前期研究發(fā)現(xiàn),鯉春病毒血癥病毒（Spring Viraemia of Carp Virus,SVCV）感染EPC細(xì)胞可以誘導(dǎo)氧化應(yīng)激,下調(diào)血紅素加氧酶1（Heme oxygen-1,HO-1）的表達(dá),擾亂細(xì)胞內(nèi)氧化還原平衡,造成DNA和蛋白質(zhì)氧化損傷,是SVCV重要的致病機(jī)制之一。Nrf2-ARE是機(jī)體對抗氧化應(yīng)激最重要的內(nèi)源性信號通路,由Nrf2介導(dǎo)的下游效應(yīng)基因在細(xì)胞抗氧化、抗炎癥、抗凋亡等過程中發(fā)揮著關(guān)鍵性作用,并參與到多種病毒的感染和復(fù)制過程中。為此,本研究系統(tǒng)探討了Nrf2-ARE信號通路與SVCV之間的相互作用關(guān)系,其結(jié)果有助于深入了解SVCV的致病機(jī)理,為SVCV的預(yù)防和治療提供新的解決方案。主要研究結(jié)果如下:1.激活劑SFN和CDDO-Me對Nrf2-ARE信號通路的激活效果以及對SVCV復(fù)制的影響用MTT法測定了Nrf2的激活劑SFN和CDDO-Me對FHM細(xì)胞的LD50（48h）分別為37.65μM和6.823μM。接著,通過RT-q PCR和Western blot在細(xì)胞水平上檢測兩種激活劑對FHM細(xì)胞Nrf2-ARE信號通路的激活效果。結(jié)果顯示,SFN處理前期N... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1. 鯉春病毒血癥病毒研究進(jìn)展
        1.1 SVC流行特點
        1.2 SVCV生物學(xué)特征
        1.3 SVCV致病機(jī)制
            1.3.1 細(xì)胞自噬與SVCV復(fù)制
            1.3.2 氧化應(yīng)激與SVCV復(fù)制
    2. Nrf2-ARE信號通路的研究進(jìn)展
        2.1 Nrf2-ARE信號通路的激活途徑
        2.2 Nrf2-ARE信號通路的激活劑
        2.3 Nrf2-ARE信號通路在病毒相關(guān)疾病中的作用
    3. 本研究的目的與意義
第二章 Nrf2-ARE信號在SVCV復(fù)制中的作用研究
    1. 材料與方法
        1.1 實驗材料
            1.1.1 細(xì)胞與病毒
            1.1.2 實驗試劑
            1.1.3 siRNA的設(shè)計與合成
            1.1.4 PCR引物的設(shè)計與合成
            1.1.5 試劑配制
            1.1.6 實驗儀器設(shè)備
        1.2 試驗方法
            1.2.1 FHM細(xì)胞復(fù)蘇及傳代培養(yǎng)
            1.2.2 MTT法測定藥物毒性
            1.2.3 RT-qPCR檢測激活劑對Nrf2及其下游效應(yīng)基因表達(dá)的作用
                1.2.3.1 細(xì)胞總RNA提取
                1.2.3.2 反轉(zhuǎn)錄
                1.2.3.3 Real-time PCR
            1.2.4 免疫印跡實驗
                1.2.4.1 細(xì)胞總蛋白的提取
                1.2.4.2 蛋白定量
                1.2.4.3 蛋白電泳
                1.2.4.4 轉(zhuǎn)膜
                1.2.4.5 免疫反應(yīng)
                1.2.4.6 化學(xué)發(fā)光法檢測
            1.2.5 FRAP法檢測激活劑處理后的細(xì)胞總抗氧化能力
            1.2.6 激活劑處理后的病毒感染
            1.2.7 Real-time PCR檢測SVCV-G的表達(dá)
            1.2.8 Reed-Muench兩氏法檢測激活劑處理后病毒滴度
            1.2.9 瞬時細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        1.3 統(tǒng)計分析
    2. 結(jié)果與分析
        2.1 激活劑SFN和CDDO-Me對FHM細(xì)胞的毒性
        2.2 激活劑處理FHM細(xì)胞后Nrf2及下游抗氧化基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)分析
        2.3 激活劑處理后FHM細(xì)胞總抗氧化能力T-AOC的測定
        2.4 激活劑處理后SVCV-G基因的定量分析
        2.5 激活劑處理后SVCV滴度的測定
        2.6 Nrf2-siRNA干擾效率的驗證及選擇
        2.7 Nrf2敲降后激活劑對Nrf2及下游效應(yīng)基因轉(zhuǎn)錄和表達(dá)水平的影響
        2.8 Nrf2-siRNA干擾后細(xì)胞總抗氧化能力T-AOC的測定
        2.9 Nrf2敲降后SVCV-G基因的定量分析
        2.10 HO-1 敲降后SVCV-G基因的定量分析
    3. 討論
參考文獻(xiàn)
附表：碩士期間發(fā)表的論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3601017