本研究黃河鯉（Cyprinus carpio）為試驗對象,在對黃河鯉金屬硫蛋白（Metallothionein,MT）基因的克隆及序列分析、黃河鯉MT基因的組織表達(dá)分析的基礎(chǔ)上通過實時熒光定量PCR（Real-time fluorescence quantitative PCR,RT-q PCR）監(jiān)測分析水體銅脅迫下黃河鯉MT基因表達(dá)變化規(guī)律,以期從分子生物學(xué)角度為水體銅污染監(jiān)測提供新的分子標(biāo)志物。主要研究結(jié)果如下:1、采用RT-PCR方法成功克隆了黃河鯉MT基因的編碼區(qū)（Coding sequence,CDS）序列,全長183bp,共編碼60個氨基酸,不含芳香族氨基酸和組氨酸,其中20個半胱氨酸（Cys）集中分布在肽鏈的氨基端（N-端）和羧基端（C-端）,具有脊椎動物MT典型的Cys-X-Cys、Cys-X-X-Cys、Cys-X-Cys-Cys保守序列結(jié)構(gòu)[1],預(yù)測分子量為6013D,理論等電點(diǎn)為8.38。經(jīng)核苷酸多序列比對與高身鯽（Carassius cuvieri）同源性最高,為94%,氨基酸序列比對與稀有鮈鯽（Gobiocypris rarus）同源性最高,為95%。黃河鯉... 

【文章來源】：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)河南省

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

MT啞鈴結(jié)構(gòu)模型

圖1.2 MT空間結(jié)構(gòu)Fig1.2 The spatial structure of MT.5 金屬硫蛋白的功能自發(fā)現(xiàn)MT至今，人們對其功能的研究從未間斷，但就目前所能了解的還很有限，M知的主要功能有：拮抗重金屬毒性、調(diào)節(jié)微量元素的運(yùn)輸、貯存及代謝、清除自由基、電離輻射、參與免疫調(diào)節(jié)等[33]。.5.1 拮抗金屬解毒金屬可誘導(dǎo)性是MT參與重金屬解毒的基礎(chǔ)，其豐富的巰基（-SH）可強(qiáng)力螯合有毒屬離子（Cd2+、Cu2+、Pb2+、Hg2+等）并將其排出體外從而終止對機(jī)體的毒害[66]。MTPb2+的能力是Zn2+的200倍，螯合Cd2+的能力是Pb2+的10倍。然而MT并非對所有能誘導(dǎo)成的金屬都有解毒作用，如Ag、Au、Ni、Co等[34]。Vasak等報道在體外試驗條件下，M大量巰基與重金屬結(jié)合能力順序為：Hg2+＞Cu2+、Ag2+、Bi3+＞Cd2+＞Pb2+＞Zn2+＞Co2+MT對重金屬解毒能力為Cd＞Zn＞Cu＞Hg，而對Fe幾乎無作用。Dallinger等[35]發(fā)現(xiàn)陸牛之所以能夠忍受高濃度Cu和Cd并在組織中大量積累，與其腸腺中MT的解毒功能及外MT的調(diào)節(jié)功能相關(guān)。Satoh等[36]研究發(fā)現(xiàn)，敲除了MT-1基因的小鼠對Cd2+暴露引起的膜

2.1 總RNA的提取經(jīng)微量分光光度計檢測，總RNA的OD260/280均在1.8-2.0之間且吸收單峰平滑良好，經(jīng)非變性凝膠電泳鑒定，28S條帶亮度為18S的2倍，表明總RNA純度和完整性良好，如圖2.1。圖2.1總RNA電泳圖Fig2.1The electrophoretic result of total RNA2.2 MT基因片段的PCR擴(kuò)增以提取的總RNA為模板進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，再用所得cDNA為模板用目的基因引物進(jìn)行RT-PCR反應(yīng)，得到一條特異性的擴(kuò)增條帶（圖2.2），用1.0%的瓊脂糖凝膠電泳檢測克隆所得黃河鯉MT基因片段的大小與引物設(shè)計時預(yù)測的相符。28S18S5S2000bp250bp100bp圖2.2.MT基因PCR產(chǎn)物電泳圖Fig2.2 Electrophoresis analysis of MT gene PCR products

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[3]水體銅對黃河鯉毒性的研究[D]. 馬莉芳.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[4]海州香薷（Elsholtzia haichowensis）金屬硫蛋白對煙草銅耐性的影響[D]. 齊穎.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
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本文編號：3482937