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半滑舌鰨StAR基因的克隆和表達(dá)分析及性別相關(guān)基因(FTZ-F1、neurl3)原位雜交分析

發(fā)布時(shí)間:2022-09-28 13:37
  半滑舌鰨是我國一種重要的海水養(yǎng)殖魚類,由于半滑舌鰨營養(yǎng)價(jià)值豐富,具有廣闊的養(yǎng)殖前景。并且在發(fā)育過程中,半滑舌鰨雌雄差異大,在自然條件下容易發(fā)生性逆轉(zhuǎn)。因此,研究半滑舌鰨性別控制的相關(guān)基因決定機(jī)制是一個(gè)十分重要的研究方向。本文通過對(duì)半滑舌鰨StAR基因的克隆,發(fā)現(xiàn)該基因在半滑舌鰨精巢的表達(dá)量明顯,推測該基因?qū)驳陌l(fā)育和精細(xì)胞的發(fā)生有密切關(guān)系,對(duì)半滑舌鰨在性別相關(guān)基因的挖掘工作做了很好的基礎(chǔ)性工作,為進(jìn)一步研究性別相關(guān)基因提供基礎(chǔ)性材料。 利用半滑舌鰨性腺轉(zhuǎn)錄組測序獲得的StAR基因部分序列,設(shè)計(jì)RACE引物,克隆了半滑舌鰨StAR基因的cDNA序列全長為1294bp,5′端UTR為132bp,3′端UTR為310bp,開放閱讀框(ORF)為852bp,共編碼283個(gè)氨基酸。將半滑舌鰨StAR基因與其他物種StAR基因進(jìn)行氨基酸同源性分析,結(jié)果顯示,半滑舌鰨StAR與塞內(nèi)加爾鰨、大口黑鱸、花鱸、金頭鯛的同源性都達(dá)到了85℅,和虹鱒、斜帶石斑魚及日本鰻鱺的同源性分別為81℅、83℅和76℅。StAR基因的雌、雄魚不同組織表達(dá)分析表明,StAR基因在雄魚性腺中高表達(dá),在雄魚的肝臟、腦及... 

【文章頁數(shù)】:68 頁

【學(xué)位級(jí)別】:碩士

【文章目錄】:
摘要
Abstract
目錄
第一章 文章綜述
    1 魚類性別決定研究進(jìn)展
        1.1 性染色體的類型
        1.2 性別決定
            1.2.1 環(huán)境決定
            1.2.2 性激素的定向誘導(dǎo)
            1.2.3 性別決定基因
            1.2.4 環(huán)境內(nèi)分泌干擾物對(duì)魚類性別的影響
    2.魚類性腺的發(fā)育過程
        2.1 魚類生殖細(xì)胞的發(fā)育
        2.2 魚類性腺的發(fā)育和分化
    3.StAR 基因、FTZ-F1 基因、neurl3 基因的研究進(jìn)展
        3.1 StAR 基因的研究進(jìn)展
        3.2 FTZ-F1 基因的研究進(jìn)展
        3.3 E3 基因的研究進(jìn)展
    4.原位雜交技術(shù)的研究進(jìn)展
        4.1 原位雜交技術(shù)在水產(chǎn)動(dòng)物中的研究進(jìn)展
第二章 半滑舌鰨性腺發(fā)育過程的組織學(xué)觀察
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)耗材與實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 不同時(shí)期的幼魚的 DNA 的提取過程:
            2.2.2 利用微衛(wèi)星標(biāo)記的 SCAR 標(biāo)記進(jìn)行性別鑒定
            2.2.3 性腺的組織切片
    3.結(jié)果與討論
        3.1 遺傳性別的鑒定結(jié)果
        3.2 魚類性腺分化過程的組織學(xué)觀察
    4 討論
第三章 半滑舌鰨 StAR 基因克隆及表達(dá)分析
    1 引言
    2 實(shí)驗(yàn)材料和試劑
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
    3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.1 基因組 DNA 的提取、總 RNA 的提取、cDNA 的合成
            3.1.1 基因組 DNA 的提取
            3.1.2 總 RNA 的提取
            3.1.3 cDNA 的合成
        3.2 半滑舌鰨 StAR 基因的全長 cDNA 的克隆及序列分析
            3.2.1 StAR 基因的全長 cDNA 的克隆
            3.2.2 序列分析和拼接
            3.2.3 基因的 RT-PCR 分析和熒光定量 PCR 分析
            3.2.4 StAR 基因的原位雜交分析
    4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.1 半滑舌鰨 StAR 基因 cDNA 全長克隆及序列分析
        4.2 StAR 基因序列分析及進(jìn)化樹構(gòu)建
        4.3 半滑舌鰨 StAR 基因的 cDNA 序列全長分析
        4.4 半滑舌鰨 StAR 基因的組織分布
        4.5 半滑舌鰨 StAR 基因的定量表達(dá)分析
        4.6 原位雜交結(jié)果
    5 討論
第四章 半滑舌鰨 FTZ-F1,neurl3 基因的時(shí)空表達(dá)分析
    1 前言
    2.實(shí)驗(yàn)材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 探針的制備
            2.2.2 原位雜交過程
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 FTZ-F1 基因的原位雜交結(jié)果分析
        3.2 neurl3 基因的原位雜交結(jié)果分析
    4.討論
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄
致謝


