SOX2作為一種重要的轉(zhuǎn)錄因子，已經(jīng)在脊椎動物中被確定參與胚胎發(fā)生、神經(jīng)發(fā)生、晶狀體發(fā)育以及誘導(dǎo)多能性胚胎干細胞形成中發(fā)揮重要的功能。本研究以重要的雙殼類海洋經(jīng)濟物種——櫛孔扇貝（Chlamys farreri）作為研究對象，通過RACE技術(shù)克隆獲得了sox2的cDNA全長序列，并采用半定量RT-PCR、實時熒光定量PCR和原位雜交技術(shù)對其在櫛孔扇貝早期發(fā)育的表達特征、各組織中的空間表達以及成體各發(fā)育時期性腺的表達定位進行了分析，以期為深入探討該基因在扇貝中的作用提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。主要結(jié)果如下： 櫛孔扇貝sox2（Cf-sox2）的cDNA全長序列為2194bp，包含一個編碼327個氨基酸的開放閱讀框，并具有SOX家族保守的HMG-box以及SOXB1亞族的SOXp motif結(jié)構(gòu)。進一步發(fā)現(xiàn)櫛孔扇貝SOX2中不存在脊椎動物SOX2中的兩個末端結(jié)構(gòu)，即在N末端不含有多聚甘氨酸結(jié)構(gòu)，在C末端不具有富含絲氨酸的結(jié)構(gòu)。 實時熒光定量RT-PCR結(jié)果顯示，Cf-sox2是母源性基因；其表達量在卵裂期胚胎中較受精卵顯著升高，囊胚中達到最高；原腸胚之后，表達量顯著下降，并在殼頂幼蟲降到最低... 

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1 Sox 基因家族的研究進展
        1.1 Sox 基因家族的分類
        1.2 SOX 家族成員的結(jié)構(gòu)特征和功能
            1.2.1 SOX 家族成員的結(jié)構(gòu)特征
                1.2.1.1 能夠與 DNA 分子結(jié)合
                1.2.1.2 能夠進行核內(nèi)外轉(zhuǎn)運
                1.2.1.3 與其他蛋白質(zhì)間存在相互作用
                1.2.1.4 具有轉(zhuǎn)錄激活與轉(zhuǎn)錄抑制性質(zhì)
                1.2.1.5 形成同源二聚體
                1.2.1.6 具有轉(zhuǎn)錄后的修飾作用
            1.2.2 SOX 家族成員的功能
                1.2.2.1 性別決定與分化
                1.2.2.2 胚胎發(fā)生
                1.2.2.3 神經(jīng)發(fā)生和膠質(zhì)細胞再生
                1.2.2.4 神經(jīng)嵴發(fā)育
                1.2.2.5 骨骼形成
                1.2.2.6 造血作用
                1.2.2.7 內(nèi)胚層和毛發(fā)的發(fā)育，心臟發(fā)育，血管形成
    2 Sox2 基因的研究進展
        2.1 Sox2 序列的特征
        2.2 Sox2 基因的功能
            2.2.1 作為轉(zhuǎn)錄因子參與轉(zhuǎn)錄調(diào)控
            2.2.2 參與早期胚胎發(fā)生
            2.2.3 參與神經(jīng)發(fā)育
            2.2.4 參與晶狀體發(fā)育
    3 Sox 基因在貝類中的研究現(xiàn)狀
    4 本研究的目的及意義
第二章 櫛孔扇貝 Cf-sox2 的 cDNA 克隆及在早期發(fā)育中的表達圖式
    1 材料與方法
        1.1 實驗材料
            1.1.1 實驗動物和取樣
            1.1.2 工具酶、試劑及實驗儀器
            1.1.3 實驗試劑
        1.2 實驗方法
            1.2.1 總 RNA 提取
            1.2.2 cDNA 模板合成
            1.2.3 RACE-Ready cDNA 模板的合成
            1.2.4 RACE 擴增
            1.2.5 目的基因全長 cDNA 序列的獲得和分析
            1.2.6 qRT-PCR
            1.2.7 原位雜交探針合成及探針效率檢測
            1.2.8 整體原位雜交
    2 實驗結(jié)果
        2.1 櫛孔扇貝靶 cDNA 全長及序列特征分析
        2.2 Cf-sox2 mRNA 在櫛孔扇貝早期發(fā)育過程中的定量表達
        2.3 Cf-sox2 mRNA 在櫛孔扇貝胚胎和幼蟲中的空間分布
    3 討論
        3.1 Cf-sox2 基因與其他無脊椎動物 sox2 基因特征一致
        3.2 Cf-sox2 的母源性表達
        3.3 Cf-sox2 在櫛孔扇貝中的表達特征與哺乳動物相似
第三章 櫛孔扇貝 Cf-sox2 基因在性腺發(fā)育周期中的時空表達
    1 材料方法
        1.1 實驗材料
        1.2 實驗儀器、試劑盒和試劑配制
        1.3 實驗方法
            1.3.1 組織切片制備和性腺分期
            1.3.2 總 RNA 提取和 cDNA 反轉(zhuǎn)錄
            1.3.3 半定量 RT-PCR
            1.3.4 切片原位雜交
    2 實驗結(jié)果
        2.1 性腺發(fā)育周期的組織學(xué)觀察
            2.1.1 增殖期性腺
            2.1.2 生長期性腺
            2.1.3 成熟期性腺
        2.2 Cf-sox2 在櫛孔扇貝組織中的分布
        2.3 Cf-sox2 在櫛孔扇貝性腺發(fā)育周期中的表達
    3 討論
        3.1 Cf-sox2 基因在成體各組織中的表達分析
        3.2 Cf-sox2 基因在性腺發(fā)育周期中的表達分析
總結(jié)
參考文獻
致謝
個人簡歷
發(fā)表與待發(fā)表學(xué)術(shù)論文


