大菱鲆（Scophthatmus maximus）是我國北方海域的重要經濟養(yǎng)殖魚類品種，自引進以來其養(yǎng)殖規(guī)模不斷增長，一旦受到疾病的侵染就會造成大規(guī)模魚類的死亡，給大菱鲆養(yǎng)殖業(yè)造成嚴重的危害。髓樣分化因子88（myeloid differentiation factor88，MyD88）是Toll樣受體信號途徑中的重要轉導蛋白，在Toll樣受體信號識別病原體啟動病原相關分子模式中發(fā)揮著重要的作用。在病原體侵染宿主細胞后，細胞特異性受體能夠特異性識別病原體，激活下游JAK-STAT信號轉導途徑產生細胞因子、趨化因子和干擾素并進一步激活下游的干擾素刺激基因（Interferon stimulated genes，ISGs），而ISG15就是ISGs其中的一員。ISG15能夠通過直接與病毒蛋白相互作用，使其失去活性而發(fā)揮抗病毒作用，同時它作為一種重要的調節(jié)因子參與多種生理與免疫反應過程。因此，對于大菱鲆MyD88和ISG15的研究將會給大菱鲆抗病育種工作提供一定的理論基礎。 本文以大菱鲆為研究對象，采用同源克隆及RACE技術，分別從大菱鲆的頭腎組織中克隆得到大菱鲆MyD88基因的全長c... 

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
第一章 前言
    1.1 機體的免疫反應
    1.2 先天免疫系統(tǒng)
    1.3 魚類的先天免疫反應
        1.3.1 病原識別受體
        1.3.2 細胞因子的級聯(lián)反應
    1.4 魚類中 Toll 樣受體的信號傳導途徑
    1.5 髓樣分化因子 88（MyD88）
        1.5.1 MyD88 的發(fā)現
        1.5.2 MyD88 的分子特征及生物學作用
        1.5.3 MyD88 的在魚類中的研究進展
    1.6 干擾素刺激基因
    1.7 干擾素刺激基因 15（ISG15）
        1.7.1 ISG15 的發(fā)現
        1.7.2 ISG15 的分子結構及生物學作用
        1.7.3 ISG15 在魚類中的研究進展
    1.8 本研究的意義
第二章 大菱鲆 MyD88 和 ISG15 cDNA 的克隆和序列分析
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗動物、菌株及質粒
        2.1.2 主要儀器與設備
        2.1.3 主要試劑及溶液的配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 大菱鲆組織的獲取
        2.2.2 總 RNA 的提取及質量檢測
        2.2.3 cDNA 第一鏈的合成
        2.2.4 大菱鲆 MyD88 以及 ISG15 全長 cDNA 的克隆
        2.2.5 大菱鲆 MyD88 與 ISG15 的 3’及 5’RACE 片段的克隆及測序
        2.2.6 全長 cDNA 序列的拼接
        2.2.7 大菱鲆 ISG15 基因序列的克隆
        2.2.8 序列分析與進化樹的構建
    2.3 實驗結果及分析
        2.3.1 RNA 樣品的制備與質量檢測
        2.3.2 大菱鲆 MyD88 和 ISG15 核心片段的克隆及測序結果
        2.3.3 3’RACE 片段的克隆及測序結果
        2.3.4 5’RACE 片段的克隆及測序結果
        2.3.5 全長 cDNA 序列的拼接及分析
        2.3.6 SmMyD88 和 SmISG15 cDNA 序列的分子特征
        2.3.7 SmISG15 的基因組序列的克隆及測序結果
        2.3.8 SmISG15 的基因組結構特征
        2.3.9 SmMyD88 和 SmISG15 的系統(tǒng)進化分析
    2.4 討論
第三章 大菱鲆 MyD88 和 ISG15 mRNAs 的組織分布研究
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗動物
        3.1.2 實驗所用的主要儀器與設備
        3.1.3 主要試劑及溶液的配制
    3.2 實驗方法
        3.2.1 獲取實驗用的大菱鲆組織
        3.2.2 總 RNA 的提取及質量檢測
        3.2.3 cDNA 第一鏈的合成
        3.2.4 引物設計
        3.2.5 Real-time PCR 檢測
        3.2.6 數據的處理
    3.3 結果分析
    3.4 討論
第四章 大菱鲆 ISG15 和 MyD88 基因的表達分析
    4.1 實驗材料
        4.1.1 魚體及刺激物
        4.1.2 主要儀器與設備
        4.1.3 試劑及溶液配制
    4.2 實驗方法
        4.2.1 刺激物感染大菱鲆魚體實驗
        4.2.2 模板的制備
        4.2.3 Real-time PCR 檢測
        4.2.4 統(tǒng)計學分析
    4.3 結果分析
    4.4 討論
        4.4.1 SmMyD88 的表達分析情況
        4.4.2 SmISG15 的表達分析情況
結論
參考文獻
致謝
個人簡歷
學術論文



本文編號：3724015