為了評(píng)價(jià)前期構(gòu)建的傳染性胰臟壞死病毒（Infectious pancreatic necrosis virus,IPNV）VP2蛋白酵母展示疫苗（EBY100/pYD1-VP2）的免疫保護(hù)效果,以虹鱒Oncorhynchus mykiss為試驗(yàn)動(dòng)物分析了口服免疫的保護(hù)效力,利用流式細(xì)胞儀和細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)方法確定疫苗株的最佳誘導(dǎo)時(shí)間為60 h,然后大量制備酵母口服疫苗,分別利用單次和多次口灌的方式對(duì)虹鱒進(jìn)行免疫;單次免疫為連續(xù)免疫7 d,多次免疫為單次免疫一周后再以相同劑量免疫7 d,免疫劑量均為每天100μL疫苗菌(1×10¹⁰ CFU/mL),同時(shí)設(shè)置空載體酵母菌免疫組和PBS模擬免疫組,通過(guò)免疫相關(guān)基因定量、中和抗體滴定及攻毒后IPNV病毒載量分析口服疫苗的保護(hù)效果。結(jié)果表明:疫苗株免疫組虹鱒頭腎、后腸中的免疫相關(guān)基因IgM、IgT、CD4、CD8在各時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)量均顯著高于空載體酵母菌免疫組和PBS模擬免疫組（P<0.05）,且與單次免疫組相比,多次免疫組免疫相關(guān)基因表達(dá)量顯著升高（P<0.05）;在疫苗株免疫組虹鱒血清中均發(fā)現(xiàn)了中和抗體,其中... 

【文章來(lái)源】：大連海洋大學(xué)學(xué)報(bào). 2020,35(06)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：8 頁(yè)

【部分圖文】：

EBY100/pYD1-VP2表面VP2蛋白的免疫熒光檢測(cè)

利用RT-qPCR測(cè)定各組虹鱒攻毒后頭腎、肝臟和脾臟混合組織樣品中VP1和VP2基因表達(dá)量,以PBS模擬攻毒組虹鱒組織RNA為空白對(duì)照。從圖6可見(jiàn):在第14、21天時(shí),空載體酵母免疫組虹鱒組織中VP1和VP2基因表達(dá)量均顯著高于疫苗免疫組(P<0.05),其中空載體酵母單次和多次免疫組VP1基因表達(dá)量分別為疫苗株單次和多次免疫組的95、202倍和90、280倍,空載體酵母單次和多次免疫組VP2基因表達(dá)量分別為疫苗株單次和多次免疫組的90、237倍和83、220倍;在第14、21天,疫苗株單次免疫組VP1和VP2基因的表達(dá)量顯著高于疫苗株多次免疫組(P<0.05),疫苗株單次免疫組為疫苗株多次免疫組的2.25、3.33倍(VP1)和2.67、2.80倍(VP2)。本研究結(jié)果表明,該酵母口服疫苗可使虹鱒體內(nèi)的病毒載量顯著降低(P<0.05),且多次免疫具有更強(qiáng)的抗病毒效果,各組攻毒虹鱒未出現(xiàn)IPNV病理性死亡。3 討論

IPNV是一種高傳染性、高致死率的病原體,對(duì)鮭鱒水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。對(duì)魚(yú)類(lèi)病毒性疾病來(lái)說(shuō),疫苗是一種安全、高效的理想防控藥物。目前全球只有挪威有一種IPN商業(yè)化疫苗為亞單位疫苗,該商業(yè)化亞單位疫苗主要針對(duì)Sp血清型IPNV,而中國(guó)現(xiàn)行IPNV毒株并非全是SP血清型。因此,中國(guó)IPN的有效防控只能依靠疫苗的自主研發(fā),無(wú)法引進(jìn)國(guó)外商業(yè)化疫苗。目前,漁用疫苗的免疫方式主要包括口服免疫、腹腔或肌肉注射免疫和浸泡免疫。口服疫苗可操作性強(qiáng),過(guò)程簡(jiǎn)單方便,利于多次免疫,適合魚(yú)苗的大規(guī)模免疫,可減小勞動(dòng)強(qiáng)度,并且避免注射帶來(lái)的疼痛和應(yīng)激反應(yīng),尤其對(duì)于幼齡魚(yú),口服免疫帶來(lái)的便利和安全更為顯著[22]。另外,口服免疫需要的免疫劑量遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于浸泡免疫,降低了經(jīng)濟(jì)成本[23]。本研究領(lǐng)域已見(jiàn)口服免疫預(yù)防IPN的報(bào)道,并取得了一定的效果。如張英[24]利用植物乳桿菌制備了IPNV(Sp血清型)VP2-VP3重組亞單位口服疫苗,Ahmadivand等[25]采用殼聚糖/三聚磷酸鹽(CS-TPP)納米顆粒和海藻酸鹽包被IPNV(Sp血清型)核酸疫苗制備了口服疫苗。圖4 免疫虹鱒CD4和CD8基因表達(dá)定量分析

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]一株虹鱒源傳染性胰腺壞死病病毒的分離與鑒定[J]. 熊權(quán)鑫,朱玲,汪開(kāi)毓,楊倩,賀揚(yáng),王二龍.  水產(chǎn)學(xué)報(bào). 2018(07)
[4]魚(yú)源植物乳桿菌表達(dá)IPNV VP2-VP3重組蛋白及其口服免疫程序[J]. 劉佳琪,高帥,段可馨,郭夢(mèng)婷,杜航,康海燕,張英,唐立杰,李一經(jīng),劉敏.  水產(chǎn)學(xué)報(bào). 2017(04)
[5]虹鱒傳染性胰臟壞死病毒的分離鑒定及聚類(lèi)分析[J]. 劉淼,徐黎明,趙景壯,曹永生,劉紅柏,尹家勝,盧彤巖.  大連海洋大學(xué)學(xué)報(bào). 2017(01)
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碩士論文
[1]傳染性胰腺壞死病毒VP2-VP3虹鱒腸道乳桿菌表達(dá)系統(tǒng)的免疫學(xué)評(píng)價(jià)[D]. 張英.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014



本文編號(hào)：3522332