在脊椎動物中,性腺的發(fā)育和配子的形成及成熟主要受腦或下丘腦-垂體-性腺軸（BPG＆HPG）的調(diào)節(jié)。脊椎動物下丘腦分泌的促性腺激素釋放激素,使垂體分泌促性腺激素（gonadotropin hormones,GtH）,即促卵泡激素（follicle-stimulating hormone,FSH）和促黃體生成素（luteinizing hormone,LH）作用于性腺,誘導(dǎo)并調(diào)控配子的形成。硬骨魚類中,FSH和LH對生殖調(diào)控功能的實(shí)現(xiàn)依賴于跟它們的受體相結(jié)合,啟動下游信號傳導(dǎo)通路以及激活相關(guān)蛋白并誘導(dǎo)性激素的合成并且作用于配子的成熟及排放。本文以實(shí)驗(yàn)室暫養(yǎng)的金錢魚（Scatophagus argus）為研究對象,運(yùn)用基因克隆技術(shù)、原核表達(dá)系統(tǒng)、組織學(xué)方法、實(shí)時(shí)定量熒光PCR、酶聯(lián)免疫測定（ELISA）,對金錢魚的促性腺激素基因進(jìn)行克隆與序列分析、原核表達(dá)重組載體的構(gòu)建、重組蛋白的獲得及利用、注射和投喂處理后相關(guān)基因的表達(dá)、以及血清中性類固醇類激素含量的變化進(jìn)行了研究及分析。本研究相關(guān)結(jié)果如下:（1）目的基因的克隆:設(shè)計(jì)引物并利用基因克隆技術(shù)克隆金錢魚LH和FSH的cDNA全長序列的克隆。金... 

【文章頁數(shù)】：85 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
引言
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 下丘腦-垂體-性腺軸（HPG）的簡介
    1.2 LH和FSH的生理結(jié)構(gòu)及功能
    1.3 LH和FSH的生物合成及作用機(jī)理
    1.4 LH和FSH在硬骨魚類中的研究進(jìn)展
    1.5 硬骨魚類中AMH，StAR，17β-HSD及E2，11-kT的研究
    1.6 研究內(nèi)容
    1.7 技術(shù)路線
第二章 金錢魚促性腺激素基因全長的cDNA克隆
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)用魚
        2.1.2 試劑
            2.1.2.1 主要試劑
            2.1.2.2 相關(guān)試劑的配制
        2.1.3 主要儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 組織取材
        2.2.2 總RNA提取
        2.2.3 模板cDNA的制備
        2.2.4 引物設(shè)計(jì)
        2.2.5 金錢魚GtH全長的RACE克隆
            2.2.5.1 模板cDNA的 3’RACE
            2.2.5.2 模板cDNA的 5’RACE
            2.2.5.3 金錢魚GtH中間片段的克隆擴(kuò)增
            2.2.5.4 目的基因的連接，轉(zhuǎn)化
            2.2.5.5 陽性克隆菌的篩選
        2.2.6 金錢魚GtH的全長序列分析
    2.3 結(jié)果
第三章 金錢魚促性腺激素重組蛋白的原核表達(dá)及純化
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 重組質(zhì)粒r-SaGtH的構(gòu)建
            3.2.1.1 目的基因GtH的擴(kuò)增
            3.2.1.2 克隆載體pEasy-T1-GtH的構(gòu)建
            3.2.1.3 載體質(zhì)粒pEasy-T1-GtH的提取
        3.2.2 重組蛋白r-SaGtH的誘導(dǎo)表達(dá)及純化
            3.2.2.1 重組蛋白r-SaGtH的粗提
            3.2.2.2 重組融合蛋白r-SaGtH的純化
            3.2.2.3 重組蛋白r-SaGtH的Western Blot檢測
    3.3 結(jié)果
第四章 金錢魚促性腺激素重組蛋白功能的初步驗(yàn)證
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)用魚
        4.1.2 主要試劑、儀器
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 重組蛋白r-SaGtH的注射和投喂實(shí)驗(yàn)
            4.2.1.1 重組蛋白r-SaGtH的注射實(shí)驗(yàn)
            4.2.1.2 重組蛋白r-SaGtH的投喂實(shí)驗(yàn)
        4.2.2 青鱂性腺的組織學(xué)切片觀察
            4.2.2.1 青鱂性腺的石蠟切片
            4.2.2.2 青鱂性腺的H&E染色
        4.2.3 金錢魚性腺的掃描電子顯微鏡觀察
            4.2.3.1 掃描電子顯微鏡觀察中主要試劑的配制
                4.2.3.1.1 固定液Karnovsky溶液的配制方法
                4.2.3.1.2 磷酸鹽緩沖液PB溶液的配制方法
            4.2.3.2 掃描電子顯微鏡觀察上機(jī)樣品的制備
        4.2.4 金錢魚性腺成熟部分相關(guān)基因的表達(dá)分析
        4.2.5 金錢魚性腺成熟部分相關(guān)激素的測定
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 青鱂性腺的組織學(xué)切片觀察
        4.3.2 金錢魚性腺的掃描電子顯微鏡觀察
        4.3.3 金錢魚性腺成熟相關(guān)基因的表達(dá)分析
            4.3.3.1 金錢魚促性腺激素受體（SaGtHR）的表達(dá)分析
            4.3.3.2 金錢魚生殖軸部分下游基因（Amh，Star，17β-hsd）的表達(dá)分析
        4.3.4 金錢魚性腺成熟部分相關(guān)激素的測定
第五章 小結(jié)和討論
參考文獻(xiàn)
附錄
    碩士期間科研成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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