發(fā)布時間：2022-04-27 21:45

　　水產(chǎn)品中獸藥殘留問題日益突出，獸藥雖在養(yǎng)殖過程中帶來不少作用，但攝入人體后對人體危害大，嚴(yán)格把控水產(chǎn)品中的獸藥殘留就顯得尤為重要。恩諾沙星（Enrofloxacin，ENR）是第三代喹諾酮類藥物，由于其在組織液中濃度達(dá)到最高值速度快、組織分布范圍廣、抑菌的數(shù)量和種類多等諸多優(yōu)點，且其代謝產(chǎn)物均有良好的抗菌作用，所以廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖中的疾病防治。由于部分養(yǎng)殖戶存在不規(guī)范用藥，容易導(dǎo)致恩諾沙星隨著食物鏈進(jìn)入人體，造成軟骨組織、中樞神經(jīng)、消化系統(tǒng)等方面的損傷，同時較大劑量還會造成神經(jīng)系統(tǒng)的遲緩、肝臟損傷及皮膚過敏等個方面的問題。本文通過采用膠體金免疫檢測法，研究適用于現(xiàn)場快速監(jiān)測水產(chǎn)品中ENR殘留的檢測體系。膠體金免疫層析法具有檢測速度快、檢測結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)點，非常適用于這類現(xiàn)場快速檢測。本次研究主要獲得以下結(jié)果：1．ENR-OVA人工抗原的合成。采用N-羥基琥珀酰亞胺活性酯法將ENR偶聯(lián)到OVA上，經(jīng)FPLC、紫外、SDS-PAGE電泳等的檢測分析，ENR與OVA偶聯(lián)成功，可以用于進(jìn)一步試驗；2．多克隆抗體的制備。利用人工合成的抗原ENR-OVA免疫新西蘭大白兔，抗血清經(jīng)飽和硫酸銨法純化后... 

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
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表清單
縮寫詞表
第1章 前言
    1.1 在水產(chǎn)品中漁藥的殘留概述
    1.2 恩諾沙星在水產(chǎn)品中的應(yīng)用現(xiàn)狀
        1.2.1 恩諾沙星簡介
        1.2.2 恩諾沙星的理化特性
        1.2.3 恩諾沙星的抗菌作用
        1.2.4 恩諾沙星不良反應(yīng)
    1.3 恩諾沙星檢測方法研究進(jìn)展
        1.3.1 微生物檢測法
        1.3.2 高效液相色譜法
        1.3.3 液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)
        1.3.4 毛細(xì)管電泳分析法
        1.3.5 化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)
        1.3.6 酶聯(lián)免疫吸附測定法
        1.3.7 膠體金免疫層析法
    1.4 膠體金免疫層析法
        1.4.1 膠體金的制備
        1.4.2 膠體金標(biāo)記抗體制備
    1.5 研究的目的和意義
第2章 恩諾沙星人工抗原合成與鑒定
    2.1 材料和方法
        2.1.1 主要試劑
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 人工抗原合成
        2.1.4 合成產(chǎn)物鑒定
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 人工抗原 FPLC 層析分離純化鑒定
        2.2.2 人工抗原紫外掃描鑒定
        2.2.3 人工抗原的 SDS-PAGE 鑒定
    2.3 小結(jié)與討論
第3章 恩諾沙星多克隆抗體的制備和鑒定
    3.1 材料和設(shè)備
        3.1.1 主要實驗材料
        3.1.2 主要儀器設(shè)備
        3.1.3 主要緩沖液的配制
    3.2 抗體制備與評價
        3.2.1 動物免疫方案
        3.2.2 抗體效價測定
        3.2.3 包被抗原與抗恩諾沙星抗體最適工作濃度確定
        3.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制與抗體親和力測定
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 抗體效價鑒定
        3.3.2 包被抗原與抗恩諾沙星抗體最適工作濃度確定
        3.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制與親和性分析
    3.4 小結(jié)與討論
第4章 恩諾沙星膠體金免疫層析檢測技術(shù)研究
    4.1 材料和方法
        4.1.1 主要試劑
        4.1.2 主要儀器
        4.1.3 主要緩沖液與標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制
        4.1.4 實驗樣本材料
        4.1.5 實驗方法
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 金標(biāo) ENR 抗體質(zhì)量的鑒定
        4.2.2 金標(biāo)抗體噴膜量的選擇
        4.2.3 NC 膜的選擇
        4.2.4 NC 膜抗原包被量的選擇
        4.2.5 最低檢測限
        4.2.6 特異性檢測
        4.2.7 水產(chǎn)品樣本添加及 ELISA 比對結(jié)果
        4.2.8 常溫保存期和保存期加速結(jié)果
        4.2.9 實際樣本檢測
    4.3 小結(jié)與討論
第5章 結(jié)論
    5.1 人工抗原合成及多克隆抗體制備
    5.2 ENR 沙星試紙條研制及生產(chǎn)工藝確定
    5.3 本次研制試紙條的優(yōu)劣
        5.3.1 優(yōu)勢
        5.3.2 不足
    5.4 結(jié)語
參考文獻(xiàn)
致謝
在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及研究成果



本文編號：3649210