本研究通過已構(gòu)建的雙齒圍沙蠶（Perinereis aibuhitensis）金屬結(jié)合蛋白MPII重組表達菌的活化、擴大培養(yǎng)、破碎、離心等，獲得原核表達產(chǎn)物目標蛋白MPII，采用His-Bind蛋白純化試劑盒對目的蛋白進行了純化，利用考馬斯亮藍G-250測定目的蛋白濃度；采用純化的重組MPII蛋白免疫家兔，獲得高免血清（一抗），并將純化所得蛋白用碳酸鹽包被液（pH9.6）按200、400、800、1600、3200、6400倍稀釋，將硝酸纖維素膜（NC膜）制成6×8棋盤，包被抗原每孔滴加量2μL，待NC膜干燥后用約10mL質(zhì)量分數(shù)為3%的小牛血清白蛋白（BSA）37℃培養(yǎng)箱中封閉45min，一抗用PBS按200、400、800、1600、3200、6400、12800倍稀釋，PBS代替一抗作為陰性對照，進行Dot-ELISA檢測；對間接ELISA檢測反應條件進行優(yōu)化；采用所建立的方法對正常雙齒圍沙蠶頭部、體壁組織、消化道和疣足進行了分部位的間接ELISA檢測，確定雙齒圍沙蠶MPII靶組織；采用不同濃度Cd（40、80、120mg/L）、Pb（10、15、20mg/L）、Zn（30、60... 

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

技術(shù)路線圖

小牛血清白蛋白標準曲線

Dot-ELISA靈敏度檢測結(jié)果


本文編號：3653994