尼羅羅非魚（Oreochromis niloticus）是世界以及我國(guó)南方區(qū)域養(yǎng)殖的重要淡水魚類之一。近年來隨著我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖規(guī)模的擴(kuò)大,羅非魚病毒性和細(xì)菌性疾病多發(fā),造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失,嚴(yán)重影響該養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展,因此免疫防治成為解決這些病害問題的重要突破口。CD22屬是唾液酸結(jié)合免疫球蛋白樣凝集（Sigles）家族成員,為I型跨蛋白。該基因表達(dá)在成熟的B細(xì)胞膜上。CD22的細(xì)胞內(nèi)域包括免疫受體酪氨酸活化基序（Immunoreceptor tyrosine-based activation motif,ITAM）和免疫受體酪氨酸抑制基序（Immunoreceptor tyrosine-based inhibition motifs,ITIM）。CD22是一個(gè)黏附類的信號(hào)分子,與細(xì)胞間相互作用有關(guān),在B細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中起重要作用。本研究克隆的CD22基因開放閱讀框序列,對(duì)比其表達(dá)特征及功能進(jìn)行了分析。研究結(jié)果如下:1.本論文探索尼羅羅非魚（Oreochromis niloticus）CD22在免疫應(yīng)答中的作用。根據(jù)NCBI上公布的羅非魚CD22基因（記為On-CD22）（Gen Bank登... 

【文章來源】：廣東海洋大學(xué)廣東省

【文章頁(yè)數(shù)】：55 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

On-CD22基因克隆Fig.2-1CloningofOn-CD22

尼羅羅非魚CD22基因的克隆表達(dá)和功能研究16圖2-3On-CD22氨基酸序列保守結(jié)構(gòu)域Fig.2-3ConservativedomainwithinaminoacidsequenceofOn-CD222.4.2二級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)使用在線軟件ExPASy中的SOPMA程序預(yù)測(cè)On-CD22蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)，分析結(jié)果顯示（圖2-4）,該蛋白以無規(guī)則卷曲為主，其中α-螺旋占總鏈的6.74%，無規(guī)則卷曲占總鏈的52.53%，β-轉(zhuǎn)角占總鏈的3.37%，延伸鏈占總鏈的37.36%。利用在線軟件SWISS-MODEL對(duì)On-CD22蛋白進(jìn)行同源模建，獲其三級(jí)結(jié)構(gòu)模型，其最佳模型是5vKm.1.A（圖2-5），序列一致性為30.71%；另一模型是5lf5.1A,序列一致性為22.04%。圖2-4On-CD22蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)Fig.2-4PredictedsecondarystructureofOn-CD22圖注：藍(lán)色：α-螺；紅色：β-轉(zhuǎn)角；綠色：延伸鏈；紫色：無規(guī)則卷曲；Note：Blue：α-helix；Red：β-extend；Purple：randomcoil；Green：Extensionchain

廣東海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文17圖2-5On-CD22蛋白跨膜區(qū)三維結(jié)構(gòu)Fig.2-5Thethree-dimensionalstructuresoftransmembraneregionofOn-CD222.4.3On-CD22序列同源比對(duì)及進(jìn)化分析利用MegAlign軟件將克隆得到的On-CD22基因序列與伯氏樸麗魚、斑馬擬麗魚、大黃魚、尼加拉瓜湖始麗魚、布氏新亮鯛、奧利亞羅非魚、小家鼠、奈里樸麗魚、智人等與該基因序列進(jìn)行相似性比對(duì)，其中尼羅羅非魚與奧利亞羅非魚序列相似性高達(dá)96.53%,與奈里樸麗魚序列相似性為54.78%（表2-4）。利用MEGA7.0軟件采用鄰接法構(gòu)建羅非魚CD22基因系統(tǒng)進(jìn)化樹，結(jié)果顯示尼羅羅非魚與奧利亞羅非魚的親緣性最近，其次是奈里樸麗魚，而與小家鼠和智人等物種相距最遠(yuǎn)。其他物種的CD22氨基酸序列的鄰接法系統(tǒng)進(jìn)化樹（圖2-6）羅非魚與奧利亞羅非魚的CD22聚為1支，有較高的同源性。表2-4序列相似性Table2-4similaritysequence物種序列號(hào)序列相似性Maylandiazebra斑馬擬麗魚XP_004566890.189.57%Larimichthyscrocea大黃魚XP_019112342.254.7%Haplochromisburtoni伯氏樸麗魚XP_005943881.190.12%Archocentruscentrarchus尼加拉瓜湖始麗魚XP_030605075.172.01%Neolamprologusbrichardi布氏新亮鯛XP_006794956.190.12%Oreochromisaureus奧利亞羅非魚XP_031588969.196.53%Musmusculus小家鼠XP_006539553.132.5%Haplochromisnyererei奈里樸麗魚XP_005743322.190.12%Homosapiens智人NP_001265346.131.07%

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]大菱鲆（Scophthalmus maximus）5種趨化因子的克隆、鑒定及表達(dá)分析[D]. 劉洋.中國(guó)海洋大學(xué) 2007
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碩士論文
[1]NF-κB信號(hào)通路在B細(xì)胞惡性淋巴瘤中的發(fā)病機(jī)理和靶向治療進(jìn)展[D]. 曾勁舟.南昌大學(xué) 2017
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[3]CD22信號(hào)異常在免疫相關(guān)性全血細(xì)胞減少癥發(fā)病機(jī)制中作用的研究[D]. 武曉靜.天津醫(yī)科大學(xué) 2015
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[5]羅非魚免疫記憶及體外淋巴細(xì)胞增殖的研究[D]. 龐碧劍.廣東海洋大學(xué) 2012
[6]中國(guó)羅非魚出口貿(mào)易國(guó)際競(jìng)爭(zhēng)力研究[D]. 王斌.江南大學(xué) 2011
[7]牙鲆免疫系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)及其部分免疫細(xì)胞的功能研究[D]. 王衛(wèi)衛(wèi).中國(guó)海洋大學(xué) 2009



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