飼料精氨酸對珍珠龍膽石斑魚腸道物理和免疫屏障的影響機(jī)制
發(fā)布時(shí)間：2022-01-21 14:46
精氨酸作為一種功能性氨基酸,需要通過相應(yīng)的轉(zhuǎn)運(yùn)載體進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),發(fā)揮其在魚類的生長、免疫及腸道黏膜等方面的重要作用。魚類腸道作為維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的一道重要屏障,對機(jī)體的防御系統(tǒng)意義重大。因此,精氨酸的吸收轉(zhuǎn)運(yùn)及對魚類腸道物理和免疫屏障的系統(tǒng)研究具有重要意義。本文從珍珠龍膽石斑魚腸道精氨酸的吸收轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制入手,探討其對腸道物理屏障和免疫屏障的影響。主要的研究結(jié)果如下:1.為了探究精氨酸在腸道的吸收轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制,運(yùn)用c DNA末端快速擴(kuò)增（RACE）技術(shù)克隆得到珍珠龍膽石斑魚堿性氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)載體CAT1基因（SLC7A1）c DNA的全長序列,并且應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對CAT1基因在珍珠龍膽石斑魚不同組織中的表達(dá)進(jìn)行檢測。結(jié)果顯示,CAT1基因序列全長2319bp,其中開放閱讀框（ORF）為1938bp,編碼645個(gè)氨基酸,5’-UTR為208bp,3’-UTR為173bp,預(yù)測其相對分子量為69.7KDa,理論等電點(diǎn)5.31。多序列比對結(jié)果顯示珍珠龍膽石斑魚CAT1基因與其他物種的CAT1具有較高的保守性。SMART軟件對CAT1 c DNA進(jìn)行蛋白質(zhì)序列分析,發(fā)現(xiàn)它包含14個(gè)跨膜區(qū)。實(shí)時(shí)...
【文章來源】：廣東海洋大學(xué)廣東省
【文章頁數(shù)】：61 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
緊密連接蛋白結(jié)構(gòu)圖[6]
飼料精氨酸對珍珠龍膽石斑魚腸道物理和免疫屏障的影響機(jī)制10圖2-1珍珠龍膽石斑魚CAT1基因和蛋白序列圖CAT1cDNA的核苷酸和推導(dǎo)的氨基酸序列。起始密碼子ATG和終止密碼子TAA用粗體字母表示。推導(dǎo)的氨基酸序列顯示在核苷酸序列下方。黑框顯示了潛在的跨膜區(qū)域（TM），圓圈顯示了磷酸化位點(diǎn)（Ser：3;Thr：3;Tyr：1）。Fig.2-1NucleotideanddeducedaminoacidsequenceofCAT1cDNA.ThestartcodonATGandthestopcodonTAAareindicatedinboldletters.Thededucedaminoacidsequenceisshownbelowthenucleotidesequence.Thepotentialtransmembranemotif(TM)isshowninblackboxesandthephosphorylationsite(Ser:3;Thr:3;Tyr:1)isshownincircles.2.2.2CAT1氨基酸序列蛋白跨膜結(jié)構(gòu)域和三級結(jié)構(gòu)的預(yù)測通過TMHMM2.0和KinasePhosServer軟件對CAT1蛋白進(jìn)行跨膜結(jié)構(gòu)域和磷酸化位點(diǎn)的預(yù)測，推測出CAT1蛋白具有14個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域（見圖2-2），22個(gè)磷酸化位點(diǎn)（絲氨酸，16個(gè)；蘇氨酸，6個(gè)）（見圖2-1）。Swiss-Model軟件預(yù)測珍珠龍膽石斑魚CAT1蛋白三級結(jié)構(gòu)結(jié)果顯示，CAT1蛋白三維結(jié)構(gòu)主要由α螺旋、β折疊和無規(guī)則卷曲構(gòu)成（見圖2-3）。圖2-2珍珠龍膽石斑魚CAT1蛋白結(jié)構(gòu)域預(yù)測Fig.2-2ThepredictionoftransmembranestructureofHybridGrouperCAT1aminoacidsequence
