桃拉綜合征病毒（Taura syndrome virus, TSV）是威脅蝦類養(yǎng)殖業(yè)的主要病毒之一。本試驗(yàn)建立了一種快速檢測TSV的環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增聯(lián)合橫向流動試紙條（LAMP-LFD）方法,并與熒光定量PCR（qPCR）進(jìn)行了對比�；赥SV的衣殼蛋白VP2核酸序列,設(shè)計(jì)3對特異性引物（外引物:FIP/BIP,內(nèi)引物:F3/B3,環(huán)引物:LF/LB）,進(jìn)行LAMP反應(yīng)體系的優(yōu)化。其中引物L(fēng)F以BIO標(biāo)記,LB以FAM標(biāo)記,用于橫向流動試紙條（LFD）的檢測。結(jié)果表明:LAMP最佳反應(yīng)可在63℃恒溫條件下40 min內(nèi)完成。整個擴(kuò)增反應(yīng)到LFD結(jié)果判定可在45 min內(nèi)完成。LAMP-LFD可特異性檢出TSV特異性片段,未與其它病毒和細(xì)菌發(fā)生交叉反應(yīng),且其檢測限為22.9 fg。與qPCR相比,本研究所建立的LAMP-LFD檢測體系雖然檢測限高于qPCR 10倍,但比qPCR檢測時間縮短近1 h,且LAMP-LFD特異性強(qiáng)、操作簡單,無需特殊儀器設(shè)備,可快捷、方便地檢測出TSV,滿足TSV基層快速檢測的需要。 

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試劑
    1.2 引物的設(shè)計(jì)
    1.3 LAMP反應(yīng)體系和條件
    1.4 LAMP反應(yīng)參數(shù)的優(yōu)化
    1.5 熒光定量PCR(qPCR)反應(yīng)
    1.6 LAMP產(chǎn)物的LFD檢測
    1.7 特異性評價
    1.8 靈敏度評價
    1.9 臨床實(shí)際樣品檢測
2 結(jié)果與分析
    2.1 LAMP體系的優(yōu)化
    2.2 LAMP-LFD特異性分析
    2.3 LAMP-LFD靈敏度分析
    2.4 實(shí)際樣品檢測
3 結(jié)論與討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3692035