瓊膠酶是一種能夠降解瓊膠,生成瓊膠寡糖的糖苷水解酶。近年來(lái),隨著糖生物學(xué)的深入研究,人們發(fā)現(xiàn)瓊膠寡糖尤其是新瓊寡糖在誘導(dǎo)細(xì)胞調(diào)亡、抗氧化、抗炎、促進(jìn)雙歧桿菌生長(zhǎng)、預(yù)防糖尿病等方面具有顯著的生理活性,因此可廣泛應(yīng)用在食品、飼料、化妝品和醫(yī)藥領(lǐng)域。瓊膠寡糖制備方面,傳統(tǒng)的化學(xué)酸解法方法存在著反應(yīng)條件難控制、降解產(chǎn)物不純等問(wèn)題,而酶解法則有底物專(zhuān)一性強(qiáng)、產(chǎn)物特異性高、反應(yīng)條件溫和等優(yōu)點(diǎn),因此對(duì)瓊膠酶的研究具有重要意義。本文以本實(shí)驗(yàn)室分離得到的海洋細(xì)菌HQM9T為主要研究對(duì)象,完成了其新種鑒定、發(fā)酵產(chǎn)酶條件優(yōu)化以及瓊膠酶基因的克隆表達(dá)等工作。海洋細(xì)菌HQM9T分離自生長(zhǎng)在威海海域的收集的石花菜表面,是一株具有很強(qiáng)瓊膠降解能力細(xì)菌,在2216E平板上培養(yǎng)3-5天可完全液化平板。HQM9T的呼吸醌類(lèi)型是MK-6,主要脂肪酸類(lèi)型是C15:0ISO, C17:0iSO3OH, C16:1w7c/15iSO2OH, C16:03OH, C16:0, C17:02OH, C14:0, C13:1AT12-13, C13:0iso.主要的極性脂包括磷脂酰乙醇胺和一種未知的脂質(zhì)�；蚪MDNA（G+C）含量是3... 

【文章來(lái)源】：山東大學(xué)山東省211工程院校985工程院校教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：89 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞
第一章 緒論
    1.1 瓊膠
    1.2 瓊膠酶
        1.2.1 瓊膠酶的來(lái)源
        1.2.2 瓊膠酶在糖苷水解酶家族中的分類(lèi)
        1.2.3 瓊膠酶活性的檢測(cè)方法
        1.2.4 瓊膠酶的應(yīng)用
        1.2.5 瓊膠酶的研究進(jìn)展
    1.3 本論文研究的立題依據(jù)
第二章 海洋細(xì)菌新種—噬瓊膠海水菌(Aquimarina agarivorans sp.nov)HQM9~T的鑒定及發(fā)酵產(chǎn)酶條件優(yōu)化
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料和儀器
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)菌株
        2.1.3 主要儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 菌株生理生化鑒定
        2.2.2 菌株API快速鑒定
        2.2.3 細(xì)菌脂肪酸含量測(cè)定
        2.2.4 細(xì)菌極性脂分析
        2.2.5 細(xì)菌醌型分析
        2.2.6 菌株保藏
        2.2.7 菌株HQM9~T產(chǎn)酶發(fā)酵條件優(yōu)化
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        2.3.1 菌株HQM9~T的生理生化特征
        2.3.2 菌株HQM9~T的脂肪酸含量
        2.3.3 菌株HQM9~T醌型及極性脂分析
        2.3.4 菌株HQM9~T產(chǎn)瓊膠酶發(fā)酵條件的正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.5 優(yōu)化后菌株HQM9~T瓊膠酶的發(fā)酵進(jìn)程曲線測(cè)定
    2.4 討論
第三章 海洋細(xì)菌HQM9~T基因組測(cè)序結(jié)果分析與胞外瓊膠酶譜質(zhì)譜鑒定
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料和儀器
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)菌株
        3.1.3 主要儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 種子液的制備
        3.2.2 菌株HQM9~T粗酶液的制備
        3.2.3 不同時(shí)間瓊膠酶瓊膠酶組分的變化情況
        3.2.4 活性電泳檢測(cè)粗酶液瓊膠酶組分
        3.2.5 菌株HQM9~T基因組的提取
        3.2.6 菌株HQM9~T基因組測(cè)序和分析
        3.2.7 瓊膠酶基因的虛擬酶切與質(zhì)譜鑒定結(jié)果比較
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        3.3.1 不同碳源誘導(dǎo)下的菌株HQM9~T的胞外瓊膠酶
        3.3.2 質(zhì)譜鑒定結(jié)果
        3.3.3 菌株HQM9~T基因組測(cè)序結(jié)果分析
        3.3.4 菌株HQM9~T瓊膠酶基因的虛擬酶切與質(zhì)譜鑒定比較
    3.4 討論
第四章 菌株HQM9~T瓊膠酶基因的克隆與表達(dá)
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        4.1.1 培養(yǎng)基
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)菌株和質(zhì)粒
        4.1.3 主要儀器
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 瓊膠酶基因的生物信息學(xué)分析
        4.2.2 瓊膠酶基因的克隆
        4.2.3 其它基因的pMAL融合表達(dá)
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        4.3.1 瓊膠酶基因的生物信息學(xué)分析
        4.3.2 瓊膠酶基因的擴(kuò)增
        4.3.3 基因和載體的雙酶切
        4.3.4 SDS-PAGE檢測(cè)瓊膠酶基因的表達(dá)情況
        4.3.5 重組酶的活性檢測(cè)
        4.3.6 重組酶Aga16AD的純化
        4.3.7 重組酶酶學(xué)性質(zhì)研究
        4.3.8 其它基因的pMAL融合表達(dá)
    4.4 討論
總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄
附錄
學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]Lowry法和Bradford法測(cè)定玻璃酸鈉中蛋白質(zhì)含量的比較[J]. 楊桂蘭,郭學(xué)平.  中國(guó)生化藥物雜志. 2003(03)
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[5]用海藻細(xì)胞工程技術(shù),發(fā)展我國(guó)的海水養(yǎng)殖業(yè)[J]. 戴繼勛.  世界科技研究與發(fā)展. 2002(03)
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本文編號(hào)：3635903