廣東海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文11圖2-3珍珠龍膽石斑魚CAT1蛋白三級結(jié)構(gòu)預(yù)測Fig.2-3PredictionoftertiarystructureofCAT1proteininHybridGrouper2.2.3CAT1氨基酸序列同源性分析氨基酸多序列比對結(jié)果顯示，珍珠龍膽石斑魚CAT1氨基酸序列與硬骨魚鞍斑杜父鱸鰧（Cottopercagobio）（XP_029302534.1）（87%）、斑馬魚（Daniorerio）（NP_001315138.1）（76%）及虹鱒（Oncorhynchusmykiss）（XP_021472982.1）（74.96%）的具有較高同源性，與牛（BosTaurus）（NP_001129264.1）、山羊（Caprahircus）（XP_017912100.1）、人（Homosapiens）（NP_003036.1）、獼猴（Macacamulatta）（AFI33244.1）、犬（Canislupusfamiliaris）（NP_001274482.1）、非洲爪蟾（Xenopus(Silurana)tropicalis）（XP_002934074.1）、兔（Oryctolaguscuniculus）（XP_017206429.1）及小鼠（Musmusculus）（NP_001288353.1）的同源性較低，分別為69%、69%、69%、69%、68%、68%、67%與66%（見圖2-4）。使用CLUSTALX1.83和MEGA4.0程序構(gòu)建了系統(tǒng)發(fā)育樹，揭示了CAT1的分子系統(tǒng)發(fā)育位置。結(jié)果顯示，珍珠龍膽石斑魚首先與鱸形目的鞍斑杜父鱸鰧聚為一支，再與其他硬骨魚及脊椎動(dòng)物聚為一支，兩棲動(dòng)物非洲爪蟾單獨(dú)聚為一支（見圖2-5、表2-2）。
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]鯉魚IgM的分離純化及其抗血清的制備[J]. 姜娜,邢薇,羅琳,李鐵梁,李文通,劉彩霞,袁丁,徐冠玲,馬志宏. 黑龍江畜牧獸醫(yī). 2018(03)
[2]Leucine increases mucin 2 and occludin production in LS174T cells partially via PI3K-Akt-mTOR pathway[J]. Xiangbing Mao,Haiyan Hu,Jun Tang,Daiwen Chen,Bing Yu. Animal Nutrition. 2016(03)
[3]飼料精氨酸水平對斜帶石斑魚幼魚生長和腸道形態(tài)的影響[J]. 遲淑艷,韓鳳祿,譚北平,董曉慧,楊奇慧,劉泓宇,章雙. 水生生物學(xué)報(bào). 2016(02)
[4]The immune modifying effects of amino acids on gut-associated lymphoid tissue[J]. Megan R Ruth,Catherine J Field. Journal of Animal Science and Biotechnology. 2013(03)
[5]葉元土:養(yǎng)好腸道,養(yǎng)好魚（下）[J]. 吳群鳳. 當(dāng)代水產(chǎn). 2013(04)
[6]多糖免疫增強(qiáng)劑對水產(chǎn)動(dòng)物免疫的影響及機(jī)理研究[J]. 孫愛杰,任同軍,孫永欣. 飼料與畜牧. 2011(12)
[7]精氨酸和賴氨酸對瓦氏黃顙魚幼魚生長和非特異性免疫力的影響[J]. 封福鮮,艾慶輝,徐瑋,麥康森,張文兵. 水產(chǎn)學(xué)報(bào). 2011(07)
[8]IL-2-PE40抑制大鼠角膜上皮細(xì)胞MHC抗原表達(dá)的研究[J]. 吳京,黃發(fā)明,王小寧. 眼科新進(jìn)展. 2002(01)
碩士論文
[1]膨化和普通豆粕替代魚粉對斜帶石斑魚生長性能和腸道屏障的影響[D]. 王彥飛.集美大學(xué) 2019
[2]谷胱甘肽對金鱒生長性能和腸道健康的影響[D]. 蘇寶輝.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[3]精氨酸對草魚幼魚生長、腸道結(jié)構(gòu)調(diào)控及機(jī)制研究[D]. 陳嬌嬌.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[4]草魚（Ctenopharyngodon idellus）腸道緊密連接蛋白基因克隆與表達(dá)活性分析[D]. 許凡.蘇州大學(xué) 2013
