首先在同一濕度不同溫度下對(duì)同一規(guī)格的中華鱉卵進(jìn)行了孵化,研究了其胚胎發(fā)育和初生幼體的形態(tài)特征,以及活動(dòng)能力的影響。然后以致病性嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）人工感染的中華鱉（Trionyx sinensis）心肝、脾、腎組織為材料,應(yīng)用SMART （switching mechanism at 5’end of RNA transcript）技術(shù),構(gòu)建了中華鱉全長(zhǎng)的cDNA文庫(kù)。首先用SMARTTM PCR cDNA systhesis kit合成全長(zhǎng)的雙鏈cDNA,通過瓊脂糖凝膠分級(jí)分離技術(shù)切除小片段的cDNA,將大于500bp的cDNA連接到pGEM-T載體中,電轉(zhuǎn)化到JM109感受態(tài)細(xì)胞中。在構(gòu)建好的文庫(kù)中,經(jīng)測(cè)定,文庫(kù)約含有4.3×105個(gè)重組子,重組效率92%,插入片段多在0.5-2kb之間。對(duì)庫(kù)中長(zhǎng)度大于1000bp的164個(gè)基因進(jìn)行了測(cè)序,結(jié)果顯示39個(gè)序列在中華鱉中首次發(fā)現(xiàn),測(cè)序鑒定的基因包括免疫基因11個(gè)；信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)基因6個(gè)：催化類基因15個(gè)；轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因3個(gè)；結(jié)構(gòu)基因7個(gè)；未知基因9個(gè)。本論文構(gòu)建成的嗜水氣單胞菌誘導(dǎo)的中華鱉SMART全長(zhǎng)cD... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省211工程院校教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 引言
    2 中華鱉養(yǎng)殖現(xiàn)狀
    3 中華鱉病原研究現(xiàn)狀
        3.1 傳染性病
            3.1.1 細(xì)菌病
            3.1.2 病毒病
            3.1.3 真菌病
            3.1.4 寄生蟲病
            3.1.5 支原體病和霉形體病
        3.2 非傳染性病
        3.3 診斷
        3.4 預(yù)防
            3.4.1 環(huán)境
            3.4.2 機(jī)體
            3.4.3 病原
    4 爬行動(dòng)物免疫的研究進(jìn)展
        4.1 爬行動(dòng)物的淋巴組織
        4.2 爬行動(dòng)物的天然免疫
        4.3 爬行動(dòng)物的獲得性免疫
        4.4 影響爬行動(dòng)物免疫應(yīng)答的因素
    5 嗜水氣單胞菌
    6 CCL20研究進(jìn)展
        6.1 CCL20的由來
        6.2 趨化因子的分類和CCL20的結(jié)構(gòu)
        6.3 CCL20的功能
        6.4 展望
    7 技術(shù)路線
        7.1 嗜水氣單胞菌誘導(dǎo)的中華鱉cDNA文庫(kù)構(gòu)建
        7.2 CCL20的部分序列克隆和驗(yàn)證
        7.3 CCL20 mRNA組織表達(dá)分析(A)和應(yīng)激實(shí)驗(yàn)(B)
    8 研究目的和意義
第二章 溫度對(duì)中華鱉胚胎發(fā)育和初生幼體形態(tài)特征及活動(dòng)能力的影響
    1 材料
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 孵化
        2.2 指標(biāo)測(cè)定
        2.3 數(shù)據(jù)處理
    3 結(jié)果與分析
        3.1 溫度對(duì)胚胎發(fā)育和孵化成活率的影響
        3.2 孵化溫度對(duì)孵出稚鱉形態(tài)特征的影響
        3.3 溫度對(duì)新生幼體運(yùn)動(dòng)表現(xiàn)的影響
    4 討論
        4.1 孵化溫度對(duì)鱉卵孵化率的影響
        4.2 溫度對(duì)新生體大小及運(yùn)動(dòng)能力的影響
第三章 嗜水氣單胞菌誘導(dǎo)的中華鱉SMART cDNA文庫(kù)構(gòu)建及相關(guān)基因的鑒定
    1 材料
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 細(xì)菌復(fù)壯及人工感染
        2.2 總RNA的提取
        2.3 單、雙鏈cDNA的合成
        2.4 cDNA的連接
        2.5 連接產(chǎn)物電轉(zhuǎn)化
        2.6 cDNA文庫(kù)的容量和重組率測(cè)定
        2.7 DNA測(cè)序和序列分析
    3 結(jié)果與分析
        3.1 中華鱉總RNA的質(zhì)量檢測(cè)
        3.2 cDNA的合成
        3.3 cDNA文庫(kù)的庫(kù)容及重組率
        3.4 插入片段長(zhǎng)度分析
        3.5 測(cè)序結(jié)果和分析
    4 討論
第四章 中華鱉CCL20序列的特征分析
    1 材料與試劑
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 試劑
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 cDNA的ORF區(qū)序列驗(yàn)證
        2.2 cDNA的ORF區(qū)序列分析
    3 結(jié)果與分析
        3.1 CCL20的cDNA的ORF區(qū)序列分析
        3.2 CCL20結(jié)構(gòu)分析
    4 討論
第五章 中華鱉CCL20基因組織表達(dá)分析
    1 材料與試劑
        1.1 材料
        1.2 主要試劑
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 RNA提取及cDNA的合成
        2.2 CCL20基因組織表達(dá)分析
        2.3 CCL20基因在嗜水氣單胞菌刺激下的表達(dá)特征分析
        2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 目的基因和內(nèi)參基因的擴(kuò)增曲線
        3.2 目的基因和內(nèi)參基因的溶解曲線
        3.3 正常組中華鱉CCL20基因組織表達(dá)特征
        3.4 嗜水氣單胞菌刺激組中華鱉CCL20基因組織表達(dá)特征
    4 討論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
學(xué)術(shù)論文發(fā)表情況


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]尋常性銀屑病患者血清CCL20及其受體CCR6水平的變化及阿維A的干預(yù)作用[J]. 隆嵐,李振,錢振云,譚飛.  中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志. 2013(06)
[3]黃喉擬水龜巨噬細(xì)胞炎癥蛋白-3α重組表達(dá)及抗菌活性分析[J]. 龍建杰,朱新平,史燕,趙建,洪孝友.  水產(chǎn)學(xué)報(bào). 2013(04)
[4]趨化因子受體CCR6及其配體CCL20的表達(dá)與結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 蔡昕怡,楊之斌,李云峰.  中國(guó)癌癥雜志. 2012(07)
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博士論文
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碩士論文
[1]血清CC亞族趨化因子配體20與2型糖尿病的相關(guān)性[D]. 徐文超.蘇州大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3618906