本論文以我國(guó)重要的海水養(yǎng)殖貝類長(zhǎng)牡蠣（Crassostrea gigas；又稱太平洋牡蠣）為研究對(duì)象，克隆了一個(gè)長(zhǎng)牡蠣酪氨酸酶基因，分析了其組織表達(dá)特性以及進(jìn)化地位，并開展了長(zhǎng)牡蠣基因家族的分類、系統(tǒng)進(jìn)化研究。本文的研究?jī)?nèi)容和主要研究結(jié)果如下：1長(zhǎng)牡蠣酪氨酸酶基因CgTyr2的克隆及其特性分析以長(zhǎng)牡蠣成貝為實(shí)驗(yàn)材料，利用長(zhǎng)牡蠣基因組數(shù)據(jù)庫(kù)，設(shè)計(jì)引物，得到中心片段后，經(jīng)過3’RACE和5’RACE，從長(zhǎng)牡蠣外套膜中擴(kuò)增出酪氨酸酶CgTyr2全長(zhǎng)基因。長(zhǎng)牡蠣酪氨酸酶基因CgTyr2的cDNA全長(zhǎng)為2563bp，開放閱讀框2100bp。編碼299個(gè)蛋白質(zhì)，分子量為77.4KDa，理論等電點(diǎn)為-3.3。BLAST分析表明，長(zhǎng)牡蠣酪氨酸序列與已知貝類的酪氨酸酶基因具有較高的同源性。系統(tǒng)發(fā)育分析顯示，血藍(lán)蛋白是由原始的酪氨酸酶基因復(fù)制并伴隨功能分化形成的。長(zhǎng)牡蠣以及其他軟體動(dòng)物的酪氨酸酶基因家族的形成可能是由酪氨酸酶在軟體動(dòng)物分化形成前后復(fù)制得到。熒光定量PCR分析顯示，長(zhǎng)牡蠣酪氨酸酶基因CgTyr2在各個(gè)組織中都有表達(dá)，其中外套膜外層表達(dá)量最高，可能與長(zhǎng)牡蠣角質(zhì)層的形成以及貝殼著色有關(guān)。2長(zhǎng)牡蠣... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)海洋大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 酪氨酸酶概述
        1.1 酪氨酸酶的分布
        1.2 酪氨酸酶的理化性質(zhì)和活性中心
        1.3 酪氨酸酶的生理作用
        1.4 酪氨酸酶催化生成黑色素的反應(yīng)過程
        1.5 酪氨酸酶的應(yīng)用和發(fā)展方向
            1.5.1 在環(huán)境保護(hù)方面的應(yīng)用
            1.5.2 酪氨酸酶在美容保健和醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用
            1.5.3 在食品加工與儲(chǔ)藏方面的應(yīng)用
            1.5.4 在制備生物傳感器方面的應(yīng)用
            1.5.5 在有機(jī)合成方面的應(yīng)用
    2 分子系統(tǒng)發(fā)生分析及在酪氨酸酶進(jìn)化分析中的應(yīng)用
        2.1 分子系統(tǒng)學(xué)的研究意義及發(fā)展簡(jiǎn)史
            2.1.1 分子系統(tǒng)學(xué)及相關(guān)概念
            2.1.2 分子系統(tǒng)學(xué)的研究意義
            2.1.3 分子系統(tǒng)學(xué)的發(fā)展簡(jiǎn)史
            2.1.4 分子系統(tǒng)學(xué)的研究方法
        2.2 分子系統(tǒng)進(jìn)化樹的構(gòu)建過程
        2.3 分子系統(tǒng)進(jìn)化樹的構(gòu)建方法
        2.4 酪氨酸酶基因家族的分類及系統(tǒng)發(fā)生分析
            2.4.1 酪氨酸酶的分類
            2.4.2 酪氨酸酶基因家族的系統(tǒng)發(fā)生分析
    3 貝類殼色遺傳育種
        3.1 雙殼貝類概述及經(jīng)濟(jì)價(jià)值
        3.2 貝類殼色遺傳育種
    4 本研究目的
第二章 長(zhǎng)牡蠣酪氨酸酶基因 CgTyr2 的全長(zhǎng)克隆、表達(dá)及序列分析
    1 引言
    2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)所用引物
        2.2 主要化學(xué)試劑及試劑配置
            2.2.1 試劑來(lái)源
            2.2.2 主要試劑的配置
        2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.4 實(shí)驗(yàn)前操作
        2.5 長(zhǎng)牡蠣各組織的分離
        2.6 長(zhǎng)牡蠣總 RNA 的提取過程
        2.7 第一鏈 cDNA 的合成及檢測(cè)
            2.7.1 第一鏈 cDNA 的合成
            2.7.2 反轉(zhuǎn)錄檢測(cè)
        2.8 長(zhǎng)牡蠣酪氨酸酶基因 CgTyr2 核心片段的獲得
        2.9 長(zhǎng)牡蠣酪氨酸酶基因 CgTyr23’ RACE
        2.10 長(zhǎng)牡蠣酪氨酸酶基因 CgTyr25’ RACE
        2.11 長(zhǎng)牡蠣酪氨酸酶基因 CgTyr2 的結(jié)構(gòu)和特性分析
        2.12 長(zhǎng)牡蠣酪氨酸酶基因 CgTyr2 進(jìn)化樹構(gòu)建
        2.13 長(zhǎng)牡蠣酪氨酸酶基因 CgTyr2 的組織特異性表達(dá)
            2.13.1 不同組織 cDNA 的獲得
            2.13.2 定量 RT-PCR
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析與討論
        3.1 長(zhǎng)牡蠣酪氨酸酶基因 CgTyr2 cDNA 序列分析
        3.2 酪氨酸酶序列系統(tǒng)進(jìn)化樹分析
        3.3 酪氨酸酶基因在長(zhǎng)牡蠣不同組織中的定量分析
第三章 長(zhǎng)牡蠣部分酪氨酸酶基因家族中心片段的克隆
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)所用引物
        1.2 長(zhǎng)牡蠣酪氨酸酶基因 14TYR，16TYR，75TYR，26TYR 核心片段獲得
    2 結(jié)果與討論
第四章 長(zhǎng)牡蠣酪氨酸酶基因家族的分類和系統(tǒng)發(fā)生分析
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 酪氨酸酶氨基酸序列的獲得
        2.2 長(zhǎng)牡蠣酪氨酸酶基因家族結(jié)構(gòu)分析
        2.3 長(zhǎng)牡蠣酪氨酸酶基因家族氨基酸序列分析
        2.4 長(zhǎng)牡蠣酪氨酸酶基因家族進(jìn)化分析
    3 結(jié)果與分析
        3.1 長(zhǎng)牡蠣酪氨酸酶基因家族所在 Scaffold 分析
        3.2 長(zhǎng)牡蠣酪氨酸酶基因家族的分類與保守區(qū)域分析
        3.3 長(zhǎng)牡蠣酪氨酸酶基因家族的進(jìn)化分析
    4 討論
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷
碩士期間學(xué)術(shù)成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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