于DMEM/F-12、M199和L-15培養(yǎng)液中培養(yǎng);細胞活力及數量采用血球計數板計數,并通過MTT法測定細胞增殖率;同時,測定不同時間培養(yǎng)上清液中乳酸脫氫酶(LDH)活性、白蛋白(ALB)和尿素氮(BUN)水平,分析原代培養(yǎng)肝細胞生長狀態(tài)。結果表明,斜帶石斑魚肝細胞原代培養(yǎng)不適合采用組織塊方法,而胰蛋白酶消化法則獲得良好穩(wěn)定的培養(yǎng)效果,細胞產量達到1.6×108 cells/g肝重,活細胞數達到95%;L-15培養(yǎng)基細胞生長明顯優(yōu)于DMEM/F-12和M199兩種培養(yǎng)基;啟動原代培養(yǎng)的48-72 h階段肝細胞生長代謝旺盛,培養(yǎng)上清中LDH活性顯著降低(P<0.05),ALB和BUN含量顯著升高(P<0.05)。結果顯示,0.25%的胰蛋白酶常溫消化法適合斜帶石斑魚肝細胞的分離,斜帶石斑...

【文章頁數】：61 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
主要符號表
第1章 引言
    1.1 文獻綜述
        1.1.1 海水魚類細胞培養(yǎng)研究進展
        1.1.2 皮質醇對機體代謝調節(jié)的研究進展
    1.2 研究內容
    1.3 本實驗的研究目的和意義
第2章 斜帶石斑魚肝細胞分離及原代培養(yǎng)方法建立
    2.1 材料與方法
        2.1.1 實驗魚飼養(yǎng)管理
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 肝細胞原代培養(yǎng)方法
        2.1.4 肝細胞活力測定
        2.1.5 斜帶石斑魚肝細胞最佳培養(yǎng)基的確定
        2.1.6 肝細胞增殖率鑒定
        2.1.7 斜帶石斑魚肝細胞功能測定
        2.1.8 數據處理
    2.2 結果
        2.2.1 分離與純化方法對斜帶石斑魚肝細胞數量和活力的影響
        2.2.2 不同培養(yǎng)基對斜帶石斑魚肝細胞原代培養(yǎng)的影響
        2.2.3 MTT法測定不同培養(yǎng)時間斜帶石斑魚肝細胞增殖率的變化
        2.2.4 不同培養(yǎng)時間斜帶石斑魚肝細胞培養(yǎng)上清液中LDH活性、ALB含量和BUN含量的變化
    2.3 討論
    2.4 小結
第3章 皮質醇對斜帶石斑魚原代培養(yǎng)肝細胞功能的影響
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實驗魚飼養(yǎng)管理
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 肝細胞分離及原代培養(yǎng)
        3.1.4 皮質醇孵育實驗
        3.1.5 肝細胞增殖率鑒定
        3.1.6 生化分析
        3.1.7 數據處理
    3.2 結果
        3.2.1 皮質醇對肝細胞增值率的影響
        3.2.2 原代培養(yǎng)肝細胞生理功能分析
    3.3 討論
    3.4 小結
第4章 皮質醇對原代培養(yǎng)肝細胞糖和脂肪代謝的影響
    4.1 材料與方法
        4.1.1 實驗魚飼養(yǎng)管理
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 肝細胞分離及原代培養(yǎng)
        4.1.4 皮質醇孵育實驗
        4.1.5 生化分析
        4.1.6 肝細胞總RNA提取和熒光定量PCR
        4.1.7 數據處理
    4.2 結果
        4.2.1 肝細胞葡萄糖釋放以及肝細胞內糖原、丙酮酸和甘油三酯含量分析
        4.2.2 肝細胞代謝相關酶活性分析
        4.2.3 肝細胞代謝相關基因表達表達量分析
    4.3 討論
    4.4 小結
全文總結
致謝
參考文獻
在學期間科研成果情況



本文編號：3751574