為鑒定導(dǎo)致鯽魚(yú)嘴部潰爛、肛門(mén)紅腫、腹部有出血點(diǎn)癥狀的病原菌,并建立一種快速檢測(cè)該病原菌的方法,本研究采用形態(tài)學(xué)、生理生化特性分析及16S rDNA序列分析方法從患病鯽魚(yú)中分離鑒定病原菌株,并進(jìn)行了動(dòng)物回歸實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示,從患病鯽魚(yú)中分離菌株為弗勞地枸櫞酸桿菌(Citrobacter freundii),命名為fsznc-08,該菌對(duì)鯽魚(yú)具有致病性。針對(duì)該菌GalF基因、petA基因和FliC基因設(shè)計(jì)了3條特異性引物,通過(guò)對(duì)反應(yīng)體系和條件的優(yōu)化,建立了檢測(cè)該菌的三重PCR方法,結(jié)果顯示,三重PCR方法可準(zhǔn)確擴(kuò)增出弗勞地枸櫞酸桿菌GalF、petA和FliC 3個(gè)目的基因,而其它菌株均未擴(kuò)增出目的基因,特異性良好;該方法對(duì)該菌DNA最低檢出限為6.09×10¹拷貝/μL。利用該方法檢測(cè)人工感染患病魚(yú)樣品的陽(yáng)性率約為93.33%,與單一PCR方法的檢測(cè)率一致,但特異性和敏感性均高于單一PCR。本實(shí)驗(yàn)建立的弗勞地枸櫞酸桿菌三重PCR檢測(cè)法具有特異性強(qiáng)、敏感性高、操作簡(jiǎn)單、成本低的優(yōu)點(diǎn),為臨床弗勞地枸櫞酸桿菌的檢測(cè)提供可行方法。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 病原菌、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及主要試劑
    1.2 病原菌的分離、培養(yǎng)和生理生化鑒定
    1.3 分離菌16S rDNA擴(kuò)增及序列分析
    1.4 分離菌回歸感染試驗(yàn)
    1.5 引物的設(shè)計(jì)與合成
    1.6 單一PCR反應(yīng)條件的建立
    1.7 三重PCR反應(yīng)條件的建立
    1.8 特異性試驗(yàn)
    1.9 敏感性試驗(yàn)
    1.1 0 多重PCR檢測(cè)法的臨床應(yīng)用
2 結(jié)果
    2.1 分離菌的形態(tài)學(xué)和理化特性鑒定結(jié)果
    2.2 分離菌16S rDNA擴(kuò)增及序列分析結(jié)果
    2.3 分離菌動(dòng)物回歸試驗(yàn)結(jié)果
    2.4 單一PCR和三重PCR擴(kuò)增結(jié)果
    2.5 特異性試驗(yàn)結(jié)果
    2.6 敏感性試驗(yàn)結(jié)果
    2.7 三重PCR檢測(cè)方法臨床應(yīng)用結(jié)果
3 討論



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