中國(guó)鹵蟲(chóng)（Artemia sinica）是廣泛分布于我國(guó)內(nèi)陸鹽湖的一種甲殼生物,當(dāng)中國(guó)鹵蟲(chóng)遇到惡劣外部環(huán)境的時(shí)候,會(huì)形成滯育胚胎,以抵抗不良環(huán)境,當(dāng)環(huán)境條件適宜時(shí),胚胎利用合適的條件及在大量基因的調(diào)控下再次發(fā)育,休眠卵的滯育被解除。真核起始因子2B（eIF2B）不僅作為一種參與真核翻譯起始的重要的蛋白質(zhì),而且也是一種可以作為增強(qiáng)蛋白活性的鳥(niǎo)苷酸交換因子,它在真核翻譯起始因子2（eIF2）形成具有活性的三元復(fù)合物的過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。在這一過(guò)程中,eIF2B可以將eIF2上結(jié)合的非活性狀態(tài)的GDP,轉(zhuǎn)換為具有活性狀態(tài)的GTP,即eIF2·GTP的形式,使得eIF2可以重新發(fā)揮其功能并參與接下來(lái)一系列的細(xì)胞活動(dòng),進(jìn)而維持細(xì)胞環(huán)境穩(wěn)態(tài)。然而,到目前為止,eIF2B在中國(guó)鹵蟲(chóng)滯育胚胎重新發(fā)育過(guò)程中的調(diào)控作用,尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。本研究通過(guò)RACE技術(shù),首次成功克隆了中國(guó)鹵蟲(chóng)的As-eIF2B基因cDNA全長(zhǎng)序列,其總長(zhǎng)為1247bp,其中,開(kāi)放閱讀框的長(zhǎng)為915bp,5’非翻譯區(qū)長(zhǎng)為24bp以及3’非翻譯區(qū)長(zhǎng)為308bp,共編碼304個(gè)氨基酸,蛋白分子量為34KDa。生物信息學(xué)分析結(jié)果表明,As... 

【文章來(lái)源】：遼寧師范大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：56 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．１?ｅＩＦ２信號(hào)通路??Ｆｉｇ．?１．１?ｅＩＦ２?ｓｉｇｎａｌ?ｐａｔｈｗａｙ??

?中ａ鹵蟲(chóng)ｄ：Ｆ２Ｂ在滯育胚贈(zèng)重新發(fā)育過(guò)稈寧的調(diào)控作用???３．結(jié)果??３．?１?３５＜－ｅＩＦ２Ｂ基因全長(zhǎng)的克隆??３．?１．?１?Ａｓ－ｅＩＦ２Ｂ?ＥＳＴ?片段的克隆??使粗Ｐｒｉｍｅｒ?Ｐｒｅｍｉｅｒ５設(shè)計(jì)上下游＿弓丨物，以中國(guó)鹵蟲(chóng)Ｏｈ?ｃＤＮＡ為摸板，進(jìn)行ＰＣＲ反??應(yīng)，最終得到也－ｅＩＦ２Ｂ?ＥＳＴ片段序列（圖３．１）。??Ｍ?１??２０００ｂｐ?■??ｌＯＯＯｂｐ?Ｉ??７５０ｂｐ?■??５００ｂｐ?Ｉ??２５０ｂｐ?Ｉ??ｌＯＯｂｐ?Ｉ??圖３．１?Ａｙ－ｅＩＦ２Ｂ基因ＥＳＴ序列電泳圖Ｍ：?ＤＬ?２０００?Ｍａｒｋｅｒ；?１：?ＰＣＲ冃的條帶。??Ｆｉｇ．３．１?Ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｐｉｃｔｕｒｅ?ｏｆ?＾Ｌｙ－ｃＩＦ２Ｂ?ｇｅｎｅ?ｆｒａｇｍｅｎｔ?Ｍ：?ＤＬ?２Ｋ?Ｍａｒｋｅｒ；?１：?Ｔｈｅ?ｐｕｒｐｏｓｅ?ｏｆ?ＰＣＲ．??３．?１．２?Ｊｘ－ｅＴＦ２Ｂ基因３＇端序列的克隆??根據(jù)得到的也－ｅＩＦ２Ｂ的部分序列來(lái)設(shè)計(jì)３＇ＲＡＣＥＰＣＲ引物，進(jìn)行３＇－ＲＡＣＥ，最終獲??得含有ｐｏｌｙ?Ａ尾的３＇末端序列（圖３．２）。??Ｍ?１??２０００ｂｐ?Ｉ??ｌＯＯＯｂｐ?Ｉ??７５０ｂｐ??５００ｂｐ?Ｉ??２５０ｂｐ?Ｉ??ｌＯＯｂｐ?Ｉ??圖３．２滄－ｅＩＦ２Ｂ基因３？端序列電泳圖Ｍ：?ＤＬ?２０００?Ｍａｒｋｅｒ；?１：?ＰＣＲ目的條帶。??Ｆｉｇ．３．２?Ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｐｉｃｔｕｒｅ?ｏｆ＾４５，－ｅＩＦ２Ｂ?ｇｅｎｅ?３＇?ｆｒａｇｍｅｎｔ?Ｍ：?ＤＬ?２Ｋ?Ｍａｒｋｅｒ；?ｌ：Ｔｈｅ?ｐｕｒｐｏｓｅ?ｏｆ?ＰＣＲ．??２２??