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Molecular cloning and characterization of SoxB2 gene from Zhikong scallop Chlamys farreri[J]. 賀艷,包振民,郭慧慧,張月月,張玲玲,王師,胡景杰,胡曉麗.  Chinese Journal of Oceanology and Limnology. 2013(06)
[2]池蝶蚌Sox2基因在不同組織及不同月齡精巢中的表達[J]. 曾柳根,徐靈,王軍花,盛軍慶,辜清,彭扣,洪一江.  水生生物學(xué)報. 2012(02)
[3]雙殼類的性轉(zhuǎn)換現(xiàn)象及其機理探討[J]. 于非非,余祥勇,王梅芳,周莉,桂建芳.  水生生物學(xué)報. 2007(04)
[4]Sox基因家族研究的新進展[J]. 常重杰,杜啟艷,邵紅偉.  遺傳. 2002(04)
[5]中華鱉4個Sox基因保守區(qū)的序列分析[J]. 聶劉旺,單祥年,汪鳴,郭超文,魯曉萱.  水生生物學(xué)報. 2001(03)
[6]SOX基因家族的研究現(xiàn)狀[J]. 常重杰,周榮家,余其興.  遺傳. 2000(01)
[7]櫛孔扇貝精子超微結(jié)構(gòu)的研究[J]. 任素蓮,王如才,王德秀.  青島海洋大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 1998(03)
[8]櫛孔扇貝的生殖周期[J]. 廖承義,徐應(yīng)馥,王遠隆.  水產(chǎn)學(xué)報. 1983(01)

博士論文
[1]櫛孔扇貝Cf-foxl2基因的克隆、表達模式及功能初探[D]. 劉曉玲.中國海洋大學(xué) 2012
[2]櫛孔扇貝生殖相關(guān)基因DEAD-box家族和boule的cDNA克隆及其發(fā)育表達圖式[D]. 邵明瑜.中國海洋大學(xué) 2007



本文編號：3710292