發(fā)布時(shí)間：2022-12-22 20:48

　　大菱鲆（Scophthatmus maximus）是我國(guó)北方海域的重要經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖魚(yú)類品種，自引進(jìn)以來(lái)其養(yǎng)殖規(guī)模不斷增長(zhǎng)，一旦受到疾病的侵染就會(huì)造成大規(guī)模魚(yú)類的死亡，給大菱鲆養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重的危害。髓樣分化因子88（myeloid differentiation factor88，MyD88）是Toll樣受體信號(hào)途徑中的重要轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白，在Toll樣受體信號(hào)識(shí)別病原體啟動(dòng)病原相關(guān)分子模式中發(fā)揮著重要的作用。在病原體侵染宿主細(xì)胞后，細(xì)胞特異性受體能夠特異性識(shí)別病原體，激活下游JAK-STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑產(chǎn)生細(xì)胞因子、趨化因子和干擾素并進(jìn)一步激活下游的干擾素刺激基因（Interferon stimulated genes，ISGs），而ISG15就是ISGs其中的一員。ISG15能夠通過(guò)直接與病毒蛋白相互作用，使其失去活性而發(fā)揮抗病毒作用，同時(shí)它作為一種重要的調(diào)節(jié)因子參與多種生理與免疫反應(yīng)過(guò)程。因此，對(duì)于大菱鲆MyD88和ISG15的研究將會(huì)給大菱鲆抗病育種工作提供一定的理論基礎(chǔ)。 本文以大菱鲆為研究對(duì)象，采用同源克隆及RACE技術(shù)，分別從大菱鲆的頭腎組織中克隆得到大菱鲆MyD88基因的全長(zhǎng)c... 

【文章頁(yè)數(shù)】：86 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
第一章 前言
    1.1 機(jī)體的免疫反應(yīng)
    1.2 先天免疫系統(tǒng)
    1.3 魚(yú)類的先天免疫反應(yīng)
        1.3.1 病原識(shí)別受體
        1.3.2 細(xì)胞因子的級(jí)聯(lián)反應(yīng)
    1.4 魚(yú)類中 Toll 樣受體的信號(hào)傳導(dǎo)途徑
    1.5 髓樣分化因子 88（MyD88）
        1.5.1 MyD88 的發(fā)現(xiàn)
        1.5.2 MyD88 的分子特征及生物學(xué)作用
        1.5.3 MyD88 的在魚(yú)類中的研究進(jìn)展
    1.6 干擾素刺激基因
    1.7 干擾素刺激基因 15（ISG15）
        1.7.1 ISG15 的發(fā)現(xiàn)
        1.7.2 ISG15 的分子結(jié)構(gòu)及生物學(xué)作用
        1.7.3 ISG15 在魚(yú)類中的研究進(jìn)展
    1.8 本研究的意義
第二章 大菱鲆 MyD88 和 ISG15 cDNA 的克隆和序列分析
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、菌株及質(zhì)粒
        2.1.2 主要儀器與設(shè)備
        2.1.3 主要試劑及溶液的配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 大菱鲆組織的獲取
        2.2.2 總 RNA 的提取及質(zhì)量檢測(cè)
        2.2.3 cDNA 第一鏈的合成
        2.2.4 大菱鲆 MyD88 以及 ISG15 全長(zhǎng) cDNA 的克隆
        2.2.5 大菱鲆 MyD88 與 ISG15 的 3’及 5’RACE 片段的克隆及測(cè)序
        2.2.6 全長(zhǎng) cDNA 序列的拼接
        2.2.7 大菱鲆 ISG15 基因序列的克隆
        2.2.8 序列分析與進(jìn)化樹(shù)的構(gòu)建
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析
        2.3.1 RNA 樣品的制備與質(zhì)量檢測(cè)
        2.3.2 大菱鲆 MyD88 和 ISG15 核心片段的克隆及測(cè)序結(jié)果
        2.3.3 3’RACE 片段的克隆及測(cè)序結(jié)果
        2.3.4 5’RACE 片段的克隆及測(cè)序結(jié)果
        2.3.5 全長(zhǎng) cDNA 序列的拼接及分析
        2.3.6 SmMyD88 和 SmISG15 cDNA 序列的分子特征
        2.3.7 SmISG15 的基因組序列的克隆及測(cè)序結(jié)果
        2.3.8 SmISG15 的基因組結(jié)構(gòu)特征
        2.3.9 SmMyD88 和 SmISG15 的系統(tǒng)進(jìn)化分析
    2.4 討論
第三章 大菱鲆 MyD88 和 ISG15 mRNAs 的組織分布研究
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)所用的主要儀器與設(shè)備
        3.1.3 主要試劑及溶液的配制
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 獲取實(shí)驗(yàn)用的大菱鲆組織
        3.2.2 總 RNA 的提取及質(zhì)量檢測(cè)
        3.2.3 cDNA 第一鏈的合成
        3.2.4 引物設(shè)計(jì)
        3.2.5 Real-time PCR 檢測(cè)
        3.2.6 數(shù)據(jù)的處理
    3.3 結(jié)果分析
    3.4 討論
第四章 大菱鲆 ISG15 和 MyD88 基因的表達(dá)分析
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 魚(yú)體及刺激物
        4.1.2 主要儀器與設(shè)備
        4.1.3 試劑及溶液配制
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 刺激物感染大菱鲆魚(yú)體實(shí)驗(yàn)
        4.2.2 模板的制備
        4.2.3 Real-time PCR 檢測(cè)
        4.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4.3 結(jié)果分析
    4.4 討論
        4.4.1 SmMyD88 的表達(dá)分析情況
        4.4.2 SmISG15 的表達(dá)分析情況
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷
學(xué)術(shù)論文



本文編號(hào)：3724015