目的用多重PCR法鑒別香魚假單胞菌;探索香魚假單胞菌表面抗原的免疫活性;篩選出對香魚假單胞菌具有抑菌作用的中草藥;以合適的途徑對大黃魚進行給藥,檢測大黃魚免疫學(xué)因子和抗病能力的變化情況,建立中草藥對大黃魚香魚假單胞菌病的防治技術(shù)。方法①設(shè)計并合成3對特異性引物,進行多重PCR。②制備香魚假單胞菌的主要表面抗原包括脂多糖、外膜蛋白、生物膜多糖和滅活全菌疫苗,注射免疫大黃魚;免疫28天后,檢測試驗魚血清抗體效價、白細(xì)胞吞噬活性和溶菌酶活性,免疫28天和35天后通過人工攻擊試驗檢測免疫保護率。③通過紙片瓊脂擴散法進行體外抑菌實驗,篩選出對香魚假單胞菌具有抑菌作用的中草藥。④制備中草藥藥物餌料,投喂大黃魚進行非特異免疫;檢測超氧化物歧化酶、過氧化氫酶等的活性;檢測中草藥體內(nèi)抑菌作用。結(jié)果①多重PCR反應(yīng)后,香魚假單胞菌致病菌株出現(xiàn)3條目的基因片段。②所有免疫組都激發(fā)了顯著的體液和非特異性免疫應(yīng)答,但在人工攻擊后均未起到有效的免疫保護作用。③篩選出了五倍子、黃芩、黨參等對香魚假單胞菌具有明顯抑菌作用的6種中草藥。④喂養(yǎng)不同中草藥28天后,黃芩組、黃芪組和黨參組表現(xiàn)了一定水平的保護力。說明中草藥對... 

【文章來源】：浙江中醫(yī)藥大學(xué)浙江省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
前言
實驗一、多重PCR鑒定香魚假單胞菌
    (一) 實驗材料與方法
        1. 實驗菌株
        2. 實驗試劑
        3. 實驗儀器
        4. 實驗方法
    (二) 試驗結(jié)果
        1. CTAB法提取細(xì)菌DNA結(jié)果
        2. 多重PCR反應(yīng)體系的建立和優(yōu)化
        3. 多重PCR的特異性檢測
        4. 多重PCR敏感性檢測
    (三) 分析與討論
    (四) 小結(jié)
實驗二、香魚假單胞菌表面抗原和滅活全菌苗對大黃魚的免疫效果
    (一) 實驗材料與方法
        1. 實驗用魚
        2. 菌株與試劑
        3. 抗原的準(zhǔn)備
        4. 實驗方法
    (二) 實驗結(jié)果
        1. 白細(xì)胞的吞噬活性和血清溶菌酶的測定
        2. 抗體效價的測定
        3. 人工攻毒實驗和免疫保護率的檢測
        4. 病魚組織超微結(jié)構(gòu)觀察結(jié)果
    (三) 分析與討論
        1. 各表面抗原和全菌疫苗免疫效果
        2. 香魚假單胞菌在細(xì)胞內(nèi)的生存和復(fù)制
    (四) 小結(jié)
實驗三、篩選對香魚假單胞菌具有抑制作用的中藥
    (一) 實驗材料與方法
        1. 實驗材料
        2. 實驗方法
    (二) 實驗結(jié)果
        1. 中草藥對魚類病菌的初篩結(jié)果
        2. 中草藥對實驗菌株的抑菌作用
        3. 各種中草藥的MIC和MBC
    (三) 分析討論
        1. 對中草藥在水產(chǎn)養(yǎng)殖中應(yīng)用的認(rèn)識
        2. 中草藥對病原菌抑制作用效果
    (四) 小結(jié)
實驗四、中藥投喂對大黃魚免疫活性的影響
    (一) 實驗材料與方法
        1. 中草藥藥物餌料的制備
        2. 試驗魚的暫養(yǎng)
        3. 菌株與試劑
        4. 實驗方法
    (二) 實驗結(jié)果
        1. 白細(xì)胞吞噬活性
        2. 溶菌酶活性
        3. SOD活性
        4. CAT活性
        5. 人工攻擊試驗結(jié)果
    (三) 討論與分析
    (四) 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
附圖
致謝
文獻綜述
    參考文獻


【參考文獻】：
期刊論文
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[2]大黃魚（Larimichthys crocea）內(nèi)臟白點病的病原分離和組織病理學(xué)觀察[J]. 邱楊玉,鄭磊,毛芝娟,陳孝煊.  微生物學(xué)通報. 2012(03)
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[4]2010年水產(chǎn)養(yǎng)殖病害發(fā)生情況與2011年流行趨勢分析[J]. 陳愛平,劉富林,吳凡修.  中國水產(chǎn). 2011(03)
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[9]大黃魚潰瘍病的組織病理和超微病理研究[J]. 戴瑜來,呂永林,李凱,陶震,王國良.  熱帶海洋學(xué)報. 2010(05)
[10]黃芪多糖對仿刺參非特異性免疫功能的影響[J]. 樊英,王淑嫻,葉海斌,許拉,朱安成,楊秀生,李天保.  水產(chǎn)科學(xué). 2010(06)

碩士論文
[1]浙江大黃魚養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)化發(fā)展研究[D]. 陳飛.浙江海洋學(xué)院 2011
[2]網(wǎng)箱養(yǎng)殖大黃魚主要疾病的預(yù)報模型研究[D]. 周瑞娟.寧波大學(xué) 2011



本文編號：3631856