在哺乳動(dòng)物中白細(xì)胞介素-4（IL-4）和白細(xì)胞介素-13（IL-13）是Ⅱ型輔助T淋巴細(xì)胞（Th cells）的標(biāo)志細(xì)胞因子,參與機(jī)體特異性免疫和非特異性免疫應(yīng)答過程。IL-4和IL-13在哺乳動(dòng)物抵御病原微生物入侵的免疫應(yīng)答反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。草魚（Ctenopharyngodon idella）是我國(guó)重要的水產(chǎn)養(yǎng)殖魚種,隨著草魚養(yǎng)殖產(chǎn)量和養(yǎng)殖密度的逐年增長(zhǎng),魚體免疫力下降,病害爆發(fā)也越發(fā)頻繁,造成了大量經(jīng)濟(jì)損失。柱狀黃桿菌（Flavobacterium cloumnare）和草魚呼腸孤病毒（GCRV）是兩種嚴(yán)重威脅我國(guó)草魚健康養(yǎng)殖的病原微生物。IL-4/13作為機(jī)體免疫系統(tǒng)中重要的免疫分子,在草魚免疫系統(tǒng)抵御柱狀黃桿菌和草魚呼腸孤病毒入侵過程中發(fā)揮的功能和作用尚不明確,IL-4/13的受體基因與哺乳動(dòng)物中同源基因的進(jìn)化關(guān)系尚未解析,IL-4/13在草魚巨噬細(xì)胞極化過程中的作用以及IL-4/13與各個(gè)受體鏈結(jié)合情況缺少系統(tǒng)研究。本研究以草魚作為研究對(duì)象,首先克隆并鑒定了草魚IL-4/13A和IL-4/13B兩個(gè)配體基因的cDNA序列全長(zhǎng)和六個(gè)受體基因包括γC1、γC2、IL-4Rα1... 

【文章頁數(shù)】：122 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 引言
第二章 草魚IL-4/13 及其受體基因克隆和序列分析
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)用魚
        2.1.2 主要試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 草魚頭腎和脾臟總RNA提取
        2.2.2 構(gòu)建草魚cDNA文庫
        2.2.3 草魚IL-4/13 及其受體基因的克隆鑒定
        2.2.4 序列分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 草魚IL-4/13A和 IL-4/13B序列分析
        2.3.2 草魚IL-4/13 受體序列分析
    2.4 小結(jié)與討論
第三章 草魚IL-4/13及受體表達(dá)模式分析
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)用魚
        3.1.2 柱狀黃桿菌
        3.1.3 Ⅱ型草魚呼腸孤病毒(GCRV-Ⅱ)
        3.1.4 主要試劑
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 柱狀黃桿菌、Ⅱ型草魚呼腸孤病毒和PolyI:C感染及樣品采集
        3.2.2 總RNA提取及構(gòu)建熒光定量cDNA文庫
        3.2.3 熒光定量PCR
        3.2.4 免疫組織化學(xué)分析
        3.2.5 數(shù)據(jù)分析
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 草魚IL-4/13 及其受體基因的組織表達(dá)譜
        3.3.2 草魚IL-4/13 及其受體基因?qū)χ鶢铧S桿菌和Ⅱ型草魚呼腸孤病毒感染的表達(dá)響應(yīng)
        3.3.3 柱狀黃桿菌和Ⅱ型草魚呼腸孤病毒感染草魚后IL-4/13 分子在不同組織中的免疫組化分析
    3.4 小結(jié)與討論
第四章 草魚IL-4/13A和 IL-4/13B分子功能的比較研究
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)用魚
        4.1.2 載體、表達(dá)菌株和抗體
        4.1.3 主要試劑
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 構(gòu)建原核表達(dá)載體
        4.2.2 IPTG小量誘導(dǎo)蛋白表達(dá)
        4.2.3 大量誘導(dǎo)表達(dá)重組蛋白
        4.2.4 包涵體的提取
        4.2.5 蛋白的復(fù)性與純化
        4.2.6 十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)
        4.2.7 BCA法測(cè)定蛋白濃度
        4.2.8 Western Blot
        4.2.9 分離草魚頭腎原代細(xì)胞
        4.2.10 草魚IL-4/13A和 IL-4/13B蛋白活性檢測(cè)
        4.2.11 草魚IL-4/13A和 IL-4/13B蛋白對(duì)草魚巨噬細(xì)胞極化的影響
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 草魚IL-4/13A和 IL-4/13B蛋白的原核表達(dá)及純化
        4.3.2 草魚IL-4/13A和 IL-4/13B蛋白活性檢測(cè)
        4.3.3 草魚IL-4/13A和 IL-4/13B對(duì)草魚頭腎巨噬細(xì)胞極化的影響
    4.4 小結(jié)與討論
第五章 全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號(hào)：3729105