[5]生長中期草魚的蘇氨酸需要量研究[D]. 胡曉霞.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[6]精氨酸對細(xì)毛羊腸道蛋白質(zhì)合成、氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白mRNA表達(dá)及腸道健康的影響[D]. 趙宏麗.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[7]鯽魚IgM單克隆抗體的制備及嗜水氣單胞菌抗體ELISA檢測方法的建立[D]. 臧明發(fā).南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[8]斑馬魚腸道微細(xì)結(jié)構(gòu)及腸粘膜屏障的研究[D]. 姚一琳.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[9]谷氨酰胺二肽對鏡鯉生長、腸道發(fā)育及非特異性免疫的影響[D]. 朱青.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
本文編號：3600462
【文章來源】：廣東海洋大學(xué)廣東省
【文章頁數(shù)】：61 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
緊密連接蛋白結(jié)構(gòu)圖[6]
飼料精氨酸對珍珠龍膽石斑魚腸道物理和免疫屏障的影響機(jī)制10圖2-1珍珠龍膽石斑魚CAT1基因和蛋白序列圖CAT1cDNA的核苷酸和推導(dǎo)的氨基酸序列。起始密碼子ATG和終止密碼子TAA用粗體字母表示。推導(dǎo)的氨基酸序列顯示在核苷酸序列下方。黑框顯示了潛在的跨膜區(qū)域（TM），圓圈顯示了磷酸化位點(diǎn)（Ser：3;Thr：3;Tyr：1）。Fig.2-1NucleotideanddeducedaminoacidsequenceofCAT1cDNA.ThestartcodonATGandthestopcodonTAAareindicatedinboldletters.Thededucedaminoacidsequenceisshownbelowthenucleotidesequence.Thepotentialtransmembranemotif(TM)isshowninblackboxesandthephosphorylationsite(Ser:3;Thr:3;Tyr:1)isshownincircles.2.2.2CAT1氨基酸序列蛋白跨膜結(jié)構(gòu)域和三級結(jié)構(gòu)的預(yù)測通過TMHMM2.0和KinasePhosServer軟件對CAT1蛋白進(jìn)行跨膜結(jié)構(gòu)域和磷酸化位點(diǎn)的預(yù)測，推測出CAT1蛋白具有14個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域（見圖2-2），22個(gè)磷酸化位點(diǎn)（絲氨酸，16個(gè)；蘇氨酸，6個(gè)）（見圖2-1）。Swiss-Model軟件預(yù)測珍珠龍膽石斑魚CAT1蛋白三級結(jié)構(gòu)結(jié)果顯示，CAT1蛋白三維結(jié)構(gòu)主要由α螺旋、β折疊和無規(guī)則卷曲構(gòu)成（見圖2-3）。圖2-2珍珠龍膽石斑魚CAT1蛋白結(jié)構(gòu)域預(yù)測Fig.2-2ThepredictionoftransmembranestructureofHybridGrouperCAT1aminoacidsequence
廣東海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文11圖2-3珍珠龍膽石斑魚CAT1蛋白三級結(jié)構(gòu)預(yù)測Fig.2-3PredictionoftertiarystructureofCAT1proteininHybridGrouper2.2.3CAT1氨基酸序列同源性分析氨基酸多序列比對結(jié)果顯示，珍珠龍膽石斑魚CAT1氨基酸序列與硬骨魚鞍斑杜父鱸鰧（Cottopercagobio）（XP_029302534.1）（87%）、斑馬魚（Daniorerio）（NP_001315138.1）（76%）及虹鱒（Oncorhynchusmykiss）（XP_021472982.1）（74.96%）的具有較高同源性，與牛（BosTaurus）（NP_001129264.1）、山羊（Caprahircus）（XP_017912100.1）、人（Homosapiens）（NP_003036.1）、獼猴（Macacamulatta）（AFI33244.1）、犬（Canislupusfamiliaris）（NP_001274482.1）、非洲爪蟾（Xenopus(Silurana)tropicalis）（XP_002934074.1）、兔（Oryctolaguscuniculus）（XP_017206429.1）及小鼠（Musmusculus）（NP_001288353.1）的同源性較低，分別為69%、69%、69%、69%、68%、68%、67%與66%（見圖2-4）。使用CLUSTALX1.83和MEGA4.0程序構(gòu)建了系統(tǒng)發(fā)育樹，揭示了CAT1的分子系統(tǒng)發(fā)育位置。結(jié)果顯示，珍珠龍膽石斑魚首先與鱸形目的鞍斑杜父鱸鰧聚為一支，再與其他硬骨魚及脊椎動(dòng)物聚為一支，兩棲動(dòng)物非洲爪蟾單獨(dú)聚為一支（見圖2-5、表2-2）。
