團頭魴（Megalobrama amblycephala）是我國主要的淡水養(yǎng)殖魚類之一,具有重要的經(jīng)濟價值和科學(xué)研究意義。目前有關(guān)團頭魴的研究涉及基礎(chǔ)生物學(xué)、遺傳育種、營養(yǎng)與飼料、疾病與免疫、基因克隆與表達以及基因組學(xué)等多個方面,但對于團頭魴干細胞多能性相關(guān)因子的基礎(chǔ)研究數(shù)據(jù)缺乏。作為具有代表性的干細胞因子,nanog和oct4已被證明在哺乳動物和部分硬骨魚類早期胚胎發(fā)育階段以及維持干細胞自我更新和分化方面起著舉足輕重的作用,而魚類nanog和oct4的結(jié)構(gòu)、表達與功能同哺乳類相比有何特點尚不明確。本研究以團頭魴為實驗對象,采用多種分子生物學(xué)和發(fā)育生物學(xué)實驗技術(shù),結(jié)合CRISPR/Cas9基因敲除等手段,初步闡明了團頭魴nanog（Mananog）和oct4（Maoct4）基因的結(jié)構(gòu)特點、表達模式和部分生物學(xué)功能。研究結(jié)果表明Mananog和Maoct4均具有母源性表達的特征,其表達模式區(qū)別于哺乳動物Nanog和Oct4的表達模式;通過原核表達蛋白能夠制備出兔抗團頭魴Nanog和Oct4特異性抗體;證明了Mananog和Maoct4可以跨物種作用于人肝癌細胞HepG2,提高其增殖能力、... 

【文章頁數(shù)】：173 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語表
第一章 文獻綜述
    1.1 Nanog基因研究進展
        1.1.1 Nanog基因的結(jié)構(gòu)
        1.1.2 Nanog基因的表達與定位
        1.1.3 Nanog基因的調(diào)節(jié)通路
        1.1.4 Nanog基因的功能
    1.2 Oct4基因研究進展
        1.2.1 Oct4基因的結(jié)構(gòu)
        1.2.2 Oct4基因的表達與定位
        1.2.3 Oct4基因的調(diào)節(jié)通路
        1.2.4 Oct4基因的功能
    1.3 本研究的主要內(nèi)容、目的和意義
第二章 團頭魴nanog基因的克隆、表達與功能鑒定
    2.1 前言
    2.2 材料和方法
        2.2.1 實驗材料
        2.2.2 RNA提取、nanog基因的cDNA序列克隆
        2.2.3 DNA提取、nanog基因的基因組DNA序列克隆
        2.2.4 nanog基因的異構(gòu)體序列克隆
        2.2.5 nanog基因序列分析、多序列比對與進化樹構(gòu)建方法
        2.2.6 nanog基因表達模式的RT-PCR和原位雜交分析方法
        2.2.7 nanog基因在細胞中的核定位分析方法
        2.2.8 Nanog抗體的制備與驗證方法
        2.2.9 nanog等外源干細胞相關(guān)因子過表達對HepG2細胞的影響
        2.2.10 斑馬魚nanog基因敲除與挽救對其胚胎表型和PGC的影響
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 nanog基因序列克隆結(jié)果
        2.3.2 nanog基因氨基酸序列同源性及系統(tǒng)進化樹分析結(jié)果
        2.3.3 nanog基因的時空表達模式分析結(jié)果
        2.3.4 nanog基因在細胞中的核定位分析結(jié)果
        2.3.5 Nanog蛋白多克隆抗體的制備與驗證結(jié)果
        2.3.6 nanog及多因子過表達對HepG2細胞的影響分析結(jié)果
        2.3.7 斑馬魚nanog基因敲除與挽救對斑馬魚的影響分析結(jié)果
    2.4 討論
第三章 團頭魴oct4基因的克隆、表達與功能鑒定
    3.1 前言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 實驗材料
        3.2.2 oct4基因克隆與序列分析方法
        3.2.3 oct4基因的時空表達模式分析方法
        3.2.4 oct4基因在細胞中的核定位分析方法
        3.2.5 Oct4抗體的制備與驗證方法
        3.2.6 oct4基因過表達對HepG2細胞的影響分析方法
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 oct4基因的序列特征
        3.3.2 oct4基因氨基酸序列同源性及系統(tǒng)進化樹分析結(jié)果
        3.3.3 oct4基因的時空表達模式分析結(jié)果
        3.3.4 oct4基因在細胞中的核定位分析結(jié)果
        3.3.5 Oct4蛋白多克隆抗體的制備與驗證結(jié)果
        3.3.6 oct4基因過表達對HepG2細胞的影響分析結(jié)果
    3.4 討論
本論文主要研究結(jié)果及創(chuàng)新點
參考文獻
附錄
    附錄一：文中所用相關(guān)圖片與部分試劑配制方法
    附錄二：在讀期間研究成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[3]Nanog基因的原核表達、蛋白純化及抗體制備[D]. 李軍.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2007



本文編號：3696564