溶藻弧菌是海水養(yǎng)殖魚類的重要病原菌,其主要毒力因子為胞外堿性絲氨酸蛋白酶（Alkaline serine protease,Asp）。s RNA是一類廣泛存在于細菌體內(nèi)的非編碼小RNA分子,通過堿基互補配對作用對靶標基因進行轉(zhuǎn)錄后調(diào)控,參與細菌不同生理進程。前期工作在溶藻弧菌體內(nèi)鑒定得到5個可影響其堿性絲氨酸蛋白酶合成的s RNA分子,即Qrr1-5。為了闡明Qrr1-5調(diào)控堿性絲氨酸蛋白酶合成的分子機制,本文通過HPA顯色反應(yīng)檢測了Qrr1-5對Asp活性的影響,進一步利用Western Blot、Realtime PCR、翻譯融合、EMSA等手段深入研究了Qrr1-5對溶藻弧菌Asp表達調(diào)控的內(nèi)在分子作用機制。主要結(jié)果如下:（1）通過HPA定量分析的方法對溶藻弧菌不同菌株中Asp活性進行研究,結(jié)果發(fā)現(xiàn)Qrr1-5對Asp的活性均具有一定的抑制作用,其中Qrr1、Qrr3的結(jié)果最為顯著。采用Asp多克隆抗體對不同菌株中Asp蛋白的表達量進行檢測,實驗結(jié)果表現(xiàn)Qrr1-5抑制Asp的表達,且Qrr1、Qrr3的表現(xiàn)最為明顯,這與HPA所得結(jié)果一致。利用Lux R抗體分別檢測了?qrr1... 

【文章來源】：陜西科技大學(xué)陜西省

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

哈氏弧菌群體感應(yīng)模型

圖 1-2 霍亂弧菌群體感應(yīng)模型Fig. 1-2 Quorum sensing model in Vibrio cholerae群體感應(yīng)控制細菌的行為包括生物發(fā)光，生物被膜的形成和毒力因子[4 溶藻弧菌中非編碼 sRNA，Qrr1-5 與哈氏弧菌和霍亂弧菌群體感應(yīng)通路相，位于群體感應(yīng)系統(tǒng)的中心，是本研究的重點[4 9 - 51 ] 4 分子伴侶蛋白 Hfq 及 sRNAHfq 屬于 Sm-like（ LSm）蛋白家族，在古細菌中也有發(fā)現(xiàn)[5 2 ] Hfq 作為 sR分子伴侶蛋白，廣泛存在于革蘭氏陰性和陽性細菌中，具有較高的保守性穩(wěn)定性，大小為 70~110 個氨基酸不等，通常形成六聚體結(jié)構(gòu) Hfq 最初現(xiàn)于在大腸桿菌中的，因其為 RNA 噬菌體 Qβ 在大腸桿菌體內(nèi)復(fù)制所必需主因子而得名 (Host factor of the RNA bacteriophage Qβ, Hfq) Hfq 會主動變 RNAs 的二級結(jié)構(gòu)，也可被動地作為一個平臺，讓 sRNA 和 mRNAs 發(fā)用[5 3 ] 此外，Hfq 與 sRNA 的結(jié)合可使其免受細胞核糖核酸酶，例如 RN降解作用[5 4 ] 在交錯復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中，Hfq 是如何促使各種 RNA 分子

圖 1-3 Hfq 作用模式示意圖[53 ]Fig. 1-3 T he diagram of Hfq function mode[5 3 ] sRNA 伴侶蛋白亦可獨立發(fā)揮作用，其主要的作A）sRNA-Hfq 復(fù)合物與靶標 mRNA 核糖體結(jié)合止靶標 mRNA 的翻譯 （B）sRNA-Hfq 與 mRN出來，從而與核糖體結(jié)合，促進翻譯的進行 （復(fù)合物招募 RNaseE 和 mRNA 都被降解 （ D）免受 RNaseE 的降解 （E）Hfq 促進聚腺嘌呤聚繼而在 RNaseE 的作用下被降解 子伴侶蛋白，促進了 sRNA 分子與靶標 mRNA 細菌的各種重要生理活動 在許多致病菌中，例(Salmonella typhimurium) 腦膜炎奈瑟菌(Neisseri菌 (Burkholderia cepacia) 兔 熱 弗 朗 西 斯 氏路致病性大腸桿菌(uropathogenic E. coli)，Hfq 相關(guān)基因的表達具有重要調(diào)控作用[5 6 - 61 ]

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]溶藻弧菌群體感應(yīng)系統(tǒng)元件Hfq和LuxT的功能研究[D]. 劉歡.華東理工大學(xué) 2012



本文編號：3493150