刀鱭是一種經(jīng)濟(jì)價值極高的名貴魚種,近年來由于水環(huán)境污染和過度捕撈,其天然種群資源急劇減少,目前已處于瀕危狀態(tài)。長江刀鱭素有出水即死的特點,應(yīng)激反應(yīng)極其強(qiáng)烈,人為手工操作容易受傷死亡,導(dǎo)致其人工繁殖過程遭受巨大的損失。為深入了解刀鱭急性脅迫下容易死亡的機(jī)理,探索有效的緩解方法,本研究首先通過放射免疫測定法測定急性操作脅迫對刀鱭頭腎和血漿皮質(zhì)醇含量的影響,利用同源克隆的方法獲得刀鱭促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素（CRH）、硬骨魚緊張肽（UI）、阿黑皮素原（POMC）基因的部分序列,并應(yīng)用實時熒光定量PCR （qPCR）方法檢測上述神經(jīng)內(nèi)分泌因子相關(guān)基因mRNA在急性操作脅迫前后的表達(dá)變化；然后,通過高通量測序技術(shù)分析對照組（C1）,相對抗應(yīng)激組（S1）及敏感組（S2）之間表達(dá)譜的差異,篩選11個差異表達(dá)顯著的基因進(jìn)行熒光定量PCR驗證,鑒定可能與抗應(yīng)激相關(guān)的分子標(biāo)記；最后測定刀鱭在不同濃度脅迫緩解劑SNP（NO供體）或10‰鹽度條件下,急性操作脅迫對皮質(zhì)醇、游離甲狀腺素（FT4）和丙二醛水平的影響,分析不同SNP濃度及鹽度條件對刀鱭應(yīng)激反應(yīng)的緩解作用,并利用刀鱭仔魚前期及肝臟原代細(xì)胞為模型,深入... 

【文章來源】：海南大學(xué)海南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 導(dǎo)論
    1. 應(yīng)激概念
    2. 應(yīng)激對魚類的影響
    3. 應(yīng)激方法的建立
    4. 魚類應(yīng)激研究進(jìn)展
    5. 高通量測序技術(shù)
        5.1. 主流高通量測序平臺
        5.2. RNA-seq技術(shù)
    6. 魚類應(yīng)激研究存在的問題
    7. 展望
    8. 論文研究的目的和意義
    9. 創(chuàng)新點
第二章 急性操作脅迫對刀鱭應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)神經(jīng)內(nèi)分泌因子的影響
    1. 引言
    2. 材料與方法
        2.1. 實驗材料
        2.2. 實驗方法
    3. 結(jié)果與分析
        3.1. 應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)神經(jīng)內(nèi)分泌因子CRH,UI和POMC基因的克隆
        3.2. 急性操作應(yīng)激反應(yīng)中皮質(zhì)醇的含量變化
        3.3. 手工捕捉對刀鱭CRH,UI和POMC基因表達(dá)水平的影響
    4. 討論
    5. 小結(jié)
第三章 基于RNA-seq的刀鱭急性操作脅迫相關(guān)基因研究
    1. 引言
    2. 材料與方法
        2.1. 實驗材料
        2.2. 實驗方法
    3. 結(jié)果與分析
        3.1. 刀鱭樣品RNA-Seq結(jié)果
        3.2. Unigene注釋結(jié)果匯總
        3.3. 鑒定差異表達(dá)的mRNA
        3.4. qRT-PCR驗證差異表達(dá)的基因
        3.5. 鑒定SNP與SSR
    4. 討論
    5. 小結(jié)
第四章 探究NO及鹽對刀鱭急性應(yīng)激的緩解作用
    1. 引言
    2. 材料與方法
        2.1 實驗材料
        2.2 實驗方法
    3. 結(jié)果與分析
        3.1 不同組間刀鱭血漿、頭腎中的皮質(zhì)醇含量
        3.2 刀鱭在實驗中的死亡率
        3.3 刀鱭血漿及頭腎中的的皮質(zhì)醇及血漿FT4含量的檢測結(jié)果
        3.4 刀鱭肝臟MDA的檢測結(jié)果
        3.5 水質(zhì)的檢測結(jié)果
        3.6 刀鱭仔魚氧化應(yīng)激實驗結(jié)果
        3.7 刀鱭肝臟原代細(xì)胞ROS實驗結(jié)果
    4. 討論
    5. 小結(jié)
總結(jié)與展望
    1. 總結(jié)
    2. 今后可進(jìn)一步開展以下工作
參考文獻(xiàn)
附錄Ⅰ 縮略語表
附錄Ⅱ 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的和待發(fā)表的論文
致謝



本文編號：3523835