魚類脂肪肝病使羅非魚容易遭受外源致病因子導(dǎo)致感染而大規(guī)模死亡,給養(yǎng)殖者造成極大的經(jīng)濟(jì)損失,阻礙了羅非魚養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。本實驗通過投喂高脂飼料建立羅非魚非酒精脂肪肝模型為基礎(chǔ),進(jìn)行了垂盆草對該類模型羅非魚保肝藥效作用的研究及對肝細(xì)胞和腎細(xì)胞細(xì)胞凋亡抑制作用的探討,為垂盆草在預(yù)防高脂投喂導(dǎo)致的脂肪肝病提供了實驗依據(jù)。根據(jù)前期研究,將實驗用的羅非魚平均分為3個組,每組設(shè)3個平行組。分別為正常組、高脂組、垂盆草組。每日的9:00am和5:00pm,進(jìn)行連續(xù)6周的投喂。3個組的羅非魚在投喂6周后隨機抽取每組15尾,采集血清、觀察臟器官的變化并采集肝胰臟組織樣本,檢測6周后實驗羅非魚臟器官損傷程度的主要生理生化指標(biāo),利用H.E染色技術(shù)觀察肝臟細(xì)胞的變化情況,判斷垂盆草針對以高脂飼料為基礎(chǔ)投喂羅非魚所致脂肪肝病的預(yù)防效果。采用TUNEL檢測方法對石蠟包埋過的三組羅非魚肝臟和腎臟切片通過熒光顯微鏡觀察細(xì)胞變化情況,通過計算得出凋亡率并作比較。所得結(jié)果如下:經(jīng)過6周的喂養(yǎng),高脂組羅非魚與基礎(chǔ)組相比,從血液指標(biāo)的測定上來看:高脂組提高了羅非魚血清中的AST、ALT、TG、CHOL、LDH、TBA 以及 MD... 

【文章來源】：廣西大學(xué)廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１細(xì)胞凋亡形態(tài)變化??

?ｒ??■—緣＝戀??圖１－１細(xì)胞凋亡形態(tài)變化??Ｆｉｇ．?１－１?Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ?ｃｈａｎｇｅｓ?ｏｆ?ａｐｏｐｔｏｓｉｓ??１．５．３細(xì)胞調(diào)亡的檢測方法??（１）?ＡｎｎｅｘｉｎＶ－ＦＩＴＣ結(jié)合膜表磷脂酰絲氨酸（ＰＳ）及ＡＶ／ＰＩ的實驗??檢測原理：正常ＰＳ是位于細(xì)胞膜的內(nèi)測區(qū)域，出現(xiàn)凋亡狀態(tài)情況時，ＰＳ外??翻，位于膜外側(cè)。使得ＡｎｎｅｘｉｎＶ－ＦＩＴＣ?（與死細(xì)胞結(jié)合）結(jié)合ＰＳ檢測細(xì)胞凋亡。??Ａｎｎｅｘｉｎ?Ｖ（膜聯(lián)蛋白Ｖ）是一種相對分子質(zhì)量為３５？３６?ｋｕ的Ｃａ２?＋依賴性磷脂結(jié)??合蛋白，能與ＰＳ高度結(jié)合。將ＡｎｎｅｘｉｎＶ用焚光素（ＦＩＴＣ）標(biāo)記，用標(biāo)記Ａｎｎｅｘｉｎ??Ｖ的作為熒光探針，利用工具熒光顯微鏡以及流式細(xì)胞儀可檢測凋亡的細(xì)胞。最??新研究推出了同位素標(biāo)記的Ａｎｎｅｘｉｎ?Ｖ［５３］，大幅度的提高了檢測的靈敏度。由于??壞死細(xì)胞的表面也可能出現(xiàn)ＰＳ，相繼又開發(fā)出Ａｎｎｅｘｉｎ?Ｖ聯(lián)合ＰＩ檢測法，可將??細(xì)胞分為正常、凋亡和壞死三種［５４］。正常的細(xì)胞不被Ａｎｎｅｘｉｎ?Ｖ及ＰＩ染色，而??調(diào)亡細(xì)胞Ａｎｎｅｘｉｎ?Ｖ染色呈強陽性、ＰＩ染色呈陰性或弱陽性

?Ｊ?耙核酸?９?Ｑ?ｐ??酶標(biāo)特異性抗體??圖１－２間接法原位雜交示意圖??Ｆｉｇ．?１－２?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｉｎｄｉｒｅｃｔ?ｉｎ?ｓｉｔｕ?ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ??１．５．４細(xì)胞凋亡的發(fā)生機制??（１）

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號：3501084