長期保存海水養(yǎng)殖病原菌的活性是深入進行其病原學研究的重要前提和保障。真空冷凍干燥技術(shù)是目前情況下制備和保藏生物材料最有效的方法之一。本文初步探討了真空冷凍干燥技術(shù)在5株海水養(yǎng)殖重要致病菌菌種保藏中的應用，相關(guān)的研究成果將為海洋細菌真空冷凍干燥工藝研究提供重要的參考和借鑒。 1.病原微生物冷凍干燥保護劑的篩選 實驗選取遲鈍愛德華氏菌、假交替單胞菌、哈維氏弧菌、燦爛弧菌、鰻弧菌等5株3屬的病原細菌為實驗菌株，以不同濃度的脫脂乳、海藻糖、甘露醇、乳糖、果糖、葡萄糖、抗壞血酸和明膠等八種物質(zhì)作為凍干保護劑，以添加等體積1.50%氯化鈉溶液為對照。結(jié)果表明：以不同濃度的抗壞血酸和明膠為凍干保護劑的實驗組中均未檢測到活菌的存在；與對照組相比，一定濃度的脫脂乳和糖類均可在冷凍干燥過程中對病原菌起到保護作用，各保護劑對菌株的凍干保護效果由強到弱依次為：假交替單胞菌：脫脂乳，麥芽糖，海藻糖，乳糖，甘露醇，葡萄糖，果糖；遲鈍愛德華菌：脫脂乳，乳糖，甘露醇，海藻糖，麥芽糖，葡萄糖，果糖；哈維氏弧菌：甘露醇，海藻糖，乳糖，麥芽糖，果糖，脫脂乳，葡萄糖；鰻弧菌：乳糖，甘露醇，脫脂乳，麥芽糖，海藻糖，葡萄糖，果糖...

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【學位級別】：碩士

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摘要
Abstract
第一章 前言
    1 海水養(yǎng)殖常見病原菌
        1.1 主要致病弧菌
            1.1.1 哈維氏弧菌
            1.1.2 鰻弧菌
            1.1.3 副溶血弧菌
            1.1.4 溶藻弧菌
        1.2 遲鈍愛德華氏菌
        1.3 假交替單胞菌
    2 常見微生物菌種保存方法
        2.1 傳代培養(yǎng)法
        2.2 載體保存法
        2.3 菌懸液保存法
        2.4 液體石蠟保藏法
        2.5 寄主保存法
        2.6 冷凍保存法
        2.7 冷凍干燥保存法
    3 冷凍干燥技術(shù)
        3.1 冷凍干燥的原理
        3.2 冷凍干燥的一般過程
            3.2.1 預凍結(jié)
            3.2.2 升華干燥
            3.2.3 解析干燥
        3.3 冷凍干燥對細胞的損傷機制
            3.3.1 機械損傷
            3.3.2 溶質(zhì)損傷
            3.3.3 細胞膜損傷
            3.3.4 細胞代謝調(diào)節(jié)作用損傷
            3.3.5 遺傳物質(zhì)的損傷
            3.3.6 細胞內(nèi)外 pH 平衡性的改變
        3.4 冷凍干燥技術(shù)的特點及應用
        3.5 影響細胞凍干效果的主要因素
            3.5.1 菌株特性
            3.5.2 培養(yǎng)條件
            3.5.3 初始細胞濃度
            3.5.4 凍干保護劑
            3.5.5 菌液與保護劑的混合比例
            3.5.6 凍結(jié)過程及凍結(jié)速度
            3.5.7 復水介質(zhì)和復水條件
            3.5.8 儲藏條件
        3.6 冷凍干燥保護劑
            3.6.1 冷凍干燥保護劑的保護機理
            3.6.2 冷凍干燥保護劑的種類
    4 本研究的目的和意義
第二章 病原微生物冷凍干燥保護劑的篩選
    1 實驗材料
        1.1 菌種
        1.2 試劑
        1.3 儀器設(shè)備
    2 試驗方法
        2.1 菌株及菌懸液制備
        2.2 凍干保護劑溶液的配制
        2.3 真空冷凍干燥工藝參數(shù)
        2.4 菌株凍干存活率測定
    3 結(jié)果分析
        3.1 假交替單胞菌凍干保護劑的篩選
        3.2 遲鈍愛德華氏菌凍干保護劑的篩選
        3.3 哈維氏弧菌凍干保護劑的篩選
        3.4 鰻弧菌凍干保護劑的篩選
        3.5 燦爛弧菌凍干保護劑的篩選
    4 討論
第三章 冷凍干燥保護劑配伍優(yōu)化
    1 實驗材料
        1.1 菌種
        1.2 試劑
        1.3 儀器設(shè)備
    2 試驗方法
        2.1 菌株及菌懸液制備
        2.2 凍干保護劑溶液的配制
        2.3 真空冷凍干燥工藝參數(shù)
        2.4 菌株凍干存活率測定
    3 結(jié)果分析
        3.1 假交替單胞菌凍干保護劑的復配與正交分析
        3.2 遲鈍愛德華氏菌凍干保護劑的復配與正交分析
        3.3 哈維氏弧菌凍干保護劑的復配與正交分析
        3.4 鰻弧菌凍干保護劑的復配與正交分析
        3.5 燦爛弧菌凍干保護劑的復配與正交分析
    4 討論
第四章 真空冷凍干燥條件與工藝優(yōu)化
    1 實驗材料
        1.1 菌種
        1.2 試劑
        1.3 儀器設(shè)備
    2 試驗方法
        2.1 菌株及菌懸液制備
        2.2 凍干保護劑溶液的配制
        2.3 保護劑最佳含鹽量的優(yōu)化
        2.4 初始細胞濃度對凍干存活率的影響
        2.5 復水介質(zhì)對細菌存活率的影響
        2.6 菌液與保護劑的混合比例對細菌存活率的影響
        2.7 不同生長階段對凍干存活率的影響
        2.8 真空冷凍干燥工藝參數(shù)
        2.9 菌株凍干存活率測定
    3 結(jié)果分析
        3.1 保護劑最佳含鹽量的優(yōu)化
        3.2 初始細胞濃度對凍干存活率的影響
        3.3 復水介質(zhì)對細菌存活率的影響
        3.4 菌液與保護劑的混合比例對細菌存活率的影響
        3.5 不同生長階段對凍干存活率的影響
    4 討論
第五章 不同保存方式對細菌成活率的影響
    1 實驗材料
        1.1 菌種
        1.2 試劑
        1.3 儀器設(shè)備
    2 試驗方法
        2.1 菌株及菌懸液制備
        2.2 凍干保護劑溶液的配制
        2.3 冷凍干燥及超低溫保藏過程
        2.4 菌株凍干存活率測定
    3 結(jié)果分析
        3.1 -80℃超低溫保藏條件下菌種存活率的變化情況
        3.2 冷凍干燥保藏的兩株病原菌細胞存活率的變化情況
    4 討論
參考文獻
附錄
致謝
個人簡歷
學術(shù)成果



本文編號：3742100