桃拉綜合征病毒（Taura syndrome virus, TSV）是威脅蝦類養(yǎng)殖業(yè)的主要病毒之一。本試驗建立了一種快速檢測TSV的環(huán)介導等溫擴增聯(lián)合橫向流動試紙條（LAMP-LFD）方法,并與熒光定量PCR（qPCR）進行了對比�；赥SV的衣殼蛋白VP2核酸序列,設計3對特異性引物（外引物:FIP/BIP,內引物:F3/B3,環(huán)引物:LF/LB）,進行LAMP反應體系的優(yōu)化。其中引物LF以BIO標記,LB以FAM標記,用于橫向流動試紙條（LFD）的檢測。結果表明:LAMP最佳反應可在63℃恒溫條件下40 min內完成。整個擴增反應到LFD結果判定可在45 min內完成。LAMP-LFD可特異性檢出TSV特異性片段,未與其它病毒和細菌發(fā)生交叉反應,且其檢測限為22.9 fg。與qPCR相比,本研究所建立的LAMP-LFD檢測體系雖然檢測限高于qPCR 10倍,但比qPCR檢測時間縮短近1 h,且LAMP-LFD特異性強、操作簡單,無需特殊儀器設備,可快捷、方便地檢測出TSV,滿足TSV基層快速檢測的需要。 

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試劑
    1.2 引物的設計
    1.3 LAMP反應體系和條件
    1.4 LAMP反應參數(shù)的優(yōu)化
    1.5 熒光定量PCR(qPCR)反應
    1.6 LAMP產物的LFD檢測
    1.7 特異性評價
    1.8 靈敏度評價
    1.9 臨床實際樣品檢測
2 結果與分析
    2.1 LAMP體系的優(yōu)化
    2.2 LAMP-LFD特異性分析
    2.3 LAMP-LFD靈敏度分析
    2.4 實際樣品檢測
3 結論與討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]環(huán)介導等溫擴增聯(lián)合橫向流動試紙條檢測草魚呼腸孤病毒方法的建立[J]. 劉露,李偉哲,肖勤.  河北農業(yè)大學學報. 2018(02)
[2]應用LAMP-LFD技術可視化檢測河流弧菌（Vibrio fluvialis）的研究[J]. 楊夢香,柴方超,周前進,苗亮,黃光亮,陳炯.  海洋與湖沼. 2017(02)
[3]環(huán)介導等溫擴增聯(lián)合橫向流動試紙條可視化檢測哈維氏弧菌的研究[J]. 程蝶,柴方超,蔡怡,周前進,陳炯.  生物技術通報. 2016(06)
[4]變形桿菌環(huán)介導等溫擴增檢測法的可視化方法的比較[J]. 申培立,王羽,李志輝,郭夢冉,馬曉燕,張偉,馬雯,李英軍,檀建新.  河北農業(yè)大學學報. 2016(03)
[5]凡納濱對蝦不同生長階段的蛋白質需要量[J]. 黃文文,鄭昌區(qū),霍雅文,黎明,周歧存.  動物營養(yǎng)學報. 2014(09)
[6]液相芯片技術同時檢測對蝦桃拉病毒和蝦黃頭病毒的研究[J]. 尹偉力,張四化,岳志芹,鄭小龍,劉葒.  水產科學. 2014(01)
[7]快速熒光定量RT-PCR檢測對蝦Taura綜合征病毒（TSV）的方法建立與應用[J]. 顧松葉,王忠發(fā),施慧,沈飚.  中國衛(wèi)生檢驗雜志. 2011(09)
[8]對蝦白斑綜合征病毒LAMP檢測方法的建立[J]. 馮華,張改平,郭軍慶,王愛萍,趙麗娜,杜曉明,王林林.  中國獸醫(yī)科學. 2011(07)
[9]桃拉綜合征病毒中國株ZHZC3全基因測序及分子結構預測[J]. 黃新新,陸承平.  Virologica Sinica. 2006(03)
[10]RT-PCR法檢測我國東南沿海凡納濱對蝦的桃拉綜合征病毒[J]. 黃新新,莫勝蘭,陸承平.  中國病毒學. 2005(05)



本文編號：3692035