?中ａ鹵蟲(chóng)ｄ：Ｆ２Ｂ在滯育胚贈(zèng)重新發(fā)育過(guò)稈寧的調(diào)控作用???３．結(jié)果??３．?１?３５＜－ｅＩＦ２Ｂ基因全長(zhǎng)的克隆??３．?１．?１?Ａｓ－ｅＩＦ２Ｂ?ＥＳＴ?片段的克隆??使粗Ｐｒｉｍｅｒ?Ｐｒｅｍｉｅｒ５設(shè)計(jì)上下游＿弓丨物，以中國(guó)鹵蟲(chóng)Ｏｈ?ｃＤＮＡ為摸板，進(jìn)行ＰＣＲ反??應(yīng)，最終得到也－ｅＩＦ２Ｂ?ＥＳＴ片段序列（圖３．１）。??Ｍ?１??２０００ｂｐ?■??ｌＯＯＯｂｐ?Ｉ??７５０ｂｐ?■??５００ｂｐ?Ｉ??２５０ｂｐ?Ｉ??ｌＯＯｂｐ?Ｉ??圖３．１?Ａｙ－ｅＩＦ２Ｂ基因ＥＳＴ序列電泳圖Ｍ：?ＤＬ?２０００?Ｍａｒｋｅｒ；?１：?ＰＣＲ冃的條帶。??Ｆｉｇ．３．１?Ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｐｉｃｔｕｒｅ?ｏｆ?＾Ｌｙ－ｃＩＦ２Ｂ?ｇｅｎｅ?ｆｒａｇｍｅｎｔ?Ｍ：?ＤＬ?２Ｋ?Ｍａｒｋｅｒ；?１：?Ｔｈｅ?ｐｕｒｐｏｓｅ?ｏｆ?ＰＣＲ．??３．?１．２?Ｊｘ－ｅＴＦ２Ｂ基因３＇端序列的克隆??根據(jù)得到的也－ｅＩＦ２Ｂ的部分序列來(lái)設(shè)計(jì)３＇ＲＡＣＥＰＣＲ引物，進(jìn)行３＇－ＲＡＣＥ，最終獲??得含有ｐｏｌｙ?Ａ尾的３＇末端序列（圖３．２）。??Ｍ?１??２０００ｂｐ?Ｉ??ｌＯＯＯｂｐ?Ｉ??７５０ｂｐ??５００ｂｐ?Ｉ??２５０ｂｐ?Ｉ??ｌＯＯｂｐ?Ｉ??圖３．２滄－ｅＩＦ２Ｂ基因３？端序列電泳圖Ｍ：?ＤＬ?２０００?Ｍａｒｋｅｒ；?１：?ＰＣＲ目的條帶。??Ｆｉｇ．３．２?Ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｐｉｃｔｕｒｅ?ｏｆ＾４５，－ｅＩＦ２Ｂ?ｇｅｎｅ?３＇?ｆｒａｇｍｅｎｔ?Ｍ：?ＤＬ?２Ｋ?Ｍａｒｋｅｒ；?ｌ：Ｔｈｅ?ｐｕｒｐｏｓｅ?ｏｆ?ＰＣＲ．??２２??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[5]真核細(xì)胞翻譯起始因子5A（eIF5A）研究進(jìn)展[J]. 雙寶,韓英鵬,李明,李文濱.  東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2010(08)
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碩士論文
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[2]ATF4在中國(guó)鹵蟲(chóng)滯育胚胎滯育解除過(guò)程中的作用及表達(dá)模式[D]. 張弘.遼寧師范大學(xué) 2018
[3]APC/C-CDC20在中國(guó)鹵蟲(chóng)胚胎滯育解除過(guò)程中的作用[D]. 欒虹.遼寧師范大學(xué) 2015
[4]As-Kip2在中國(guó)鹵蟲(chóng)滯育胚胎重啟動(dòng)過(guò)程中的作用[D]. 秦彤.遼寧師范大學(xué) 2015



本文編號(hào)：3490910