長期保存海水養(yǎng)殖病原菌的活性是深入進(jìn)行其病原學(xué)研究的重要前提和保障。真空冷凍干燥技術(shù)是目前情況下制備和保藏生物材料最有效的方法之一。本文初步探討了真空冷凍干燥技術(shù)在5株海水養(yǎng)殖重要致病菌菌種保藏中的應(yīng)用，相關(guān)的研究成果將為海洋細(xì)菌真空冷凍干燥工藝研究提供重要的參考和借鑒。 1.病原微生物冷凍干燥保護(hù)劑的篩選 實(shí)驗(yàn)選取遲鈍愛德華氏菌、假交替單胞菌、哈維氏弧菌、燦爛弧菌、鰻弧菌等5株3屬的病原細(xì)菌為實(shí)驗(yàn)菌株，以不同濃度的脫脂乳、海藻糖、甘露醇、乳糖、果糖、葡萄糖、抗壞血酸和明膠等八種物質(zhì)作為凍干保護(hù)劑，以添加等體積1.50%氯化鈉溶液為對照。結(jié)果表明：以不同濃度的抗壞血酸和明膠為凍干保護(hù)劑的實(shí)驗(yàn)組中均未檢測到活菌的存在；與對照組相比，一定濃度的脫脂乳和糖類均可在冷凍干燥過程中對病原菌起到保護(hù)作用，各保護(hù)劑對菌株的凍干保護(hù)效果由強(qiáng)到弱依次為：假交替單胞菌：脫脂乳，麥芽糖，海藻糖，乳糖，甘露醇，葡萄糖，果糖；遲鈍愛德華菌：脫脂乳，乳糖，甘露醇，海藻糖，麥芽糖，葡萄糖，果糖；哈維氏弧菌：甘露醇，海藻糖，乳糖，麥芽糖，果糖，脫脂乳，葡萄糖；鰻弧菌：乳糖，甘露醇，脫脂乳，麥芽糖，海藻糖，葡萄糖，果糖...

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1 海水養(yǎng)殖常見病原菌
        1.1 主要致病弧菌
            1.1.1 哈維氏弧菌
            1.1.2 鰻弧菌
            1.1.3 副溶血弧菌
            1.1.4 溶藻弧菌
        1.2 遲鈍愛德華氏菌
        1.3 假交替單胞菌
    2 常見微生物菌種保存方法
        2.1 傳代培養(yǎng)法
        2.2 載體保存法
        2.3 菌懸液保存法
        2.4 液體石蠟保藏法
        2.5 寄主保存法
        2.6 冷凍保存法
        2.7 冷凍干燥保存法
    3 冷凍干燥技術(shù)
        3.1 冷凍干燥的原理
        3.2 冷凍干燥的一般過程
            3.2.1 預(yù)凍結(jié)
            3.2.2 升華干燥
            3.2.3 解析干燥
        3.3 冷凍干燥對細(xì)胞的損傷機(jī)制
            3.3.1 機(jī)械損傷
            3.3.2 溶質(zhì)損傷
            3.3.3 細(xì)胞膜損傷
            3.3.4 細(xì)胞代謝調(diào)節(jié)作用損傷
            3.3.5 遺傳物質(zhì)的損傷
            3.3.6 細(xì)胞內(nèi)外 pH 平衡性的改變
        3.4 冷凍干燥技術(shù)的特點(diǎn)及應(yīng)用
        3.5 影響細(xì)胞凍干效果的主要因素
            3.5.1 菌株特性
            3.5.2 培養(yǎng)條件
            3.5.3 初始細(xì)胞濃度
            3.5.4 凍干保護(hù)劑
            3.5.5 菌液與保護(hù)劑的混合比例
            3.5.6 凍結(jié)過程及凍結(jié)速度
            3.5.7 復(fù)水介質(zhì)和復(fù)水條件
            3.5.8 儲藏條件
        3.6 冷凍干燥保護(hù)劑
            3.6.1 冷凍干燥保護(hù)劑的保護(hù)機(jī)理
            3.6.2 冷凍干燥保護(hù)劑的種類
    4 本研究的目的和意義
第二章 病原微生物冷凍干燥保護(hù)劑的篩選
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 菌種
        1.2 試劑
        1.3 儀器設(shè)備
    2 試驗(yàn)方法
        2.1 菌株及菌懸液制備
        2.2 凍干保護(hù)劑溶液的配制
        2.3 真空冷凍干燥工藝參數(shù)
        2.4 菌株凍干存活率測定
    3 結(jié)果分析
        3.1 假交替單胞菌凍干保護(hù)劑的篩選
        3.2 遲鈍愛德華氏菌凍干保護(hù)劑的篩選
        3.3 哈維氏弧菌凍干保護(hù)劑的篩選
        3.4 鰻弧菌凍干保護(hù)劑的篩選
        3.5 燦爛弧菌凍干保護(hù)劑的篩選
    4 討論
第三章 冷凍干燥保護(hù)劑配伍優(yōu)化
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 菌種
        1.2 試劑
        1.3 儀器設(shè)備
    2 試驗(yàn)方法
        2.1 菌株及菌懸液制備
        2.2 凍干保護(hù)劑溶液的配制
        2.3 真空冷凍干燥工藝參數(shù)
        2.4 菌株凍干存活率測定
    3 結(jié)果分析
        3.1 假交替單胞菌凍干保護(hù)劑的復(fù)配與正交分析
        3.2 遲鈍愛德華氏菌凍干保護(hù)劑的復(fù)配與正交分析
        3.3 哈維氏弧菌凍干保護(hù)劑的復(fù)配與正交分析
        3.4 鰻弧菌凍干保護(hù)劑的復(fù)配與正交分析
        3.5 燦爛弧菌凍干保護(hù)劑的復(fù)配與正交分析
    4 討論
第四章 真空冷凍干燥條件與工藝優(yōu)化
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 菌種
        1.2 試劑
        1.3 儀器設(shè)備
    2 試驗(yàn)方法
        2.1 菌株及菌懸液制備
        2.2 凍干保護(hù)劑溶液的配制
        2.3 保護(hù)劑最佳含鹽量的優(yōu)化
        2.4 初始細(xì)胞濃度對凍干存活率的影響
        2.5 復(fù)水介質(zhì)對細(xì)菌存活率的影響
        2.6 菌液與保護(hù)劑的混合比例對細(xì)菌存活率的影響
        2.7 不同生長階段對凍干存活率的影響
        2.8 真空冷凍干燥工藝參數(shù)
        2.9 菌株凍干存活率測定
    3 結(jié)果分析
        3.1 保護(hù)劑最佳含鹽量的優(yōu)化
        3.2 初始細(xì)胞濃度對凍干存活率的影響
        3.3 復(fù)水介質(zhì)對細(xì)菌存活率的影響
        3.4 菌液與保護(hù)劑的混合比例對細(xì)菌存活率的影響
        3.5 不同生長階段對凍干存活率的影響
    4 討論
第五章 不同保存方式對細(xì)菌成活率的影響
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 菌種
        1.2 試劑
        1.3 儀器設(shè)備
    2 試驗(yàn)方法
        2.1 菌株及菌懸液制備
        2.2 凍干保護(hù)劑溶液的配制
        2.3 冷凍干燥及超低溫保藏過程
        2.4 菌株凍干存活率測定
    3 結(jié)果分析
        3.1 -80℃超低溫保藏條件下菌種存活率的變化情況
        3.2 冷凍干燥保藏的兩株病原菌細(xì)胞存活率的變化情況
    4 討論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
個人簡歷
學(xué)術(shù)成果



本文編號：3742100