【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]青鳉(Oryzias latipes)性腺分化與發(fā)育的組織學(xué)觀察[J]. 張靜,黃進(jìn)強(qiáng),李亞亞,王娜,孫建,王天姿,陳松林.  動(dòng)物學(xué)研究. 2013(05)
[2]水溫對(duì)半滑舌鰨性腺組織發(fā)育的影響[J]. 汪娣,田永勝,陳松林.  水產(chǎn)學(xué)報(bào). 2012(02)
[3]半滑舌鰨三倍體魚苗的人工誘導(dǎo)與鑒定[J]. 陳松林,李文龍,季相山,謝明樹,徐營,鄧寒.  水產(chǎn)學(xué)報(bào). 2011(06)
[4]半滑舌鰨養(yǎng)殖群體中自然性逆轉(zhuǎn)偽雄魚的發(fā)現(xiàn)[J]. 季相山,陳松林,馬洪雨,姜運(yùn)良,楊景峰,董曉麗.  水產(chǎn)學(xué)報(bào). 2010(02)
[5]西伯利亞鱘性腺早期發(fā)生、分化、發(fā)育的組織學(xué)觀察[J]. 田美平,莊平,張濤,顏世偉,章龍珍,劉婷.  中國水產(chǎn)科學(xué). 2010(03)
[6]黃顙魚性腺分化的組織學(xué)觀察[J]. 尹洪濱,賈中賀,姚道霞,孫中武,于波,孫德志.  動(dòng)物學(xué)雜志. 2008(06)
[7]奧利亞羅非魚卵巢芳香化酶基因的克隆及其表達(dá)[J]. 唐永凱,李建林,陳文華,俞菊華.  中國水產(chǎn)科學(xué). 2008(05)
[8]原位雜交技術(shù)在斜帶石斑魚神經(jīng)壞死病毒檢測中的應(yīng)用[J]. 陳曉艷,何建國.  海洋科學(xué). 2008(06)
[9]半滑舌鰨腦芳香化酶基因cDNA克隆及表達(dá)分析[J]. 鄧思平,陳松林,劉本偉,徐建勇,田永勝.  動(dòng)物學(xué)研究. 2008(01)
[10]StARmRNA在仔豬睪丸組織中的表達(dá)研究[J]. 詹曉慶,王鮮忠,孫燕,王滿意,張家驊.  中國生物工程雜志. 2007(03)

博士論文
[1]牙鲆雌核發(fā)育分析鑒定與性別決定機(jī)制研究[D]. 徐成.中國科學(xué)院海洋研究所 2000



本文編號(hào):3681762

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