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]鯉魚IgM的分離純化及其抗血清的制備[J]. 姜娜,邢薇,羅琳,李鐵梁,李文通,劉彩霞,袁丁,徐冠玲,馬志宏. 黑龍江畜牧獸醫(yī). 2018(03)
[2]Leucine increases mucin 2 and occludin production in LS174T cells partially via PI3K-Akt-mTOR pathway[J]. Xiangbing Mao,Haiyan Hu,Jun Tang,Daiwen Chen,Bing Yu. Animal Nutrition. 2016(03)
[3]飼料精氨酸水平對斜帶石斑魚幼魚生長和腸道形態(tài)的影響[J]. 遲淑艷,韓鳳祿,譚北平,董曉慧,楊奇慧,劉泓宇,章雙. 水生生物學(xué)報(bào). 2016(02)
[4]The immune modifying effects of amino acids on gut-associated lymphoid tissue[J]. Megan R Ruth,Catherine J Field. Journal of Animal Science and Biotechnology. 2013(03)
[5]葉元土:養(yǎng)好腸道,養(yǎng)好魚（下）[J]. 吳群鳳. 當(dāng)代水產(chǎn). 2013(04)
[6]多糖免疫增強(qiáng)劑對水產(chǎn)動(dòng)物免疫的影響及機(jī)理研究[J]. 孫愛杰,任同軍,孫永欣. 飼料與畜牧. 2011(12)
[7]精氨酸和賴氨酸對瓦氏黃顙魚幼魚生長和非特異性免疫力的影響[J]. 封福鮮,艾慶輝,徐瑋,麥康森,張文兵. 水產(chǎn)學(xué)報(bào). 2011(07)
[8]IL-2-PE40抑制大鼠角膜上皮細(xì)胞MHC抗原表達(dá)的研究[J]. 吳京,黃發(fā)明,王小寧. 眼科新進(jìn)展. 2002(01)
碩士論文
[1]膨化和普通豆粕替代魚粉對斜帶石斑魚生長性能和腸道屏障的影響[D]. 王彥飛.集美大學(xué) 2019
[2]谷胱甘肽對金鱒生長性能和腸道健康的影響[D]. 蘇寶輝.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[3]精氨酸對草魚幼魚生長、腸道結(jié)構(gòu)調(diào)控及機(jī)制研究[D]. 陳嬌嬌.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[4]草魚（Ctenopharyngodon idellus）腸道緊密連接蛋白基因克隆與表達(dá)活性分析[D]. 許凡.蘇州大學(xué) 2013
[5]生長中期草魚的蘇氨酸需要量研究[D]. 胡曉霞.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[6]精氨酸對細(xì)毛羊腸道蛋白質(zhì)合成、氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白mRNA表達(dá)及腸道健康的影響[D]. 趙宏麗.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[7]鯽魚IgM單克隆抗體的制備及嗜水氣單胞菌抗體ELISA檢測方法的建立[D]. 臧明發(fā).南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[8]斑馬魚腸道微細(xì)結(jié)構(gòu)及腸粘膜屏障的研究[D]. 姚一琳.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[9]谷氨酰胺二肽對鏡鯉生長、腸道發(fā)育及非特異性免疫的影響[D]. 朱青.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
本文編號：3600462
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